Name: Vorbereitung von Schweineaugen für die konfokale Reflexionsmikroskopie zur Visualisierung des glasartigen Kollagenfasernetzwerks (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Erfahren Sie die Präparation von Schweineaugen für die konfokale Reflexionsmikroskopie zur Visualisierung des Kollagenfasernetzwerks im Glaskörper. Diese Methode ermöglicht artefaktfreie Bildgebung zur Untersuchung von Netzhautablösungen.

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<ol><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreous+and+vision+degrading+myodesopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Vitreous and vision degrading myodesopsia.</a> Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).</li>
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<li>Bredfeldt, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+segmentation+of+collagen+fibers+from+second-harmonic+generation+images+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer.</a> J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).</li>
<li>Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+quantifying+fibrillar+collagen+alignment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for quantifying fibrillar collagen alignment.</a> Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).</li>
<li>Wershof, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FIJI+macro+for+quantifying+pattern+in+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix.</a> Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).</li>
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<li>Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+rheology+of+type+I+collagen+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Size-dependent rheology of type I collagen networks.</a> Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).</li>
<li>Raub, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+collagen+gel+microstructure+and+mechanics+using+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy.</a> Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarose I</td><td>VWR</td><td>0710-500G</td><td></td></tr><tr><td>Allzweck-Silikon-1-Dichtmasse, klar</td><td>GE</td><td>2795576</td><td></td></tr><tr><td>Zelluloseschwamm (Weck-Cel Eye Spear)</td><td>Biber – Visitec</td><td>000865</td><td></td></tr><tr><td>Maßgeschneiderter 3-Zink-Sockel&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Maßgeschneiderter Adapter zur Montage von großem Deckglas</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Großes Deckglas, 1,42" x&nbsp; 2,36" Nr. 1</td><td>Ted Pella</td><td>260460-100</td><td></td></tr><tr><td>Lego (klassische Grundplatte, 1 x 8 Felder, 1 x 8 Steine, 1 x 6 Platte)</td><td>Lego</td><td>11023, 3008, 3666, 4162</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotome-Klingen (High Profile)&nbsp;</td><td>Lieca Biosystems</td><td>14035838926</td><td></td></tr><tr><td>Olympus UPlanSApo 30x Silikonobjektiv</td><td>Olymp</td><td>UPLSAPO30XS</td><td></td></tr><tr><td>Silikon große Eiswürfelschale (Samuelworld)</td><td>Amazonas</td><td>713243280060</td><td></td></tr><tr><td>Gewebetücher (Kimwipes)&nbsp;</td><td>Kimberly Clark</td><td>34120</td><td></td></tr></tbody></table>

vorbereitung von schweineaugen für die konfokale reflexionsmikroskopie zur visualisierung des glasartigen kollagenfasernetzwerks

Preparing Porcine Eyes for Confocal Reflectance Microscopy to Visualize the Vitreous Collagen Fiber Network

Von drei jungen erwachsenen Schweinen (einem 4 Monate alten Weibchen, einem 5 Monate alten Männchen und einem 6 Monate alten Weibchen) wurde jeweils ein Auge aufgenommen, nachdem das Auge in einer axialen Ebene durch den unteren Limbus geschnitten worden war. Es wurden sechs Bildgebungspositionen in der X-Y-Schnittebene im Abstand von 4 mm aufgenommen. An jeder Bildgebungsposition wurde ein zusammenhängendes 4 x 4-Raster mit Bildern von 70 μm x 70 μm erhalten (Abbildung 8). Für jedes Schwein...

Vorbereitung von Schweineaugen für die konfokale Reflexionsmikroskopie zur Visualisierung des glasartigen Kollagenfasernetzwerks

The vitreous is a clear gel that fills the space between the lens and retina. Its structure is supported by a network of collagen fibers, which likely ...

preparing-porcine-eyes-for-confocal-reflectance-microscopy-to

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

In diesem Video zeigen wir die Dissektion des hornhauttragenden vorderen Segments des Schweineauges. Das isolierte Segment kann für die Organkultivierung verwendet werden, um die Pathophysiologie von Augenerkrankungen zu untersuchen.

Dissektion des vorderen Augensegments: Eine Methode zur Isolierung des hornhauttragenden vorderen Segments aus dem Schweineauge

Dieser Artikel stellt eine Methode zur Fluoreszenz beschriften Kollagen, das weiter für beide fix und Live-Darstellung von 3D-Zellkulturen verwendet werden kann. Wir bieten auch ein optimiertes Protokoll endogene Proteine ​​des Zytoskeletts von Zellen in 3D-Umgebungen kultiviert visualisieren.

Enthüllung des Cytoskeletal Organization of Invasive Cancer Cells in 3D

Dieses Verfahren zeigt, in vivo nahen IR-Fluoreszenz-Imaging von Kollagen Umbau-Aktivitäten bei Mäusen als auch ex vivo Färbung der Kollagene in Gewebeschnitten mit Käfig Kollagen-mimetischen Peptide, die sein Foto-ausgelöst, um mit denaturierten Kollagenstränge hybridisieren.

Imaging denaturierten Kollagen-Stränge<em&gt; In-vivo-</em&gt; Und<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Über die Photo-ausgelöst Hybridisierung von Caged Collagen mimetischen Peptiden

Das Ziel dieses Protokolls ist es, eine effektive Technik zur Isolierung des ganzen, intakten Glaskörperkerns und der Rinde aus post mortem enukleierten Schweineaugen zu zeigen.

Ganze Glaskörper Dissection für Vitreodynamic Analysis

Wir führen drei verschiedene Gewebe Vorbereitung Techniken für immunhistochemische Visualisierung der Ratte retinalen mikrovaskuläre perizyten, d. h. Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone Isolierung des vaskulären-Netzes.

Netzhaut Cryo-Abschnitte, ganze-Reittiere und hypotone isoliert Gefäßsystem Vorbereitungen für immunhistochemische Visualisierung von Mikrovaskulären Perizyten

Das Ziel dieses Protokolls ist es, ein neuartiges Modell der glaukomatösen Neurodegeneration zu charakterisieren, das auf einer thermischen 360°-Kauterisierung des limbalen Gefäßplexus basiert und eine subakute okuläre Hypertonie induziert.

Vollkreiskauterisierung des limbalen Gefäßplexus bei chirurgisch induziertem Glaukom bei Nagetieren

Hier wird eine einfach zu befolgende Methode zur Kultivierung primärer retinaler Netzhaut-Pigmentepithelzellen in vitro vorgestellt.

Primärkultur von retinalen Pigmentepithelzellen des Schweins

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Schritte zum Abgleich von in vivo Bildern der optischen Kohärenztomographie (Vis-OCTF) mit konfokalen ex vivo Bildern derselben Mausnetzhaut, um die beobachtete Morphologie der retinalen Ganglienzell-Axonbündel in den in vivo Bildern zu verifizieren.

Abgleich von optischen Kohärenztomographie-Fasergrammen im sichtbaren Licht mit konfokalen Bildern derselben Maus-Netzhaut

Dieses Protokoll beschreibt eine zuverlässige Methode zur Gewinnung hochwertiger Kryoschnitte ganzer Kaninchenaugen. Es beschreibt Verfahren zur Dissektion, Fixierung, Einbettung und Sektion von Kaninchenaugen, die leicht für den Einsatz in jeder Studie angepasst werden können, bei der die Immunhistochemie bei größeren Augen eingesetzt wird.

Gewinnung hochwertiger Kryoschnitte von ganzem Kaninchenauge 

Die Perizyten in retinalen Gefäßen wurden durch Immunfluoreszenzfärbung mit Thrombozyten-abgeleiteten Wachstumsfaktor-Rezeptoren β nach retroorbitaler Injektion von fluoreszierendem Tomatenlektin untersucht. Die markierte Netzhaut wurde weiter mit der Gewebereinigungsmethode behandelt und als Ganzes montiert, um die dreidimensionalen Ansichten der Perizyten, die das retinale Gefäßsystem umgeben, unter einem konfokalen Mikroskop zu visualisieren.

3D-Visualisierung von retinalen vaskulären Perizyten bei Mäusen durch Immunfärbung 

Erfahren Sie die Präparation von Schweineaugen für die konfokale Reflexionsmikroskopie zur Visualisierung des Kollagenfasernetzwerks im Glaskörper. Diese Methode ermöglicht artefaktfreie Bildgebung zur Untersuchung von Netzhautablösungen.

Vorbereitung von Schweineaugen für die konfokale Reflexionsmikroskopie zur Visualisierung des glasartigen Kollagenfasernetzwerks (Video) | JoVE Journal

Vorbereitung von Schweineaugen für die konfokale Reflexionsmikroskopie zur Visualisierung des glasartigen Kollagenfasernetzwerks

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