Name: Arzneimittelinduzierte Seneszenz in Leberzellen fördert die Polarisation von M2-Makrophagen: Implikationen für die Tyrosinkinase-Inhibitor-assoziierte Hepatotoxizität (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Erfahren Sie, wie Tyrosinkinase-Inhibitoren Seneszenz in Hep G2-Zellen induzieren und das SASP-Mediatorensekret die M2-Makrophagenpolarisation beeinflusst. Diese Methode erklärt Mechanismen der arzneimittelinduzierten Hepatotoxizität.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>HepG2-Zelllinie</td><td>NCCS</td><td></td><td>Adhärente Zelllinie</td></tr><tr><td>RAW264.7-Zelllinie</td><td>NCCS</td><td></td><td>Adhärente Zelllinie</td></tr><tr><td>DMEM (Dulbaccos modifiziertes Eagle Medium)</td><td>Himedia</td><td>AT066</td><td>Hoher Blutzucker, Pulver</td></tr><tr><td>MEM (Modified Eagle Medium)</td><td>Gibco</td><td>611100-053</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>PBS (Phosphatpuffer-Kochsalzlösung)</td><td>Himedia</td><td>TS1101</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA-Lösung</td><td>Himedia</td><td>TCL007</td><td>Lösung</td></tr><tr><td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td><td>Himedia</td><td>RM1112</td><td>Flüssigkeit</td></tr><tr><td>MTT Dye</td><td>Himedia</td><td>TC191</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Lapatinib</td><td>Selleckchem</td><td>S2111</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Neratinib</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>18404</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>DMSO (Dimethylsulfoxid)&nbsp;</td><td>Himedia</td><td>TC185</td><td>Lösung</td></tr><tr><td>Formaldehyd&nbsp;</td><td>Rankem</td><td>F0080</td><td>Lösung</td></tr><tr><td>Glutaraldehyd</td><td>Sigma-aldrich</td><td>340855</td><td>Lösung</td></tr><tr><td>Zitronensäuremonohydrat, rein</td><td>Himedia</td><td>GRM229</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Natriumphosphat dibasisch wasserfrei &nbsp;</td><td>Himedia</td><td>MB024</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Kaliumferrocyanid, K4[Fe(CN)6]</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>P-236-500</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumferricyanid, K3[Fe(CN)6]</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>P-232-500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SRL</td><td>41721</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>MgCl2-Hexahydrat</td><td>Himedia</td><td>GRM-1068</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>X-Gal</td><td>SRL</td><td>45904</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Lipopolysaccharid</td><td>Sigma-aldrich</td><td>L6529</td><td></td></tr><tr><td>Menschliches rekombinantes Interferon-&-Gamma;</td><td>Himedia</td><td>CF040-20MCG</td><td></td></tr><tr><td>Zell-ROX tiefrotes Reagenz</td><td>Thermofischer-Wissenschaftler</td><td>C10422</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>MitoTRACKER Grün</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>1842298</td><td>Pulver</td></tr><tr><td>Anti-ARG1-Antikörper</td><td>Affinität</td><td>DF6657</td><td>Lösung, berechnete MW – 35 kDa, beobachtete MW – 65 kDa</td></tr><tr><td>Anti-NOS2-Antikörper</td><td>Cloudo Klonkorporation.</td><td>PAA837Hu01</td><td>Lösung, berechnete MW – 130 kDa, beobachtete MW – 65 kDa</td></tr><tr><td>Anti-iNOS-Antikörper</td><td>Affinität</td><td></td><td>Lösung, berechnete MW – 130 kDa, beobachtete MW – 120 kDa</td></tr><tr><td>Anti-GAPDH-Antikörper</td><td>Biobharati LifeScience Pvt.Ltd</td><td>BB-AB0060</td><td>Lösung</td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen-Antikörper</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>10004301</td><td>Lösung</td></tr><tr><td>Nitrocellulosemembran &nbsp;</td><td>Merck Millipore Ltd.&nbsp;</td><td>HATF00010 (Produktnummer)</td><td></td></tr><tr><td>femtoLUCENTTMPLUS HRP</td><td>G Bioscience&nbsp;</td><td>786-003</td><td></td></tr><tr><td>60-mm-Schüsseln</td><td>NUCK</td><td>150462</td><td></td></tr><tr><td>96-Brunnen-Platte,&nbsp;</td><td>NUCK</td><td>165306</td><td></td></tr><tr><td>Zellkultur-Inkubator&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>371</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop&nbsp;</td><td>1. LEICA Invertiertes Mikroskop &nbsp; &nbsp; 2. Nikon Konfokalmikroskop&nbsp;</td><td>1. DMIL LED&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2. Ti2E, A1R</td><td>&nbsp; Beide haben Modellnummern</td></tr><tr><td>iBright Bildgebungssystem</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>CL1500 (Modellnummer)</td><td></td></tr><tr><td>Kennzeichenleser</td><td>Bio-RAD</td><td>iMark-Mikroplattenleser</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Sorvall ST 8R (Modellnummer)</td><td></td></tr></tbody></table>

arzneimittelinduzierte seneszenz in leberzellen fördert die polarisation von m2-makrophagen: implikationen für die tyrosinkinase-inhibitor-assoziierte hepatotoxizität

Drug-Induced Senescence in Liver Cells Promotes M2 Macrophage Polarization: Implications for Tyrosine Kinase Inhibitor-Associated Hepatotoxicity

Arzneimittelinduzierte Seneszenz in Leberzellen fördert die Polarisation von M2-Makrophagen: Implikationen für die Tyrosinkinase-Inhibitor-assoziierte Hepatotoxizität

Lapatinib and neratinib are tyrosine kinase inhibitors (TKIs) approved for treating HER2-positive metastatic breast cancer, but their clinical use is ...

drug-induced-senescence-liver-cells-promotes-m2-macrophage

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Forschung

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Cancer Research

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Zelluläre Seneszenz, der irreversible Zustand der Zellzyklusarrest, kann durch verschiedene Zellspannungen induziert werden. Hier beschreiben wir Protokolle zelluläre Seneszenz und Methoden zu induzieren Marker für Seneszenz zu beurteilen.

Techniken zur Induktion und Quantify Zelluläre Seneszenz

Zelluläre Seneszenz ist der Schlüsselfaktor bei der Entwicklung chronischer altersbedingter Pathologien. Die Identifizierung von Therapeutika, die auf seneszente Zellen abzielen, verspricht, eine gesunde Alterung zu verlängern. Hier präsentieren wir einen neuartigen Test zur Identifizierung von Senotherapeutika auf der Grundlage der Messung der seneszenzassoziierten Galactosidase-Aktivität in Einzelzellen.

SA--Galactosidase-basierter Screening-Test zur Identifizierung von Senotherapeutischen Arzneimitteln

Hier beschreiben wir die Entwicklung eines klinisch relevanten murinen Modells von Leberkrebs, das die typischen Immunmerkmale von hepatozellulärem Krebs (HCC) rekapituliert.

Ein onkogenes Hepatozyten-induziertes orthotopisches Mausmodell von hepatozellulärem Krebs, der bei der Einstellung von Leberentzündungen und Fibrose entsteht

M2-ähnliche tumorassoziierte Makrophagen (TAM) sind mit Tumorprogression und schlechter Prognose bei Krebs assoziiert. Dieses Protokoll dient als detaillierte Anleitung, um THP-1-Monozyten-ähnliche Zellen innerhalb von 14 Tagen reproduzierbar in M2-ähnliche Makrophagen zu differenzieren und zu polarisieren. Dieses Modell ist die Grundlage, um die entzündungshemmende Wirkung von TAM in der Tumormikroumgebung zu untersuchen.

Makrophagendifferenzierung und Polarisation in einen M2-ähnlichen Phänotyp unter Verwendung einer humanen Monozyten-ähnlichen THP-1-Leukämie-Zelllinie

Hier stellen wir eine auf Durchflusszytometrie basierende Methode zur Visualisierung und Quantifizierung mehrerer seneszenzassoziierter Marker in einzelnen Zellen vor.

Simultane Bildgebung und Durchflusszytometrie-basierte Detektion mehrerer fluoreszierender Seneszenzmarker in therapieinduzierten seneszenten Krebszellen

Dieses Protokoll bietet eine reflektierte-licht-konfokale Mikroskopie zur objektiven, einzelzelligen Detektion der seneszenzassoziierten Beta-Galactosidase (SA-β-gal) Aktivität in der stromalen Gefäßfraktion, die aus menschlichem Fettgewebe isoliert ist. Die Methode ist mit der Immunzytochemie kompatibel, beinhaltet pH-Kontrollen zur quantitativen Beurteilung und bietet zudem eine sensiblere und weniger subjektive Alternative zur herkömmlichen SA-β-gal-Färbung.

Seneszenzdetektion mit reflektiertem Licht in der fettreichen stromalen Gefäßfraktion

Diese Methode untersucht, wie seneszente Hautfibroblasten gesunde Fibroblasten beeinflussen. Die Seneszenz wird durch UVB-Exposition induziert, und das konditionierte Medium wird auf normale Fibroblasten angewendet. Sie hilft dabei, bioaktive Verbindungen zu bewerten, die auf veränderte Zell-zu-Zell-Kommunikation bei der Hautalterung abzielen.

Neue Kombination von Antioxidantien zur Wiederherstellung gesunder interzellulärer Kommunikation in einem in-vitro-Modell unter Verwendung eines konditionierten Mediums aus alter Zellen

Um das bösartige Verhalten von Krebs zu verstehen, müssen genaue Modelle erstellt werden, wie Tumorzellen mit Komponenten der Tumormikroumgebung, wie z.B. Makrophagen, interagieren. Hier beschreiben wir zwei Methoden zur Untersuchung der Interaktion von Glioblastomzellen mit tumorassoziierten Makrophagen und Mikroglia, bei denen die Wirkung auf die Glioblastominvasion bewertet wird.

Cokultur Assays zur Untersuchung Makrophagen und Mikroglia Stimulation von Glioblastom-Invasion

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für die Antikörper-Arrays zu Veränderungen im Signalwege in verschiedenen zellulären Modellen zu identifizieren. Diese Veränderungen, verursacht durch Medikamente/Hypoxie/ultra-violet Licht/Strahlung oder durch Überexpression/Herabregulation/Knockouts, sind wichtig für die verschiedenen Krankheitsmodelle und können angeben, ob eine Therapie wirksam werden oder Mechanismen der Drogen identifizieren kann Widerstand.

Beurteilung der Widerstandsfähigkeit gegen Tyrosin-Kinase-Inhibitoren durch eine Befragung von Signal Transduction Bahnen durch Antikörper-Arrays

Dieser Artikel stellt einen nützlichen In-vitro-Assay dar, um die Fähigkeit des konditionierten Mediums aus Tumorzellen zu bewerten, Makrophagen anzuziehen.

In Vitro-Assay zur Untersuchung der Tumor-Makrophage-Interaktion

Erfahren Sie, wie Tyrosinkinase-Inhibitoren Seneszenz in Hep G2-Zellen induzieren und das SASP-Mediatorensekret die M2-Makrophagenpolarisation beeinflusst. Diese Methode erklärt Mechanismen der arzneimittelinduzierten Hepatotoxizität.

Arzneimittelinduzierte Seneszenz in Leberzellen fördert die Polarisation von M2-Makrophagen: Implikationen für die Tyrosinkinase-Inhibitor-assoziierte Hepatotoxizität (Video) | JoVE Journal

Arzneimittelinduzierte Seneszenz in Leberzellen fördert die Polarisation von M2-Makrophagen: Implikationen für die Tyrosinkinase-Inhibitor-assoziierte Hepatotoxizität

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