Name: Dissektion von Drosophila melanogaster Indirekte Flugmuskulatur für Mikroskopie-Ansätze (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Lernen Sie die Präparation von Drosophila melanogaster-Flugmuskeln für mikroskopische Analysen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Sarkomerstrukturen und RNA-Regulation während der Myogenese.

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<table><tbody><tr><td>60 mm Gewebekulturschalen</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012921</td><td>60 mm, Polystyrol</td></tr><tr><td>Essigsäure, glazial (zertifizierte ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>Adenosintriphosphat (ATP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>Alufolie, schwer</td><td>Amazonas</td><td></td><td>12 Zoll. x 1000 Fuß.</td></tr><tr><td>Schwarze Silicium-Dissektionsschalen: Aktivkohlepulver</td><td>Millipore Sigma</td><td>C9157</td><td>Auch in den meisten Apotheken erhältlich</td></tr><tr><td>Schwarze Silicium-Dissektionsschalen: Sylgard 184</td><td>Millipore Sigma</td><td>761036</td><td>Um Silizium-Dissektionsschalen herzustellen, mischen Sie Sylgard-Komponenten in einem Ziploc-Beutel und mischen Sie sie gut. Aktivkohlepulver (~200 mg) zu Sylgard geben (~50 g), gut mischen, die Ecke des Beutels abschneiden, 60 mm Kulturschalen füllen, Blasen mit einer Pipettspitze entfernen und über Nacht aushärten.&nbsp;</td></tr><tr><td>Karton-Schlittenfach, Research Products International Corp</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop, Nikon AXR invertiertes Konfokalmikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td><a href="http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/</a></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop, Zeiss LSM 780 invertiertes konfokales Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com</a></td></tr><tr><td>Darwin Insektenaufzuchtkammer (Brutkasten)</td><td>Fisher Scientific/Darwin Chambers</td><td>IN034</td><td>Licht-, Temperatur- und Luftfeuchtigkeitskontrollierter Brutkasten</td></tr><tr><td>Dissektionsschale (schwarzes Glas)</td><td>Mikroskop Technik Diethelm</td><td>398011</td><td>Lymphbecken (Färbeschalen/Lymphtanks), schwarzes Glas, 4x4 cm, mit klarem Glasabdeckel</td></tr><tr><td>Dumont #3 Zange</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>11231-30</td><td>Dumoxel gerade Spitze 12 cm Tange mit 0,17 x 0,1 mm Spitze&nbsp;</td></tr><tr><td>Dumont #5 Zange</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>11252-20</td><td>Inox gerade Spitze 11 cm Zange, Biologie-Qualität mit 0,05 x 0,02 mm Spitze&nbsp;</td></tr><tr><td>EGTA (Egtazsäure)</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, Absolut (200 Proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP28184</td><td>Molekularbiologie-Qualitätsstufe</td></tr><tr><td>Fisherbrand Premium Cover Glass (18 x 18 mm), Coverslips</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548A</td><td>Glas, quadratisch, #1 Dicke (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Fisherbrand Premium Cover Glass (22 x 22 mm), Deckscheiben</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548B</td><td>Glas, quadratisch, #1 Dicke (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Flachboden-Zellkulturplatten (24-Well)</td><td>Fisher Scientific</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszierende Mikroskopkamera, Infinity8-Kamera</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>6 Megapixel, wenig Licht, monochromatisch</td></tr><tr><td>Fliege: Smn[E33]</td><td></td><td></td><td>Fliegentiere; Geschenk von Gregory Matera</td></tr><tr><td>Fliege: w[1118]</td><td>Bloomington Stock Center</td><td>RRID:BDSC_3605</td><td>Fliegentiere</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td>Molekularbiologie-Qualitätsstufe</td></tr><tr><td>Glyoxallösung (40 Gewicht % in H2O)</td><td>Millipore Sigma</td><td>128465</td><td>&nbsp; Das ist eine 40%-Standardlösung</td></tr><tr><td>Bildverarbeitungssoftware, Affinity Designer 2</td><td>Affinität</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>Bildverarbeitungssoftware, Image J (Fidschi)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>Insektennadeln</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>26002-10</td><td>Edelstahl, 0,1 mm Durchmesser (winzige Pins)</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>Methanol (HPLC)</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>A452-4</td><td>Bei -20 entspannen? Vor der Nutzung</td></tr><tr><td>Mikroskop-Objektträger, mit Frost</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-400</td><td>Schreibfläche, ungeladen, 75 mm x 25 mm x 1 mm</td></tr><tr><td>Mikroskopobjektträger, einfaches Glas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td>Vorgereinigt, 75 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>MX35 Ultra Mikrotom-Klingen</td><td>Epredien (Fisher Scientific)</td><td>3053835</td><td>Niedriges Profil, 34°F; Schneidwinkel; C35-Feder-80mm-Blätter funktionieren gut</td></tr><tr><td>Nagellack, klar (Sally Hansen Xtreme Wear Nail Lack)</td><td>Amazonas</td><td></td><td>0,4 fl. Unzen.</td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum</td><td>Millipore Sigma</td><td>S26-LITER</td><td></td></tr><tr><td>Nutator (Mini-Nutating Rocker, Benchmark)</td><td>Midwest Scientific</td><td>H3D1020</td><td>24 U/min, fixiert; 8 x 6 Zoll. Plattform mit Vertiefungsmatte</td></tr><tr><td>Paintbrush (Runde Nr. 0)</td><td>Amazonas</td><td></td><td>Runde Nr. 0 oder ein ähnlicher Pinsel aus jedem Kunstmaterial</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS): KCl</td><td>Millipore Sigma</td><td>529552-250GM</td><td>Bereite PBS gemäß Cold Spring Harb Protoc vor; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS): KH2PO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>P0662-500G</td><td>Bereite PBS gemäß Cold Spring Harb Protoc vor; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS): Na2HPO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9763-500G</td><td>Bereite PBS gemäß Cold Spring Harb Protoc vor; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS): NaCl</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>S271-1</td><td>Bereite PBS gemäß Cold Spring Harb Protoc vor; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>PR1MA Pipettenspitzen (10 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>Universal 10 & Mikro; L-Pipettenspitzen</td></tr><tr><td>PR1MA Pipettenspitzen (1000 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>Universal 1000 & Mikro; L-Pipettenspitzen</td></tr><tr><td>PR1MA Pipettenspitzen (200 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-200RK-NS</td><td>Universal 200 & Micro; L-Pipettenspitzen</td></tr><tr><td>Rhodamin-Phalloidin</td><td>Invitrogen, molekulare Sonden</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>Doppelseitiges Scotch-Klebeband</td><td>Scotch/3M (Staples)</td><td>649280</td><td>Beide Seiten sind mit Kleber beschichtet, 0,5" x 7 Yards, erhältlich bei den meisten Büromaterialhändlern</td></tr><tr><td>Natriumdihydrogenphosphatdihydrat (NaH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>Software: GraphPad Prism</td><td>GraphPad-Prisma</td><td></td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr><tr><td>Software: Infinity Analyze 7</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td><a href="https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/</a></td></tr><tr><td>Software: Microscoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>Taschentücher/ Kimtech Science Kimwipes Sensitive Task Wiper, 1 Lag</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>Standard-Taschentücher</td></tr><tr><td>Übertragungspipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td>Kunststoffpipette</td></tr><tr><td>Trition X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Frühlingsschere</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>15000-00</td><td>3 mm Schneide, Spitzendurchmesser 0,05 mm, Länge 8 cm</td></tr><tr><td>Vectashield mit DAPI</td><td>Vektorlabore</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield ohne DAPI</td><td>Vektorlabore</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>Whatman-Papier</td><td>Millipore Sigma</td><td>WHA1004070</td><td>Filterpapierkreise, Grade 4, 70 mm</td></tr><tr><td>Z10 Fluoreszierendes Stereo-Sektionsmikroskop</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>Z850 ergonomisches Stereo-Zoom-Seziermikroskop</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

dissektion von drosophila melanogaster indirekte flugmuskulatur für mikroskopie-ansätze

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

Dissektion von Drosophila melanogaster Indirekte Flugmuskulatur für Mikroskopie-Ansätze

The indirect flight muscles (IFMs) of Drosophila melanogaster are a powerful genetic model to explore foundational principles of myogenesis. The ...

dissection-drosophila-melanogaster-indirect-flight-muscles-for

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Drosophila Larven NMJ Dissection

Identifizierung von Mechanismen, die Schädigung der Muskulatur ist von entscheidender Bedeutung. Hier präsentieren wir die histologische Technik zur Herstellung Paraffin eingebetteten und Gefrierschnitten von Drosophila Brustmuskeln. Dies ermöglicht die Analyse von Muskel-Morphologie und Lokalisation von Proteinen und anderen Zellbestandteilen Muskel.

Paraffin-Embedded-und Gefrierschnitte von Drosophila Adult Muskeln

Dissection und Imaging von aktiven Zonen in der Drosophila Neuromuskulären Synapse

Die Drosophila-Flugmuskeln werden als Modellsystem für Muskelentwicklung und Physiologie verwendet. Dieses Video beschreibt die Flugmuskulatur von Erwachsenen und zeigt ein Protokoll zur Dissektion der sich entwickelnden indirekten Flugmuskulatur, die für die RNA-Sequenzierung von Puppen geeignet ist.

Drosophila Dissektion des späten indirekten Flugmuskels (IFM): Eine Methode zur Gewebeentnahme mit hohem Durchsatz

Dieses Video zeigt ein Protokoll zur Beurteilung der strukturellen Integrität neuromuskulärer Verbindungen in den dorsalen Längsmuskeln von Drosophila. Bei dem Verfahren werden Neuronen und Muskeln mit zwei unterschiedlichen Antikörpern gefärbt und die Fluoreszenzmuster zwischen mutierten und Wildtyp-Fliegen verglichen. Eine Verringerung der neuronalen Färbung bei mutierten Fliegen deutet auf eine Neurodegeneration hin, während die Muskelstruktur intakt bleibt.

Beurteilung der strukturellen Integrität der neuromuskulären Verbindungen des dorsalen Längsmuskels bei Drosophila

Studien der neuronalen Morphogenese unter Verwendung von Drosophila Larven dendritischen arborization (da) Neuronen profitieren von in - situ - Visualisierung von neuronalen und epidermalen Proteine durch Immun. Wir beschreiben ein Verfahren, das durch Entfernen von Muskelgewebe aus der Larvenkörperwand Immunfluoreszenzanalyse von da Neuronen und die umliegenden Hautzellen verbessert.

Entfernung von<em&gt; Drosophila</em&gt; Muskelgewebe aus Larval Filets für Immunfluoreszenzanalyse von sensorischen Neuronen und epidermalen Zellen

Wir berichten über eine Methode, um Muskelgebiet, zu quantifizieren, ist eine indirekte Methode Muskelmasse bei Drosophila Erwachsenen bestimmen. Wir demonstrieren die Anwendung unserer Methode durch die Analyse des indirekten Flugs in einem Drosophila -Modell myotonische Dystrophie Krankheit Muskeln.

Optische Cross-sectional Muskel Bereich Bestimmung von Drosophila Melanogaster Erwachsenen indirekten Flugmuskeln

Drosophila Flugmuskel ist ein leistungsfähiges Modell, um Transkriptionsregulation, alternative Spleißung, Stoffwechsel und Mechanobiologie zu studieren. Wir präsentieren ein Protokoll zur Zerlegung von fluoreszierend markierten Flugmuskeln aus lebenden Pupas, um hoch angereicherte Proben zu erzeugen, die ideal für Proteomik und Tiefensequenzierung sind. Diese Proben können wichtige mechanistische Einblicke in verschiedene Aspekte der Muskelentwicklung bieten.

Dissektion von Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches

Es wird ein Protokoll vorgestellt, das die Visualisierung intakter Drosophila melanogaster in jedem Entwicklungsstadium mittels Mikrocomputed Tomographie ermöglicht.

Ganztierbildgebung von Drosophila melanogaster mittels Mikrocomputed Tomographie

Dieser Bericht stellt ein neues Probenvorbereitungsverfahren zur Visualisierung neuromuskulärer Verbindungen in Drosophila-Larven dar. Diese Methode ist im Vergleich zur herkömmlichen Methode wirksamer bei der Verhinderung des Einrollens der Proben und eignet sich besonders für die Ultrastrukturanalyse der neuromuskulären Verbindung von Drosophila .

Optimierung des Probenvorbereitungsprozesses für die Transmissionselektronenmikroskopie von neuromuskulären Verbindungen in Drosophila-Larven

Drosophila ist ein etabliertes Modell für die Untersuchung von Schlüsselmolekülen, die die Myogenese regulieren. Derzeitige Methoden reichen jedoch nicht aus, um die Dynamik der mRNA-Transkription und die räumliche Verteilung innerhalb der Synzytien zu bestimmen. Um diese Einschränkung zu beheben, haben wir eine RNA-Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierungsmethode optimiert, die den Nachweis und die Quantifizierung von mRNAs auf Einzelmolekülebene ermöglicht.

Untersuchung der Transkriptionsdynamik von Muskeln auf Einzelmolekülskalen in Drosophila

Lernen Sie die Präparation von Drosophila melanogaster-Flugmuskeln für mikroskopische Analysen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Sarkomerstrukturen und RNA-Regulation während der Myogenese.

Dissektion von Drosophila melanogaster Indirekte Flugmuskulatur für Mikroskopie-Ansätze

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