Name: Modellierung von Hypoxie/Reoxygenationsschäden in proximalen tubulären Epithelzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Erfahren Sie ein reproduzierbares In-vitro-Protokoll zur Modellierung von Hypoxie/Reoxygenationsschäden in proximalen tubulären Epithelzellen. Diese Methode ermöglicht die Analyse mitochondrialer Atmungsparameter und Nierenverletzungsmarker.

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<table><tbody><tr><td>384-Well-qPCR-Platte</td><td>Angewandte Biosysteme</td><td>4309849</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Ortoalresa</td><td>Biocen22R</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>VWR</td><td>0757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>21331020</td><td></td></tr><tr><td>Epidermaler Wachstumsfaktor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>PanReac AppliChem</td><td>141086.1214</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Biowest</td><td>S181B-500</td><td></td></tr><tr><td>Heizblock</td><td>Eppendorf</td><td>ThermoMixer C</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0135</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxie-Inkubator</td><td>Memmert</td><td>ICO 50med</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&gamma;</td><td>ProspecBIo</td><td>CYT-358</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Memmert</td><td>ICO 105</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>VWR</td><td>0918-1L</td><td></td></tr><tr><td>ITSe</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Mehrkanal-Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Nicht-CO2 Inkubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR-Primer</td><td>Eurofins Genomik</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicillin – Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>qPCR Master Mix</td><td>NZYTech</td><td>MB22303</td><td></td></tr><tr><td>Echtzeit-qPCR-System</td><td>Angewandte Biosysteme</td><td>QuantStudio 5</td><td></td></tr><tr><td>Reverse transcription Master Mix</td><td>NZYTech</td><td>MB12502</td><td>Enthält eine Enzymmischung</td></tr><tr><td>RNAse-freies Wasser</td><td>HyClone</td><td>SH3053802</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XF Cell Mito Stresstest-Kit</td><td>Agilent</td><td>103015-100</td><td>Enthält Oligomycin, FCCP, Antimycin A und Rotenon</td></tr><tr><td>Seahorse XF DMEM Medium</td><td>Agilent</td><td>103575-100</td><td></td></tr><tr><td>Seepferdchen-XF-Glukose</td><td>Agilent</td><td>03577-100</td><td></td></tr><tr><td>Seepferdchen-XF-Glutamin</td><td>Agilent</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>Seepferdchen-XF-Pyruvat</td><td>Agilent</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 Analysator</td><td>Agilent</td><td>S7800BR</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>103792-100</td><td>Enthält eine XFe96-Zellkultur-Mikroplatte und eine XFe96-Sensorkartusche</td></tr><tr><td>Thermischer Zykler</td><td>BIO-RAD</td><td>T100 Thermocycler</td><td></td></tr><tr><td>Triiodothyronin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5516</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>UV-Vis-Spektrophotometer</td><td>DeNovix</td><td>DS-11</td><td></td></tr></tbody></table>

modellierung von hypoxie/reoxygenationsschäden in proximalen tubulären epithelzellen

Modeling Hypoxia/Reoxygenation Injury in Proximal Tubular Epithelial Cells

Modellierung von Hypoxie/Reoxygenationsschäden in proximalen tubulären Epithelzellen

Kidney transplantation accounts for approximately 60%-65% of all transplanted solid organs. Most donor kidneys are obtained from deceased individuals, ...

modeling-hypoxiareoxygenation-injury-proximal-tubular-epithelial

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die Wirkungen der Aktivierung der Proteinkinase C (PKC) Isozyme auf die mitochondriale Atmung und Funktionen mit oxidativen Phosphorylierung und auf Lebensfähigkeit der Zellen assoziiert werden beschrieben. Der Ansatz paßt adenoviralen Technik, um selektiv überexprimieren PKC-Isozyme in primären Zellkultur und einer Vielzahl von Assays, um mitochondriale Funktionen und Energiezustand der Zelle zu bestimmen.

Beurteilung der mitochondrialen Funktionen und Zellviabilität in Renal Überexpression Protein Kinase C-Isoenzyme

Quelle: Alluri, H., et.al. Sauerstoff-Glukose-Entzug und Reoxygenierung als In vitro Ischämie-Reperfusions-Verletzungsmodell zur Untersuchung der Blut-Hirn-Schranken-Dysfunktion. J. Vis. Exp. (2015). Das Video zeigt die Auswirkungen von Sauerstoff-Glukose-Entzug und anschließender Reoxygenierung auf mikrovaskuläre Endothelzellen (RBMECs) des Rattengehirns, indem hypoxische und nährstoffarme Bedingungen simuliert werden. Diese Bedingungen führen zu einer ATP-Depletion, einem erhöhten...

Einfluss von Sauerstoff-Glukose-Entzug und Reoxygenierung auf Zell-Zell-Interaktionen

Ischämie-Reperfusion (IR)-Schädigung ist mit einer hohen Morbiditäts- und Mortalitätsrate verbunden. Das Ziel des hier beschriebenen in vitro-Modells des Sauerstoff-Glukose-Departions und der Reoxygenierung (OGD-R) ist es, die Auswirkungen einer Ischämie-Reperfusionsverletzung auf eine Vielzahl von Zellen zu bewerten, insbesondere in Endothelzellen der Blut-Hirn-Schranke (BHS).

Sauerstoff-Glukose Deprivation und Reoxygenierung als<em&gt; In-vitro-</em&gt; Ischämie-Reperfusion Injury Modell zum Studium der Blut-Hirnschranke Dysfunction

Dieses Protokoll bietet eine kostengünstige Möglichkeit zu isolieren und zu charakterisieren Maus primäre renale tubuläre Zellen, die anschließend südlich kultiviert werden können, um renale biologischen Funktionen ex Vivo, einschließlich der mitochondrialen Bioenergetik zu beurteilen.

Isolierung, Charakterisierung und hohem Durchsatz extrazelluläre Flux-Analyse der Maus primäre renale tubuläre Epithelzellen

Dieses Protokoll beschreibt ein apikal-out-nekrotisierendes Enterokolitis-Modell (NEC)-in-a-dish, das Dünndarmenteroide mit umgekehrter Polarität verwendet und den Zugang zur apikalen Oberfläche ermöglicht. Wir bieten ein Immunfluoreszenz-Färbeprotokoll zum Nachweis von NEC-bedingten Epithelstörungen und eine Methode zur Bestimmung der Lebensfähigkeit von apikalen Enteroiden, die dem NEC-in-a-dish-Protokoll unterliegen.

In vitro Apical-out enteroides Modell der nekrotisierenden Enterokolitis

Im Folgenden beschreiben wir die Protokolle zur Gewinnung von Primärkulturen humaner tubulärer Epithelzellen (HRTEC) aus der Nierenrinde, um Monoschichten und dreidimensionale Kulturen auf einer extrazellulären Matrix (3D-HRTEC) zu entwickeln.

Entwicklung von Primärkulturen humaner tubulärer Nierenepithelzellen in Monolayern und dreidimensionalen Bedingungen

Wir präsentieren ein optimiertes Protokoll für die Verarbeitung ganzer menschlicher Nieren zur Isolierung und Kultivierung primärer proximaler Tubulus-Epithelzellen und die Anwendung dieser Zellen in einer dreidimensionalen, mikrofluidischen, mikrophysiologischen Plattform zur Rekapitulation des proximalen Nierentubuli.

Isolierung primärer humaner proximaler Tubula-Epithelzellen und ihre Verwendung bei der Erstellung eines mikrophysiologischen Modells des proximalen Tubulus der Niere

Selbstassemblierende menschliche Herzorganoide (hCOs) sind ein aufkommendes System zur Modellierung der menschlichen Herzentwicklung und -erkrankungen. Hier wird eine Methodik zur Erzeugung und Verletzung von hCOs mit Hypoxie-Reoxygenierung sowie Details zu den erwarteten histologischen und funktionellen Ergebnissen nach der Verletzung dargestellt.

Ein Hypoxie-Reoxygenierungs-Verletzungsmodell bei selbstassemblierenden menschlichen Kardioiden

Hier beschreiben wir eine detaillierte Verfahren zur Züchtung von primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten des menschlichen bronchialen Atemwege Gewebe einschließlich differenzierter Wachstum auf einer Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche. Diese Methode bietet eine reichhaltige Quelle von primären Zellen zur Untersuchung der Rolle der Atemwegsepithel in der menschlichen Lunge Gesundheit und Krankheit.

Primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten Grown

Chirp ist eine neuartige und schnelle Technik, um genomische Bindungsstellen der langen nicht-kodierenden RNAs (lncRNAs) abzubilden. Die Methode nutzt die Spezifität der anti-sense-Oligonukleotide Fliesen um die Auszählung von lncRNA-gebundene genomische Stellen zu ermöglichen.

Chromatin Isolierung von RNA-Reinigung (Chirp)

Erfahren Sie ein reproduzierbares In-vitro-Protokoll zur Modellierung von Hypoxie/Reoxygenationsschäden in proximalen tubulären Epithelzellen. Diese Methode ermöglicht die Analyse mitochondrialer Atmungsparameter und Nierenverletzungsmarker.

Modellierung von Hypoxie/Reoxygenationsschäden in proximalen tubulären Epithelzellen

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