Name: Entwicklung von mausabgeleiteten Organoidlinien aus Epithelzellen des Eileiters für die Modellierung des hochgradigen serösen Ovarialkarzinoms (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Erfahren Sie die Entwicklung syngener Maus-Organoidmodelle aus Eileiterepithelzellen zur Untersuchung hochgradiger seröser Ovarialkarzinome. Diese Methode ermöglicht die Analyse von Tumor-Immun-Interaktionen in vivo.

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<ol><li>Korch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+profiling+analysis+of+endometrial+and+ovarian+cell+lines+reveals+misidentification%2C+redundancy+and+contamination%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">DNA profiling analysis of endometrial and ovarian cell lines reveals misidentification, redundancy and contamination.</a> Gynecol. Oncol. 127 (1), 241-248 (2012).</li>
<li>Domcke, S., Sinha, R., Levine, D. A., Sander, C., Schultz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+cell+lines+as+tumour+models+by+comparison+of+genomic+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Evaluating cell lines as tumour models by comparison of genomic profiles.</a> Nat Commun. 4, 2126(2013).</li>
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<li>Xie, Y., Park, E. -S., Xiang, D., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organoid+culture+reveals+enrichment+of+organoid-forming+epithelial+cells+in+the+fimbrial+portion+of+mouse+fallopian+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term organoid culture reveals enrichment of organoid-forming epithelial cells in the fimbrial portion of mouse fallopian tube.</a> Stem Cell Res. 32, 51-60 (2018).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2, 94(2022).</li>
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<li>Homology-directed repair using the Alt-R CRISPR-Cas9 System and HDR Donor Oligos. , Integrated DNA Technologies (IDT). 
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<li>Lisio, M. -A., Fu, L., Goyeneche, A., Gao, Z., Telleria, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-grade+serous+ovarian+cancer%3A+Basic+sciences%2C+clinical+and+therapeutic+standpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-grade serous ovarian cancer: Basic sciences, clinical and therapeutic standpoints.</a> Int J Mol Sci. 20 (4), 952(2019).</li>
<li>Silva-Pedrosa, R., Salgado, A. J., Ferreira, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revolutionizing+disease+modeling%3A+The+emergence+of+organoids+in+cellular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Revolutionizing disease modeling: The emergence of organoids in cellular systems.</a> Cells. 12 (6), 930(2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25 % Trypsin, 0,1 % EDTA im HBSS ohne Kalzium, Magnesium und Natriumbicarbonat</td><td>Corning</td><td>25053CI</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Tocris Bioscience</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>Fortgeschrittenes DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12-634-028</td><td></td></tr><tr><td>Im Alter von C57 BL/6J (weiblich)</td><td>Das Jackson-Labor</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>AllPrep DNA/RNA Mini-Kit</td><td>QIAGEN</td><td>80204</td><td>Für DNA/RNA-Extraktion</td></tr><tr><td>Alt-R S.p. Cas9-GFP V3</td><td>Integrierte DNA-Technologien</td><td>10008100</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ki67-Antikörper</td><td>Abcam</td><td>ab15580</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip-System</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>12020-00</td><td>Für den Wundverschluss nach IBI</td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50x), serumfrei</td><td>Gibco</td><td>17-504-001</td><td></td></tr><tr><td>Blastizidin HCl (10 mg/mL) 50 mg</td><td>InvivoGen</td><td>ANT-BL-05</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserum-Albumin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RLT Plus</td><td>QIAGEN</td><td>1053393</td><td>Zellen vor der DNA/RNA-Extraktion zu lysieren</td></tr><tr><td>Zellwiederherstellungslösung</td><td>Corning</td><td>354253</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase/Hyaluronidase</td><td>STEMCELL-Technologien</td><td>07912</td><td></td></tr><tr><td>CoraLite 594-Phalloidin (rot)</td><td>Proteintech</td><td>PF00003</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas 15CIR-1</td><td>Fisherbrand</td><td>12-545-83</td><td></td></tr><tr><td>Deckglas 24 mm & spitz; 40 mm-1</td><td>Fisherbrand</td><td>12-544-12</td><td></td></tr><tr><td>CTS (Cell Therapy Systems) N-2 Supplement</td><td>Gibco</td><td>A1370701</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonuklease I (DNAse I) aus der bunter Bauchspeicheldrüse</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>Difco Magermilch</td><td>Becton Dickinson</td><td>232100</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>STEMCELL-Technologien</td><td>07913</td><td></td></tr><tr><td>DMEM mit L-Glutamin, 4,5 g/L Glukose und Natriumpyruvat</td><td>Corning</td><td>10013CV</td><td></td></tr><tr><td>DNase I rekombinant, RNase-frei</td><td>Roche</td><td>04716728001</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos phosphatgepufferte Lösung</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 – Keramikbeschichtete Pinzette</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>11252-50</td><td>Zur Eileiter-Dissektion</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum</td><td>Corning</td><td>35-010-CV</td><td>Hitze-Inaktivieren bei 56 ��C; C für 60 Minuten.</td></tr><tr><td>Feine Schere – ToughCut</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>14058-09</td><td>Für Eileiterentnahme und IBI-Schnitt</td></tr><tr><td>Geneticin-selektives Antibiotikum (G418-Sulfat) (50 mg/mL)</td><td>Gibco</td><td>10131027</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX-Supplement (100x)</td><td>Gibco</td><td>35-050-061</td><td></td></tr><tr><td>Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H+L) kreuzadsorbierter sekundärer Antikörper, Cyanin3</td><td>Invitrogen</td><td>A10520</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>11053-10</td><td>Für den Umgang mit Gewebe</td></tr><tr><td>HEPES-Puffer</td><td>Corning</td><td>25060CI</td><td></td></tr><tr><td>Humanes R-Spondin-1 rekombinantes Protein</td><td>PeproTech</td><td>120-38</td><td></td></tr><tr><td>Insulinspritze, U-100 0,5 mL 0,36 mm (28 G) x 12,7 mm (1/2")</td><td>BD</td><td>BD329461</td><td></td></tr><tr><td>Insulin-Transferrin-Selen (ITS -G) (100x)</td><td>Gibco</td><td>41-400-045</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM (100x)</td><td>Gibco</td><td>25-030-081</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel GFR Basementmembranmatrix</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>BMM</td></tr><tr><td>Maus EGF Rekombinantes Protein</td><td>PeproTech</td><td>315-09</td><td></td></tr><tr><td>Maus FGF-basisches rekombinantes Protein</td><td>PeproTech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinantes Rekombinantes Protein von Maus-Noggin</td><td>PeproTech</td><td>250-38</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinantes Wnt-3a-Protein der Maus</td><td>PeproTech</td><td>315-20</td><td></td></tr><tr><td>N2-Ergänzung</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-Acetylcystein-Amid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A0737</td><td></td></tr><tr><td>Neon NxT Elektroporationssystem</td><td>Invitrogen</td><td>NEON1S</td><td>Für die CRISPR-Cas9-Elektroporation</td></tr><tr><td>Neon NxT Elektroporationssystem 10-&mu; L-Kit mit 1-Kanal-Röhren</td><td>Invitrogen</td><td>N1025</td><td>Verbrauchsmaterialien für Elektroporation, einschließlich Genom-Editierungspuffer</td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N3376</td><td></td></tr><tr><td>Normales Mausserum</td><td>Invitrogen</td><td>10410</td><td></td></tr><tr><td>Normales Rattenserum</td><td>STEMCELL-Technologien</td><td>13551</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I reduziertes Serummedium</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>PAX8 Polyklonaler Antikörper</td><td>Proteintech</td><td>10336-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10.000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Selectfrost 25 mm & akut; 75 mm & akut; 1,0 mm</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP151</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1x), kein rotes Phenol</td><td>Gibco</td><td>12-604-013</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Scissors – 4 mm Schneide</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>15019-10</td><td>Zur Eileiter-Dissektion</td></tr><tr><td>Y27632</td><td>STEMCELL-Technologien</td><td>72304</td><td>Rho-kinase (ROCK) Inhibitor&nbsp;</td></tr></tbody></table>

entwicklung von mausabgeleiteten organoidlinien aus epithelzellen des eileiters für die modellierung des hochgradigen serösen ovarialkarzinoms

Development of Mouse-Derived Organoid Lines from Fallopian Tube Epithelial Cells for High Grade Serous Ovarian Carcinoma Modeling

Entwicklung von mausabgeleiteten Organoidlinien aus Epithelzellen des Eileiters für die Modellierung des hochgradigen serösen Ovarialkarzinoms

Effective modeling of diseases in realistic environments is crucial to improve our understanding of diverse pathologies. In this aspect, organoids offer a ...

development-mouse-derived-organoid-lines-from-fallopian-tube

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Einem orthotopen Modell des seröse Ovarialkarzinom in immunkompetenten Mäusen für In vivo Tumor Imaging und Überwachung der Tumor Immunantworten

Eine Methode zur Mikrodissektion des Eileiters der Maus, die die Sammlung der einzelnen Segmente unter Beibehaltung der RNA-Integrität ermöglicht, wird vorgestellt. Darüber hinaus wird ein nicht-enzymatisches oviduktales Zelldissoziationsverfahren beschrieben. Die Methoden eignen sich für die anschließende Gen- und Proteinanalyse der funktionell unterschiedlichen Eileitersegmente und dissoziierten Eileiterzellen.

Mikrodissektion und Dissoziation des Murinen Eileiters: Identifizierung einzelner Segmente und Einzelzellisolierung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Etablierung von Endometrium-Epithel-Organoiden der Maus für die Genexpression und histologische Analysen.

Etablierung von 3D-Endometrium-Organoiden aus der Gebärmutter der Maus

In diesem Protokoll wird ein Ansatz zur Erzeugung von Epithelorganoiden aus primärem Normal- und Tumorbrustgewebe durch differentielle Zentrifugation erörtert. Darüber hinaus sind Anleitungen für die dreidimensionale Kultivierung sowie die Immunfluoreszenz-Bildgebung von eingebetteten Organoiden enthalten.

Erzeugung und Bildgebung von Epithelorganoiden von Mäusen und Menschen aus normalem und Tumor-Brustgewebe ohne Passaging

Patient-derived Organoids (PDO) sind eine dreidimensionale (3D) Kultur, die die Tumorumgebung in vitro nachahmen kann. Bei hochgradigem serösem Ovarialkarzinom stellen PDOs ein Modell zur Untersuchung neuartiger Biomarker und Therapeutika dar.

Erzeugung und Kultivierung von hochgradigen serösen Ovarialkarzinom-Organoiden, die von Patientinnen stammen

Dieses Protokoll beschreibt die Mikroinjektion und In-vivo-Elektroporation für die regional eingeschränkte CRISPR-vermittelte Genom-Editierung im Eileiter der Maus.

Somatic Genom-Engineered Mausmodelle mit In-vivo-Mikroinjektion und Elektroporation

Dieses Protokoll bietet einen systematischen Rahmen für die Etablierung von Eierstockkrebs-Organoiden aus verschiedenen Krankheitsstadien und adressiert die Herausforderungen der patientenspezifischen Variabilität, um die Ausbeute zu erhöhen und eine robuste langfristige Expansion für nachfolgende Anwendungen zu ermöglichen. Es umfasst detaillierte Schritte für die Gewebeverarbeitung, die Aussaat, die Anpassung der Medienanforderungen und die Immunfluoreszenzfärbung.

Strategie für das Biobanking von Ovarialkarzinom-Organoiden: Berücksichtigung der Heterogenität zwischen Patienten über histologische Subtypen und Krankheitsstadien hinweg

Dieses Protokoll beschreibt die Etablierung dreidimensionaler (3D) Gewebeorganoide aus primären humanen Zellen des Oberflächenepithels der Eierstöcke (hOSE). Das Protokoll umfasst die Isolierung von hOSE aus frisch entnommenen Eierstöcken, die zelluläre Expansion des hOSE, Kryokonservierungs- und Auftauverfahren und die Ableitung von Organoiden. Immunfluoreszenz, quantitative Analyse und die Präsentation des Nutzens als Screening-Plattform sind enthalten.

Organoide des menschlichen Oberflächenepithels der Eierstöcke als Plattform zur Untersuchung der Geweberegeneration

Dieses Protokoll beschreibt eine eintägige Methode zur Isolierung von humanen Eileiterepithelzellen. Isolierte Epithelzellen können in 2-dimensionalen (2D) Kulturen plattiert oder in Einzelzellsuspensionen dissoziiert und in nachgelagerten Experimenten, einschließlich Durchflusszytometrie und Einzelzell-RNA-Sequenzierung, verwendet werden.

Eine effiziente Methode zur Extraktion von Epithelien aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen

Wir beschreiben Methoden zur Isolierung somatischer maus-ovarialer Zellen aus einem stroma-angereicherten Anteil des Eierstocks und zur Erzeugung maus-ovarialer somatischer Organoide mittels eines gerüstfreien Ansatzes.

Untersuchung des Ovarialmikroumfelds: Methoden zur Isolierung, 2D-Kultur und organoiden Kultur somatischer Maus-Ovarialzellen

Erfahren Sie die Entwicklung syngener Maus-Organoidmodelle aus Eileiterepithelzellen zur Untersuchung hochgradiger seröser Ovarialkarzinome. Diese Methode ermöglicht die Analyse von Tumor-Immun-Interaktionen in vivo.

Entwicklung von mausabgeleiteten Organoidlinien aus Epithelzellen des Eileiters für die Modellierung des hochgradigen serösen Ovarialkarzinoms (Video) | JoVE Journal

Entwicklung von mausabgeleiteten Organoidlinien aus Epithelzellen des Eileiters für die Modellierung des hochgradigen serösen Ovarialkarzinoms

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