Name: Quantifizierung der endothelialen Fettsäureaufnahme mit Hilfe von fluoreszierenden Fettsäureanaloga (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Lernen Sie die Quantifizierung der endothelialen Fettsäureaufnahme mit fluoreszierenden BODIPY-Analoga. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Lipidstoffwechsel und metabolischen Erkrankungen.

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<ol><li>Schwenk, R. W., Holloway, G. P., Luiken, J. J. F. P., Bonen, A., Glatz, J. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+transport+across+the+cell+membrane%3A+regulation+by+fatty+acid+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot+Essent+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Fatty acid transport across the cell membrane: regulation by fatty acid transporters.</a> Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 82 (4-6), 149-154 (2010).</li>
<li>He, Q., Chen, Y., Wang, Z., He, H., Yu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake%2C+metabolism+and+sensing+of+long-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake, metabolism and sensing of long-chain fatty acids.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 28 (1), 10(2023).</li>
<li>Mashek, D. G., Coleman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+fatty+acid+uptake%3A+the+contribution+of+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Cellular fatty acid uptake: the contribution of metabolism.</a> Curr Opin Lipidol. 17 (3), 274-278 (2006).</li>
<li>Jang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+branched-chain+amino+acid+metabolite+drives+vascular+fatty+acid+transport+and+causes+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A branched-chain amino acid metabolite drives vascular fatty acid transport and causes insulin resistance.</a> Nat Med. 22 (4), 421-426 (2016).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+B+controls+endothelial+fatty+acid+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor B controls endothelial fatty acid uptake.</a> Nature. 464 (7290), 917-921 (2010).</li>
<li>Hwangbo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+APLNR+regulates+tissue+fatty+acid+uptake+and+is+essential+for+apelin%27s+glucose-lowering+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial APLNR regulates tissue fatty acid uptake and is essential for apelin's glucose-lowering effects.</a> Sci Transl Med. 9 (407), eaad4000(2017).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-stimulated+adipocytes+secrete+lactate+to+promote+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin-stimulated adipocytes secrete lactate to promote endothelial fatty acid uptake and transport.</a> J Cell Sci. 135 (5), jcs258964(2022).</li>
<li>Kuo, A., Lee, M. Y., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+biogenesis+and+function+in+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet biogenesis and function in the endothelium.</a> Circ Res. 120 (8), 1289-1297 (2017).</li>
<li>Ibrahim, A., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+endothelium+buffer+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Does endothelium buffer fat.</a> Circ Res. 120 (8), 1219-1221 (2017).</li>
<li>Kim, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+lipid+droplets+suppress+eNOS+to+link+high-fat+consumption+to+blood+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Endothelial lipid droplets suppress eNOS to link high-fat consumption to blood pressure elevation.</a> J Clin Invest. 133 (24), e173160(2023).</li>
<li>Dubikovskaya, E., Chudnovskiy, R., Karateev, G., Park, H. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+long-chain+fatty+acid+uptake+into+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurement of long-chain fatty acid uptake into adipocytes.</a> Methods Enzymol. 538, 107-134 (2014).</li>
<li>Watkins, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+13C-labeled+fatty+acids+in+term+human+placental+explants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of 13C-labeled fatty acids in term human placental explants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Endocrinology. 160 (6), 1394-1408 (2019).</li>
<li>Spangenburg, E. E., Pratt, S. J. P., Wohlers, L. M., Lovering, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+BODIPY+%28493%2F503%29+to+visualize+intramuscular+lipid+droplets+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of BODIPY (493/503) to visualize intramuscular lipid droplets in skeletal muscle.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 598358(2011).</li>
<li>Fraser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+uptake+in+diabetic+rat+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acid uptake in diabetic rat adipocytes.</a> Mol Cell Biochem. 167 (1-2), 51-60 (1997).</li>
<li>Ibrahim, A., Yucel, N., Kim, B., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+mitochondrial+ATP+production+regulates+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Local mitochondrial ATP production regulates endothelial fatty acid uptake and transport.</a> Cell Metab. 32 (2), 309-319.e7 (2020).</li>
<li>Mehling, M., Tay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic cell culture.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 95-102 (2014).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Maiullari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+breast+cancer+dynamics+through+modulable+small+vessel+environment+bioreactor+%28sVEB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modeling breast cancer dynamics through modulable small vessel environment bioreactor (sVEB).</a> Biomaterials. 323, 123441(2025).</li>
<li>Murphy, A. R., Franco, R. A., Allenby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricating+microfluidic+co-cultures+of+immortalized+cell+lines+uncovers+robust+design+principles+for+the+simultaneous+formation+of+patterned%2C+vascularized%2C+and+stem+cell-derived+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Fabricating microfluidic co-cultures of immortalized cell lines uncovers robust design principles for the simultaneous formation of patterned, vascularized, and stem cell-derived adipose tissue.</a> Small. , e2501834(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-Hydroxyisobutyrat (3-HIB)</td><td>Cayman Chemicals</td><td>26105</td><td>Positive Kontrolle, 5 oder 20 mM Endkonzentration</td></tr><tr><td>96 Brunnen schwarze, transparente Polystyrol-Mikroplatten</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3603-48EA</td><td>Für die Untersuchung von Panzerungszellen</td></tr><tr><td>BODIPY FL C12 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3822</td><td>Grüne fluoreszierende langkettige Fettsäure</td></tr><tr><td>BODIPY FL C16 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3821</td><td>Grüne fluoreszierende sehr langkettige Fettsäuren</td></tr><tr><td>Rinderserum-Albumin-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9205-50ML</td><td>Zur Herstellung des Bodipy:BSA-Komplexes verwendet</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxidid (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Lösungsmittel für Arzneimittelaktien</td></tr><tr><td>Einweg-Pipetter-Reservoirs</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td>Enthält die verschiedenen Lösungen, die auf die Zellen pipettiert werden sollen</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifizierter Adler' s Medium</td><td>Corning Life Sciences</td><td>10-013-CV</td><td>Medien für EA.hy926-Zellen</td></tr><tr><td>EA.hy926-Zellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922&nbsp;</td><td>Unsterbliche Endothelzell-Hybridlinie</td></tr><tr><td>EGM-2 Endothelzellwachstumsmedium-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Medien für HUVECs</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)&nbsp;</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>10 % Ergänzung in EGM-2 und DMEM</td></tr><tr><td>Fluoreszenz-Mikroplattenleser</td><td>Verschiedene</td><td>N/A</td><td>Jeder Mikroplattenleser, der Fluoreszenzmessungen durchführen kann</td></tr><tr><td>Gelatinelösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1393-100ml</td><td>Wurde verwendet, um Platten mit einer Arbeitskonzentration von 0,1 % zu beschichten</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 Lösung</td><td>Lebenswissenschaften</td><td>62249</td><td>Kernfärbung zur Zellnormalisierung (4 & mu; M)</td></tr><tr><td>Endothelzellen der menschlichen Nabelvene (HUVECs)</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td>Primäre menschliche Endothelzellen</td></tr><tr><td>Mehrkanal-Pipette</td><td>VWR</td><td>76627-768</td><td>Zum Pipettieren in eine 96-Well-Platte</td></tr><tr><td>Niclosamide&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>N3510-50G</td><td>Negative Kontrolle, 1 & mu; M&nbsp; Abschließender Schwerpunkt</td></tr><tr><td>PBS mit Kalzium und Magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>21031CV</td><td>Verwendet zur Vorbereitung von Behandlungen und als Waschpuffer (mit BSA)</td></tr><tr><td>PBS, ohne Kalzium und Magnesium</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-508</td><td>Für Gelatineverdünnung, Hoechst-Färbung und allgemeine Washes</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>1%-Ergänzung in EGM-2 und DMEM</td></tr><tr><td>Natrium-L-Laktat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-5G</td><td>Positive Kontrolle, 5 oder 20 mM Endkonzentration</td></tr><tr><td>Trypan-Blau-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td>Verwendet bei 0,08 % zur Löschung der extrazellulären Fluoreszenz</td></tr><tr><td>Vakuumfiltersysteme, 500ml PES-Membran, 0,45&micro; m</td><td>GenClone</td><td>25-227</td><td>Zur Sterilisation der Gelatinelösung</td></tr></tbody></table>

quantifizierung der endothelialen fettsäureaufnahme mit hilfe von fluoreszierenden fettsäureanaloga

Quantification of Endothelial Fatty Acid Uptake using Fluorescent Fatty Acid Analogs

Quantifizierung der endothelialen Fettsäureaufnahme mit Hilfe von fluoreszierenden Fettsäureanaloga

Endothelial cells (ECs) play a central role in regulating fatty acid (FA) transport from the bloodstream into metabolic tissues, yet tools to quantify EC ...

quantification-endothelial-fatty-acid-uptake-using-fluorescent-fatty

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Video demonstrieren wir eine ex vivo-Technik zur Messung der extrazellulären Glukoseanaloga-Depletion in entnommenen Mausorganen. Dabei wird das Mausgewebe in einer Lösung inkubiert, die fluoreszenzmarkierte Desoxyglukose enthält, die von den Zellen aufgenommen wird. Die Glukoseanalogonaufnahme kann indirekt durch Messung der Fluoreszenz des inkubierten Mediums bestimmt werden.

Messung der extrazellulären fluoreszierenden Glukoseanaloga-Depletion: Eine Surrogat-Messtechnik zur Beurteilung der Glukoseaufnahme in Mausorganen ex vivo

Wir berichten über eine in vitro Methode, die die Quantifizierung der tatsächlichen Anzahl von Adhäsionszellen innerhalb einer Endothelzell-Monoschicht ermöglicht.

Die Quantifizierung der Endothelial Cell Haftfähigkeit<em&gt; In-vitro-</em

Wir stellen ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, um die Gallensäuredynamik in lebenden Zellen mit einem genetisch kodierten BAS-FRET-Sensor zu untersuchen. Dieser Gallensäuresensor stellt ein einzigartiges Werkzeug zur Untersuchung (Regulierung) des Gallensäuretransports und der FXR-Aktivierung in einer Vielzahl von Zelltypen dar.

Echtzeit-Überwachung von intrazellulären Gallensäure Dynamics Mit Hilfe eines genetisch kodierte FRET-Gallensäure-Sensor

Primäre humane Nabelvenendothelzellen (HUVECs) wurden innerhalb eines mikrofluidischen Netzwerkgeräts zur Konfluenz gezüchtet. Die Endothelzellübergänge und F-Aktin-Verteilungen wurden dargestellt und die Veränderungen der intrazellulären Kalziumkonzentration und der Stickoxidproduktion als Reaktion auf Adenosintriphosphat (ATP) wurden in Echtzeit auf Einzelzellebene quantifiziert.

Entwicklung und Charakterisierung von<em&gt; In Vitro</em&gt; Mikrogefäßnetz und quantitative Messungen von Endothelial [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; Und die Produktion von Stickoxid

Gefäßendothels steuert dicht Leukozyten Rekrutierung. Unzureichende Leukozyte Extravasation trägt zur entzündlichen Krankheiten des Menschen. Daher ist es notwendig, bessere Therapien für entzündliche Erkrankungen zu entwerfen, auf der Suche nach neuartigen regulatorischen Elemente der endotheliale Aktivierung. Hier beschreiben wir eine umfassende Methodik um neuartige endotheliale Regulatoren zu charakterisieren, die Leukozyten während einer Entzündung des Menschenhandels ändern können.

Screening-Assays zur Charakterisierung neuartiger endothelialer Regulators der entzündlichen Reaktion beteiligt

Traditionelle Methoden zur Beurteilung der adipogenen Differenzierung sind billig und einfach zu bedienen, aber sind nicht spezifisch für Änderungen in der Genexpression. Wir haben einen Test zur Quantifizierung von mesenchymalen Zelldifferenzierung in Reifen Adipozyten mit einer Linie spezifische Marker entwickelt. Dieser Test hat vielfältige Anwendungen in Grundlagenforschung und klinischer Medizin.

Visualisierung und Quantifizierung von mesenchymalen Zellen adipogenen Differenzierung Potenzial mit einer Linie spezifische Marker

Dieses Protokoll bietet einen effizienten Ansatz zur Messung von LDL-Cholesterin-Aufnahme mit Real-Time Zustrom Raten mit einem live Cell imaging-System in verschiedenen Zelltypen. Diese Technik bietet eine Plattform die pharmakologische Aktivität von Verbindungen beeinflussen LDL Zustrom während der Überwachung für Zellmorphologie und damit potenzielle Zytotoxizität auf dem Bildschirm.

LDL-Cholesterin-Aufnahme-Assay mit Live Cell Imaging-Analyse mit Zelle Systemüberwachung

Messung der in-vitro-Cholesterin Efflux Fähigkeit, Serum oder Plasma in Makrophagen Zellmodellen ist ein viel versprechendes Instrument als Biomarker für Atherosklerose. In der vorliegenden Studie wir optimieren und standardisieren eine fluoreszierende NBD-Cholesterin-Efflux-Methode und eine Hochdurchsatz-Analyse mit 96-Well Platten zu entwickeln.

Hochdurchsatz-Nitrobenzoxadiazole-Label Cholesterin-Efflux-Assay

Automatisierte Assays mit Multi-Well-Mikroplatten sind vorteilhafte Ansätze zur Identifizierung von Signalwegregulatoren, indem sie die Bewertung einer Vielzahl von Bedingungen in einem einzigen Experiment ermöglichen. Hier haben wir das etablierte Makropinosomen-Bildgebungs- und Quantifizierungsprotokoll an ein 96-Well-Mikroplattenformat angepasst und bieten einen umfassenden Überblick über die Automatisierung mit einem Multimode-Plattenleser.

Automatisierte Bildgebung und Analyse zur Quantifizierung fluoreszenzmarkierter Makropinosomen

In dieser Arbeit demonstrieren wir ein optimiertes BODIPY 493/503 Fluoreszenz-basiertes Protokoll zur Charakterisierung von Lipidtröpfchen in Lebergewebe. Durch die Verwendung von orthogonalen Projektionen und 3D-Rekonstruktionen ermöglicht der Fluorophor eine erfolgreiche Unterscheidung zwischen mikrovesikulärer und makrovesikulärer Steatose und kann einen komplementären Ansatz zu den klassischen histologischen Protokollen zur Beurteilung der hepatischen Steatose darstellen.

Analyse fluoreszenzgefärbter Lipidtröpfchen mit 3D-Rekonstruktion zur Beurteilung der Lebersteatose

Lernen Sie die Quantifizierung der endothelialen Fettsäureaufnahme mit fluoreszierenden BODIPY-Analoga. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Lipidstoffwechsel und metabolischen Erkrankungen.

Quantifizierung der endothelialen Fettsäureaufnahme mit Hilfe von fluoreszierenden Fettsäureanaloga

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