Name: Dissektion von kraniofazialem Gewebe von Zebrafischen nach Färbung mit Alcian Blue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Lernen Sie die Präparation kraniofazialer Knorpel von Danio rerio nach Alcian-Blue-Färbung. Dieses Protokoll ermöglicht die detaillierte Analyse von Gaumenmorphogenese auf Gewebe- und Zellebene.

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<ol><li>Simões-Costa, M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+neural+crest+identity%3A+a+gene+regulatory+recipe%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Establishing neural crest identity: a gene regulatory recipe.</a> Development. 142 (2), 242-257 (2015).</li>
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<li>Hammond, N. L., Dixon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+the+embryogenesis+of+lip+and+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Revisiting the embryogenesis of lip and palate development.</a> Oral Dis. 28 (5), 1306-1326 (2022).</li>
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<li>Swartz, M. E., SheehanRooney, K., Dixon, M. J., Eberhart, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+a+palatogenic+gene+program+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Examination of a palatogenic gene program in zebrafish.</a> Dev Dyn. 240 (9), 2204-2220 (2011).</li>
<li>Selleri, L., Rijli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shaping+faces%3A+genetic+and+epigenetic+control+of+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Shaping faces: genetic and epigenetic control of craniofacial morphogenesis.</a> Nat Rev Genet. 24 (9), 610-626 (2023).</li>
<li>Beaty, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+geneenvironment+interaction+in+a+genome+wide+study+of+nonsyndromic+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Evidence for geneenvironment interaction in a genome wide study of nonsyndromic cleft palate.</a> Genet Epidemiol. 35 (6), 469-478 (2011).</li>
<li>Dixon, M. J., Marazita, M. L., Beaty, T. H., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%3A+understanding+genetic+and+environmental+influences%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate: understanding genetic and environmental influences.</a> Nat Rev Genet. 12 (3), 167-178 (2011).</li>
<li>Reynolds, K., Kumari, P., Sepulveda Rincon, L., Gu, R., Ji, Y., Kumar, S., Zhou, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+in+orofacial+clefts%3A+crosstalk%2C+pathogenesis+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling in orofacial clefts: crosstalk, pathogenesis and models.</a> Dis Model Mech. 12 (2), dmm037051(2019).</li>
<li>Raterman, S. T., Metz, J. R., Wagener, F. A. D. T. G., Von den Hoff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+models+of+craniofacial+malformations%3A+interactions+of+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish models of craniofacial malformations: interactions of environmental factors.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 600926(2020).</li>
<li>Walker, M., Kimmel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+twocolor+acidfree+cartilage+and+bone+stain+for+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">A twocolor acidfree cartilage and bone stain for zebrafish larvae.</a> Biotechnic Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).</li>
<li>Eberhart, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+Mirn140+modulates+Pdgf+signaling+during+palatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">MicroRNA Mirn140 modulates Pdgf signaling during palatogenesis.</a> Nat Genet. 40 (3), 290-298 (2008).</li>
<li>Melvin, V. S., Feng, W., HernandezLagunas, L., Artinger, K. B., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+morpholinobased+screen+to+identify+novel+genes+involved+in+craniofacial+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A morpholinobased screen to identify novel genes involved in craniofacial morphogenesis.</a> Dev Dyn. 242 (7), 817-831 (2013).</li>
<li>Spoorendonk, K. M., Hammond, C. L., Huitema, L. F. A., Vanoevelen, J., SchulteMerker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+unique+model+system+in+bone+research%3A+the+power+of+genetics+and+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Ichthyol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a unique model system in bone research: the power of genetics and in vivo imaging.</a> J Appl Ichthyol. 26, 219-224 (2010).</li>
<li>Farmer, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+series+of+Irx+cluster+mutants+reveals+diverse+roles+in+facial+cartilage+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A comprehensive series of Irx cluster mutants reveals diverse roles in facial cartilage development.</a> Development. 148 (16), dev197244(2021).</li>
<li>Rochard, L., Monica, S. D., Ling, I. T. C., Kong, Y., Roberson, S., Harland, R., Halpern, M., Liao, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+Wnt+pathway+genes+wls%2C+wnt9a%2C+wnt5b%2C+frzb+and+gpc4+in+regulating+convergentextension+during+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Roles of Wnt pathway genes wls, wnt9a, wnt5b, frzb and gpc4 in regulating convergentextension during palate morphogenesis.</a> Development. 143 (14), 2541-2547 (2016).</li>
<li>Liu, S., Narumi, R., Ikeda, N., Morita, O., Tasaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemicalinduced+craniofacial+anomalies+caused+by+disruption+of+neural+crest+cell+development+in+a+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Chemicalinduced craniofacial anomalies caused by disruption of neural crest cell development in a zebrafish model.</a> Dev Dyn. 249 (7), 794-815 (2020).</li>
<li>Zinck, N., FranzOdendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+wholemount+bone+and+cartilage+staining+requires+acidfree+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Accurate wholemount bone and cartilage staining requires acidfree conditions.</a> Anat Rec. 304 (5), 958-960 (2021).</li>
<li>Stenzel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+redundant+roles+for+zebrafish+her+genes+during+mineralization+and+craniofacial+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Distinct and redundant roles for zebrafish her genes during mineralization and craniofacial patterning.</a> Front Endocrinol. 13, 1033843(2022).</li>
<li>Tomasiewicz, H. G., Hesselbach, R., Carvan, M. J., Goldberg, B., Berg, C. A., Petering, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+system+for+environmental+health+studies+in+the+grad+classroom%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model system for environmental health studies in the grad classroom.</a> Zebrafish. 11 (4), 384-395 (2014).</li>
<li>Cubbage, C. C., Mabee, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+cranium+and+paired+fins+in+the+zebrafish+Danio+rerio+%28Ostariophysi%2C+Cyprinidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Morphol%22%5BJournal%5D)">Development of the cranium and paired fins in the zebrafish Danio rerio (Ostariophysi, Cyprinidae).</a> J Morphol. 229 (2), 121-160 (1996).</li>
<li>Schindelin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+opensource+platform+for+biologicalimage+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an opensource platform for biologicalimage analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Tuckett, F., MorrissKay, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alcian+Blue+staining+of+glycosaminoglycans+in+embryonic+material%3A+effect+of+different+fixatives%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Alcian Blue staining of glycosaminoglycans in embryonic material: effect of different fixatives.</a> Histochem J. 20 (3), 174-182 (1988).</li>
<li>Dougherty, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+requirements+for+wnt9a+and+irf6+in+extension+and+integration+mechanisms+during+zebrafish+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct requirements for wnt9a and irf6 in extension and integration mechanisms during zebrafish palate morphogenesis.</a> Development. 140 (1), 76-81 (2013).</li>
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<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+an+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196(2012).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+alizarin+Red+staining+to+detect+chemically+induced+bone+loss+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae.</a> J Vis Exp. (178), e63251(2021).</li>
<li>Klingenberg, C. P., Barluenga, M., Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shape+analysis+of+symmetric+structures%3A+quantifying+variation+among+individuals+and+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Shape analysis of symmetric structures: quantifying variation among individuals and asymmetry.</a> Evolution. 56 (10), 1909-1920 (2002).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarose</td><td>Lonza Biowissenschaften</td><td>50004</td><td>Zum Beschichten von Petrischalen</td></tr><tr><td>Alcian blau 8G&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. A3157</td><td>Zum Färben von Knorpeln</td></tr><tr><td>Calciumchlorid-Dihydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12022</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Olymp</td><td>DP28</td><td>Für die Aufnahme von Bildern</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche Biowissenschaften</td><td>10236276001</td><td>Zur Markierung von Zellkernen</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Honeywell</td><td>32221</td><td>Lösungsmittel für Alcianblau-Fleck</td></tr><tr><td>FIDSCHI</td><td></td><td></td><td>Ausführung: ImageJ 1.54f</td></tr><tr><td>Zange</td><td>Dumont</td><td>Dumont</td><td>Zur Durchführung von Präparierungen</td></tr><tr><td>Glycerin</td><td>MP Biomedizin</td><td>193996</td><td>Zum Herstellen von Waschungen und zum Einbetten von Proben&nbsp;</td></tr><tr><td>Wasserstoffperoxid</td><td>MP Biomedizin</td><td>194057</td><td>Zur Herstellung von Bleichlösung</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid-Hexahydrat</td><td>SARD Biowissenschaften</td><td>SBRC0217</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Magnesiumsulfat-Heptahydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. M2773</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>MS-222 (Tricain)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. A5040</td><td>Zur Betäubung von Larven</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. P9541</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Kaliumhydroxid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>484016</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Kaliumphosphat einbasisch</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. P0662</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. S3014</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Natriumphosphat zweibasisch</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71640</td><td>Zur Herstellung von Puffern</td></tr><tr><td>Stereoskop</td><td>Olymp</td><td>SZX61</td><td>Zur Durchführung von Präparierungen</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>HIMEDIA</td><td>TC287</td><td>Detergens, das zur Permeabilisierung der Zellen verwendet wird</td></tr></tbody></table>

dissektion von kraniofazialem gewebe von zebrafischen nach färbung mit alcian blue

Dissection of Zebrafish Craniofacial Tissues Upon Staining with Alcian Blue

Das kraniofaziale Skelett des Zebrafisches ist 5 Tage nach der Befruchtung (dpf) vollständig knorpelig und kann daher mit Alcianblau gefärbt werden, einem basischen Farbstoff, der in der Lage ist, an Glykosaminoglykane zu binden, die in Knorpeln reichlich vorhanden sind23. Dies führt dazu, dass der Knorpel blau gefärbt wird (Abbildung 1), so dass er mit einem Standard-Stereomikroskop, das in den meisten Laborumgebungen für Studenten verfügbar ist, von anderen in der L...

Dissektion von kraniofazialem Gewebe von Zebrafischen nach Färbung mit Alcian Blue

Zebrafish, given its optical transparency, is an excellent vertebrate model to study the mechanisms by which craniofacial cartilages form in the embryo. ...

dissection-zebrafish-craniofacial-tissues-upon-staining-with-alcian

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Identifizierung und seziert Organe von den erwachsenen Zebrafisch.

Dissection von Organen aus dem Adult Zebrafisch

Dieses Video beschreibt die Technik der Mikrodissektion des Gehirns eines erwachsenen Zebrafisches. Diese Methode hilft dabei, aus dem gesamten Gehirn gewonnene Neuorosphären zu erhalten, die weiter untersucht werden können.

Zebrafisch-Hirndissektion: Eine Technik der Fisch-Neurobiologie

Imaging von zerebrovaskulären Entwicklung in Zebrafisch-Larven beschrieben. Techniken zur 3D-Bildgebung zu erleichtern und zu ändern zerebrovaskuläre Entwicklung mit chemischen Behandlungen sind ebenfalls vorhanden.

Imaging und 3D-Rekonstruktion der zerebrovaskuläre Strukturen in embryonalen Zebrafisch

Visualisierung von experimentellen Daten ist zu einem wichtigen Element in Präsentation der Ergebnisse für die wissenschaftliche Gemeinschaft. Generation von Live-Zeitraffer-Aufnahme von wachsenden Embryos trägt zu einer besseren Präsentation und Verständnis für komplexe Entwicklungsprozesse. Dieses Protokoll ist eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Zellmarkierung über der Photo kaede Protein im Zebrafisch.

Visualisierung von Craniofacial Entwicklung in den sox10: kaede transgener Zebrafische Zeile mit Zeitraffer-konfokale Mikroskopie

Zeitraffer-konfokale Bildgebung ist eine leistungsstarke Technik zur Charakterisierung der embryonalen Entwicklung. Hier beschreiben wir die Methodik und zu charakterisieren kraniofazialen Morphogenese in Wildtyp-als auch PDGFRA, Smad5 und SMO mutierten Embryonen.

Analyse Craniofacial Morphogenese in Zebrafisch Mit 4D konfokale Mikroskopie

Hier beschreiben wir 3 Erwachsene Zebrafisch-Verletzung-Modelle und ihre kombinierte Nutzung mit immunsuppressiven medikamentösen Behandlung. Wir betreuen über Bildgebung Gewebe zu regenerieren und Mineralisierung der Knochen darin erkennen.

Erwachsenen Zebrafisch Verletzungen Modelle zur Untersuchung der Auswirkungen von Prednisolon bei der Regeneration von Knochengewebe

Hier präsentieren wir eine standardisierte Reihe von Protokollen, die überlegene okuläre Sulcus zu beobachten eine kürzlich identifiziert, evolutionär konservierte Struktur in den Augen der Wirbeltiere. Verwendung von Zebrafischlarven zeigen wir Techniken notwendig, Faktoren zu identifizieren, die auf die Gründung und Schließung der überlegenen okuläre Sulcus beitragen.

Visualisierung von der okulären Sulcus Superior in der Embryogenese Danio rerio

Dieses Protokoll demonstriert sequenzielle Immunfluoreszenz und Immunhistochemie an Kryosektionen von Zebrafischembryonen im Frühstadium, die präzise Kolokalisierungsanalysen in bestimmten Zellpopulationen ermöglichen.

Sequenzielle Immunfluoreszenz und Immunhistochemie an kryosektionierten Zebrafisch-Embryonen

Hier haben wir die Alizarin-Rot-Färbung verwendet, um zu zeigen, dass die Exposition gegenüber Bleiacetat eine Veränderung der Knochenmasse bei Zebrafischlarven verursacht. Diese Färbemethode kann an die Untersuchung des Knochenverlustes bei Zebrafischlarven angepasst werden, der durch andere gefährliche Giftstoffe induziert wird.

Verwendung von Alizarin-Rotfärbung zum Nachweis von chemisch induziertem Knochenverlust bei Zebrafischlarven

Hier stellen wir eine Methode vor, mit der mehrere Zebrafisch-Larvenproben (Danio rerio) ausgerichtet und kryosektioniert und auf einem einzigen Objektträger für die räumliche transkriptomische Analyse gesammelt werden können.

Räumlich kompakte Anordnung von Zebrafischlarvenschnitten für die räumliche Transkriptomanalyse

Diese Arbeit beschreibt ein Protokoll zur Quantifizierung der Kraniofacialform von Knorpelform mithilfe freier Software (tpsDigs2, MorphoJ und PAST), um Veränderungen der Gesichtsstruktur bei Zebrafischlarven zu messen.

Morphometrische Formanalysen: Die Analyse-Software-Werkzeugkaste zur Quantifizierung kraniofacialer Form bei Zebrafischen

Lernen Sie die Präparation kraniofazialer Knorpel von Danio rerio nach Alcian-Blue-Färbung. Dieses Protokoll ermöglicht die detaillierte Analyse von Gaumenmorphogenese auf Gewebe- und Zellebene.

Dissektion von kraniofazialem Gewebe von Zebrafischen nach Färbung mit Alcian Blue

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