Name: Stimulation von vaskulären Endothelzellen mit Hilfe von extrazellulären Fallen für Neutrophile in Gegenwart von Lipoproteinen niedriger Dichte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie neutrophile extrazelluläre Fallen und LDL aus menschlichem Plasma isolieren und humane aortale Endothelzellen stimulieren. Diese Methode ermöglicht die Analyse inflammatorischer Reaktionen in der kardiovaskulären Forschung.

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<ol><li>Papayannopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+immunity+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in immunity and disease.</a> Nat Rev Immunol. 18 (2), 134-147 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 235(2024).</li>
<li>Megens, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+luminal+neutrophil+extracellular+traps+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Presence of luminal neutrophil extracellular traps in atherosclerosis.</a> Thromb Haemost. 107 (3), 597-598 (2012).</li>
<li>Meher, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+role+of+IL+%28Interleukin%29-1%CE%B2+in+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel role of IL (Interleukin)-1β in neutrophil extracellular trap formation and abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 38 (4), 843-853 (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-specific+deletion+of+Peptidylarginine+Deiminase+4+mitigates+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Myeloid-specific deletion of Peptidylarginine Deiminase 4 mitigates atherosclerosis.</a> Front Immunol. 9, 1680(2018).</li>
<li>Zhai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+from+activated+vascular+smooth+muscle+cells+drive+the+progression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps from activated vascular smooth muscle cells drive the progression of atherosclerosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7500(2022).</li>
<li>Abdo, A. I., Rayner, B. S., van Reyk, D. M., Hawkins, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoprotein+modified+by+myeloperoxidase+oxidants+induces+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase oxidants induces endothelial dysfunction.</a> Redox Biol. 13, 623-632 (2017).</li>
<li>Mueller, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+lipoprotein+%28a%29+Isolation+from+a+small+volume+of+plasma+with+applications+for+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A method for lipoprotein (a) Isolation from a small volume of plasma with applications for clinical research.</a> Sci Rep. 12 (1), 9138(2022).</li>
<li>Hosseinzadeh, A., Messer, P. K., Urban, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+redox-cycling+nitroxide+tempol+inhibits+NET+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable redox-cycling nitroxide tempol inhibits NET formation.</a> Front Immunol. 3, 391(2012).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+endothelial+cells+induce+neutrophil+extracellular+traps+and+are+susceptible+to+NETosis-mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Activated endothelial cells induce neutrophil extracellular traps and are susceptible to NETosis-mediated cell death.</a> FEBS Lett. 584 (14), 3193-3197 (2010).</li>
<li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+action+of+oxidized+low-density+lipoproteins+and+neutrophils+on+endothelial+inflammatory+responses+through+neutrophil+extracellular+trap+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cooperative action of oxidized low-density lipoproteins and neutrophils on endothelial inflammatory responses through neutrophil extracellular trap formation.</a> Front Immunol. 10, 1899(2019).</li>
<li>Schröter, J., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorinated+phospholipids+and+fatty+acids%3A+Patho%29physiological+relevance%2C+potential+toxicity%2C+and+analysis+of+lipid+chlorohydrins%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Chlorinated phospholipids and fatty acids: Patho)physiological relevance, potential toxicity, and analysis of lipid chlorohydrins.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 8386362(2016).</li>
<li>Nose, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+perilipin-3+%28TIP47%29+in+formation+of+lipid+droplets+and+PGE2+production+in+HL-60-derived+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role of perilipin-3 (TIP47) in formation of lipid droplets and PGE2 production in HL-60-derived neutrophils.</a> PLoS One. 8 (8), e71542(2013).</li>
<li>Manda-Handzlik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+agents+differentiating+HL-60+cells+toward+granulocyte-like+cells+on+their+ability+to+release+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of agents differentiating HL-60 cells toward granulocyte-like cells on their ability to release neutrophil extracellular traps.</a> Immunol Cell Biol. 96 (4), 413-425 (2018).</li>
<li>Ermert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+microbial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.</a> J Innate Immun. 1 (3), 181-193 (2009).</li>
<li>Ohinata, H., Obama, T., Makiyama, T., Watanabe, Y., Itabe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+suppresses+neutrophil+extracellular+traps+enhanced+by+oxidized+low-density+lipoprotein+or+oxidized+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein suppresses neutrophil extracellular traps enhanced by oxidized low-density lipoprotein or oxidized phospholipids.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 13992(2022).</li>
<li>Pertiwi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+derived+from+macrophages%2C+mast+cells%2C+eosinophils%2C+and+neutrophils+are+generated+in+a+time-dependent+manner+during+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils, and neutrophils are generated in a time-dependent manner during atherothrombosis.</a> J Pathol. 247 (4), 505-512 (2019).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+eosinophils+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of eosinophils in cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 22 (3), 165-182 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1 % Poly-L-Lysin</td><td>SigmaAldrich</td><td>Nr. P8920-100ML</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Schale</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>12-Well-Gewebekulturplatten</td><td>Falke</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>2% Gelatine</td><td>SigmaAldrich</td><td>Nr. G1393-20ML</td><td></td></tr><tr><td>4-teiliges Rohr</td><td>Himac</td><td>S404332A</td><td></td></tr><tr><td>all-trans-Retinsäure</td><td>Wako</td><td>188-01113</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>Cellurose-Dialyseschlauch</td><td>MISUMI Group Inc.</td><td>Tel.: 0327-23-37-07 (UC18-32-100)</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Dojindo</td><td>345-01865</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>Wachstumsmedium für Endothelzellen 2 Kit</td><td>PromoCell</td><td>Nr. C-22111</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>Heparin-Natrium (5.000 Einheiten/5 ml)</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>Gekühlte Hochgeschwindigkeitszentrifuge</td><td>TOMY</td><td>SRX-201</td><td>Beschleunigung: 9, Verzögerung: 7</td></tr><tr><td>humane Aorten-Endothelzellen</td><td>Lonza</td><td>CC-2535</td><td></td></tr><tr><td>KBr</td><td>Wako</td><td>168-03475</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>KEYENCE Mikroskopie-Software</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-II Analysator</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Ultrazentrifuge</td><td>Himac</td><td>CS150GX</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopie</td><td>OLYMP</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopie</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Für Zeitrafferaufnahmen (Option)</td></tr><tr><td>Mikroskopie-Kamera</td><td>Nikon</td><td>DS-Fi3</td><td></td></tr><tr><td>Software für Mikroskopie-Kameras</td><td>Nikon</td><td>DS-L4</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>Artikel-Nr.: 15140-122 100ML</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>Phosphatpuffer Kochsalzlösung (&mal; 10)</td><td></td><td></td><td>2,6 g NaH2PO4&middot; 2H2O, 29 g Na2HPO4&middot; 12H2O, 80 g NaCl und 2,0 g KCl in destilliertem Wasser und auf das Volumen von 1 l einstellen. (Kann durch jeden Anbieter ersetzt werden)</td></tr><tr><td>PMA (Phorbol 12-Myristat 13-acetat)</td><td>Wako</td><td>162-23591</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>Reagenzien-Paket</td><td>Lonza</td><td>Nr. CC-5034</td><td>(CC-5022: HEPES gepufferte Kochsalzlösung, CC-5012: Trypsin/EDTA, CC-5002: Trypsin-neutralisierende Lösung)&nbsp;</td></tr><tr><td>Rotor</td><td>Himac</td><td>S100AT6-0242</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 (mit Phenolrot)</td><td>Wako</td><td>189-02025</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>RPMI-1640 (ohne Phenolrot)</td><td>Wako</td><td>186-02155</td><td>Kann durch jeden Lieferanten ersetzt werden</td></tr><tr><td>T-25 Kolben</td><td>Corning</td><td>3275</td><td></td></tr></tbody></table>

stimulation von vaskulären endothelzellen mit hilfe von extrazellulären fallen für neutrophile in gegenwart von lipoproteinen niedriger dichte

Stimulation of Vascular Endothelial Cells Using Neutrophil Extracellular Traps in the Presence of Low-Density Lipoprotein

Nach Entfernung der Chylomikronen, gefolgt von VLDL-Fraktionen aus menschlichem Plasma durch sequentielle Ultrazentrifugation, wurde humanes Plasma mit einer KBr-Lösung gemischt, um die Dichte auf d = 1,063 einzustellen. In diesem Schritt wurde das restliche Fällungsmittel nicht vollständig in der Lösung gelöst, und eine starke Durchmischung, bei der Gasblasen entstanden, wurden vermieden, um das LDL intakt zu halten. Nach der Ultrazentrifugation wurde LDL auf der obersten Schicht visuell durch seine gelb-orange...

Stimulation von vaskulären Endothelzellen mit Hilfe von extrazellulären Fallen für Neutrophile in Gegenwart von Lipoproteinen niedriger Dichte

Neutrophil extracellular traps (NETs) have emerged as causative factors in various non-infectious diseases and have been implicated in cardiovascular ...

stimulation-vascular-endothelial-cells-using-neutrophil-extracellular

Research

Forschung

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Dieses Video zeigt eine in vitro Technik zur Erzeugung und Isolierung von neutrophilen extrazellulären Fallen (NETs). Neutrophile werden aus peripherem Blut isoliert und mit Phorbolmyristatacetat (PMA) stimuliert, um NETs zu produzieren. Während der Inkubation durchlaufen die Neutrophilen einen Prozess des Zelltods (NETose), um NETs freizusetzen, die aus dekondensiertem Chromatin bestehen, das mit granulären zytoplasmatischen Proteinen gemischt ist.

Eine In-vitro-Technik zur Erzeugung von extrazellulären Fallen für humane Neutrophile

Dieses Video zeigt die Induktion und Visualisierung von extrazellulären Neutrophilen-Fallen oder NETs in vormarkierten Neutrophilen unter Verwendung von Patientenserum, das zytoplasmatische Antikörper gegen Neutrophile enthält. Darüber hinaus ermöglicht die Verwendung eines undurchlässigen DNA-Farbstoffs und der Fluoreszenzmikroskopie die Visualisierung von NETs.

Induktion und Visualisierung von extrazellulären Fallen von Neutrophilen in vormarkierten Neutrophilen

Dieses Video demonstriert die In-vitro-Stimulation von Makrophagen-Extrazellulären Fallen (METs) in humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen unter Verwendung verschiedener Entzündungsreize wie TNF-alpha, PMA und HOCL. Das Video zeigt auch die Methode der SYTOX-Farbstofffärbung von METs zur Visualisierung.

In vitro Stimulation und Visualisierung von extrazellulären Makrophagenfallen

Neutrophile Einhaltung der aktivierten Endothel an den Standorten der Infektion ist ein integraler Bestandteil des Gastgebers Entzündungsreaktion. Beschrieben in diesem Bericht ist ein neutrophilen Bindungs-Assay, die für das...

Quantitative<em&gt; In-vitro-</em&gt; Assay auf Neutrophile Haftung auf Aktiviert primären humanen mikrovaskulären Endothelzellen unter statischen Bedingungen messen

Im folgenden Protokoll beschreiben wir eine sehr einfache Möglichkeit, Neutrophil Extracellular Traps (NETs) aus humanem Vollblut unter Verwendung leicht verfügbarer Reagenzien zu isolieren. Dann zeigt, wie die isolierten Netze können in einem in vitro-Adhäsionstest mit Krebszellen verwendet werden.

Vereinfachte Menschen Neutrophil Extracellular Traps (NETs) Isolierung und Handhabung

Lipids sind dafür bekannt, eine wichtige Rolle bei der zellulären Funktionen spielen. Hier beschreiben wir eine Methode, um die Lipidzusammensetzung von Neutrophilen, um zu bestimmen, wobei der Schwerpunkt auf dem Cholesterinspiegel, sowohl durch HPTLC und HPLC mit einem besseren Verständnis der zugrunde liegenden Mechanismen der neutrophilen extrazellulären Falle Bildung zu gewinnen.

Methoden Lipidveränderungen in Neutrophilen und die anschließende Bildung von Neutrophilen Extracellular Traps zu studieren

Hier präsentieren wir Ihnen eine Methode in der menschlichen Low-Density Neutrophilen (LDN), erholte sich von postoperativen peritoneal Lavage Fluid, produzieren massive Neutrophilenzahl extrazelluläre Traps (NETs) und effizient trap freie Tumorzellen, die anschließend wachsen.

Neutrophilenzahl extrazelluläre fallen durch geringe Dichte Neutrophilen erzeugt gewonnenen Peritoneal Lavage Fluid vermitteln Tumor Zellwachstum und Anlage

Hier wird ein Protokoll zum Nachweis der Produktion extrazellulärer Makrophagen (MET) in der Lebendzellkultur mittels Mikroskopie und Fluoreszenzfärbung vorgestellt. Dieses Protokoll kann weiter erweitert werden, um spezifische MET-Proteinmarker durch Immunfluoreszenzfärbung zu untersuchen.

In Vitro Stimulation und Visualisierung der extrazellulären Trap-Freisetzung in differenzierten menschlichen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen

Hier wird ein Protokoll für die Induktion und Analyse von in vitro neutrophilen extrazellulären Fallen (NETs) vorgestellt. Die Quantifizierung von DNA, Cathelicidin (LL37) und Enzymaktivität ergab Daten, die die Variabilität in der Zusammensetzung und Morphologie von NETs zeigen, die durch mikrobielle und chemische Stimuli unter ähnlichen kontrollierten Bedingungen induziert werden.

Morphologische und kompositorische Analyse von neutrophilen extrazellulären Fallen, die durch mikrobielle und chemische Reize induziert werden

Dieses definierte Protokoll beschreibt einen Echtzeit-Hochdurchsatz-Mikroskopie-Ansatz zur Visualisierung und Quantifizierung der Freisetzung von extrazellulären Traps (NET) bei humanen Neutrophilen in vitro. Die reproduzierbare Methode ermöglicht die Untersuchung der Eigenschaften und Kinetik der NET-Freisetzung nach Stimulation mit unterschiedlichen NETosis-Induktoren und ermöglicht die Beurteilung der Pharmakologie von NETosis-Antagonisten.

Echtzeit-Hochdurchsatz-Mikroskopische Quantifizierung der Freisetzung extrazellulärer Fallen bei humanen Neutrophilen und Bewertung der Pharmakologie von Antagonisten

Neutrophile niedriger Dichte (LDN) nehmen bei mehreren Krankheiten signifikant zu. LDN werden in der Regel durch Zellsortierung isoliert. Wir stellen eine praktische Methode vor, um reines und lebensfähiges LDN zu erhalten. Nach der Dichtegradientenzentrifugation von peripherem Blut werden die Zellen mit magnetischen Mikrokügelchen inkubiert und dann LDN durch magnetische Säulen getrennt.

Schnelle magnetische Mikrobead-Methode zur effizienten Aufreinigung von Neutrophilen niedriger Dichte

Erfahren Sie, wie Sie neutrophile extrazelluläre Fallen und LDL aus menschlichem Plasma isolieren und humane aortale Endothelzellen stimulieren. Diese Methode ermöglicht die Analyse inflammatorischer Reaktionen in der kardiovaskulären Forschung.

Stimulation von vaskulären Endothelzellen mit Hilfe von extrazellulären Fallen für Neutrophile in Gegenwart von Lipoproteinen niedriger Dichte (Video) | JoVE Journal

Stimulation von vaskulären Endothelzellen mit Hilfe von extrazellulären Fallen für Neutrophile in Gegenwart von Lipoproteinen niedriger Dichte

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