Name: Ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis und der Isolierung von Lamina propria für die Erstellung von Immunzellprofilen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Erfahren Sie, wie man ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis etabliert und Immunzellen aus der Lamina propria für Durchflusszytometrie isoliert. Dieses Protokoll ermöglicht detaillierte Analysen intestinaler Immunantworten.

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<li>Leaphart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+TLR4+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis+by+modulating+intestinal+injury+and+repair1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair1.</a> J Immunol. 179 (7), 4808-4820 (2007).</li>
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<li>Kaplina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+The+role+of+hypoxia%2C+gut+microbiome%2C+and+microbial+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: The role of hypoxia, gut microbiome, and microbial metabolites.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2471(2023).</li>
<li>Good, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+rhamnosus+hn001+decreases+the+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice+and+preterm+piglets%3A+Evidence+in+mice+for+a+role+of+TLR9%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus rhamnosus hn001 decreases the severity of necrotizing enterocolitis in neonatal mice and preterm piglets: Evidence in mice for a role of TLR9.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 306 (11), G1021-G1032 (2014).</li>
<li>Denning, T. L., Bhatia, A. M., Kane, A. F., Patel, R. M., Denning, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+nec%3A+Role+of+the+innate+and+adaptive+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of nec: Role of the innate and adaptive immune response.</a> Semin Perinatol. 41 (1), 15-28 (2017).</li>
<li>Yu, Y. -R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLOS ONE. 11 (3), e0150606(2016).</li>
<li>Mihi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-22+signaling+attenuates+necrotizing+enterocolitis+by+promoting+epithelial+cell+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin-22 signaling attenuates necrotizing enterocolitis by promoting epithelial cell regeneration.</a> Cell Rep Med. 2 (6), 100320(2021).</li>
<li>Bautista, G. M., Cera, A. J., Chaaban, H., Mcelroy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+review+and+update+of+in+vivo+models+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art review and update of in vivo models of necrotizing enterocolitis.</a> Front Pediatr. 11, 1161342(2023).</li>
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<li>Blum, L., Vincent, D., Boettcher, M., Knopf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+aspects+of+necrotizing+enterocolitis+models%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological aspects of necrotizing enterocolitis models: A review.</a> Front Immunol. 15, 1434281(2024).</li>
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<li>Booth, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+functional+properties+of+gastric+tissue-resident+memory+T+cells+from+children%2C+adults%2C+and+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization and functional properties of gastric tissue-resident memory T cells from children, adults, and the elderly.</a> Front Immunol. 5, 294(2014).</li>
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<table><tbody><tr><td>1 mL Syringe-Tuberculin Slip Tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td>Spritzen für die Ernährung mit der Formel</td></tr><tr><td>1.5 mL semi-micro Einwegküvetten</td><td>BRAND GMBH + CO KG</td><td>759085D</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml Microtubes Clear</td><td>Axygen - Corning Inc.</td><td>MCT-175-C</td><td>Nonpryogenic &amp; Rnase-/Dnase-frei</td></tr><tr><td>5% Sauerstoff, Balance Stickstoff Zertifiziertes Referenzmaterial, Größe 200 Hochdruckstahlzylinder, CGA 580</td><td>Airgas</td><td>X02NI95C2003186</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mo CD16/CD32 Gereinigt Klon: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-85</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD16/CD32 Gereinigt Klon: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-86</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse Ly-6C Klon: HK1.4 Isotyp: Rat IgGc</td><td>BioLegend</td><td>128015</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Spüllösung</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>BB515 Rat Anti-CD11b Klon: M1/70</td><td>BD Biosciences</td><td>564455</td><td></td></tr><tr><td>BB700 Rat Anti-Mouse CD4 Klon: RM4-5</td><td>BD Biosciences</td><td>566408</td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST</td><td>Becton Dickinson</td><td>365867</td><td>Serum Tube</td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Kompatible Racked Filterspitzen, p1200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-365</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Kompatible Racked Filterspitzen, p20</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-366</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Kompatible Racked Filterspitzen, p200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-362</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Stain Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>563795</td><td></td></tr><tr><td>BUV615 Rat Anti-Mouse Ly-6G Klon: 1A8</td><td>BD Biosciences</td><td>751263</td><td></td></tr><tr><td>BV650 Rat Anti-Mouse I-A/I-E Klon: M5/114.15.2</td><td>BD Biosciences</td><td>563415</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Neonatal Mäuse</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD45-VioGreen Maus</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-102-412</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Antikörper, anti-Maus, PE-Vio 770, REAfinity Klon REA286</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-119-659</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus Echtzeit-PC-Systeme&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase Typ 4</td><td>Worthington Biochemical Corporation&nbsp;</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>DL-Dithiothreitol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D9779-5g</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience FOXP3/Transkriptionsfaktor Färbeset</td><td>Life Technologies Corp.&nbsp;</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0,5M), pH 8,0</td><td>Quality Biological Inc</td><td>351-027-721</td><td></td></tr><tr><td>Esbilac Welpenmilchersatz</td><td>Pet-Ag, Inc.</td><td>99502-1</td><td>Welpenmilch</td></tr><tr><td>Fisherbrand Einwegküvetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-127</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrol Einweg Serologische Pipetten mit Vergrößerungsstreifen (Papier/Kunststoffummantelung), 10mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrol Einweg Serologische Pipetten mit Vergrößerungsstreifen (Papier/Kunststoffummantelung), 25mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrol Einweg Serologische Pipetten mit Vergrößerungsstreifen (Papier/Kunststoffummantelung), 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11F</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrol Einweg Serologische Pipetten mit Vergrößerungsstreifen (Papier/Kunststoffummantelung), 5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>Genie Temp-Shaker 300</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>SI-G1600</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator (Protokoll; m_intestine-01)</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS&nbsp; C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130096334</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye Red 780 Lebensfähigkeitsfärbung</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol ReagentPlus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prims Software, Version 10.0</td><td>GraphPad</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Rundboden Polypropylen Kulturrohr mit Zwei-Positionen-Ventilverschluss</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-000-212</td><td></td></tr><tr><td>Handi+ Sauerstoffanalysator</td><td>Maxtec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution</td><td>Gibco</td><td>141650-095</td><td></td></tr><tr><td>HEPES-Puffer</td><td>Mediatech, Inc.&nbsp;</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxiekammer</td><td>Billups-Rothenburg, Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Schneider et al., 2012</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris-Schere, 10,2cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-655</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris-Schere, 9cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-598</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex&trade; Swiss Jeweler-Style Pinzette</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-110</td><td></td></tr><tr><td>Isolette Säuglingsinkubator</td><td>Air-Shields Vickers</td><td>C100-200-2 Series 02</td><td>Inkubator für Mäuse</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3129-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Luria Broth Broth, Miller Molecular Genetics Pulver</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA Lagerlösung</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenrohre</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>1,5 ml, klar, graduiert, steril</td></tr><tr><td>Nano

ein neonatales mausmodell der nekrotisierenden enterokolitis und der isolierung von lamina propria für die erstellung von immunzellprofilen

A Neonatal Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis and Lamina Propria Isolation for Immune Cell Profiling

Ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis und der Isolierung von Lamina propria für die Erstellung von Immunzellprofilen

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe inflammatory disease of the neonatal intestine, primarily affecting preterm infants. NEC is characterized by ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Seman, B. G. et al. Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis. J. Vis. Exp. (2020)Das Video demonstriert ein neonatales Mausmodell zur Untersuchung systemischer Infektionen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien. Neugeborene Welpen werden mit hoch- oder niedrigdosierten bakteriellen Suspensionen injiziert und zur Nachsorge zu ihrer Mutter zurückgegeben. Die gekapselten Bakterien entgehen der frühen Immundetektion, breiten sich systemisch aus und werden...

Modellierung von Infektionen bei neonatalen Mäusen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien

Hier wird ein Verfahren für die Festlegung der systemischen Infektion in der neonatalen Ratten mit Kulturen von Escherichia coli K1 beschrieben. Diese nichtinvasive Vorgehensweise erlaubt Besiedlung des Magen-Darm-Trakt, die Translokation des Erregers in den systemischen Kreislauf, und das Eindringen des zentralen Nervensystems in den Plexus choroideus.

Nichtinvasive Modell Neuropathogenic Escherichia coli Infektion in der neonatalen Ratten

Dieses Protokoll bietet die notwendigen Schritte zu etablieren und neonatale Sepsis bei 7 Tage alten Mäusen zu bewerten.

Eine kontrollierte Mausmodell für neonatale Sepsis Biofilm

Diese Studie beschreibt den Prozess der Gavaging genauen Mengen von Probiotika mit Neugeborenen Mäusen. Der Versuchsaufbau wurde optimiert, um gehören aber nicht beschränkt auf probiotische Dosierung, Methoden der Verwaltung und Quantifizierung der Bakterien im Darm.

Probiotische Studien an neugeborenen Mäusen mit Magensonde

Enteroids entstehen als neuartige Modell in der Studie der menschlichen Krankheit. Das Protokoll beschreibt, wie eine Enteroid Modell der menschlichen nekrotisierenden Enterokolitis mit Lipopolysaccharid (LPS) Behandlung von Enteroids generiert aus neonatalen Gewebe zu simulieren. Gesammelte Enteroids zeigen entzündliche Veränderungen, wie Sie die in menschlichen nekrotisierenden Enterokolitis gesehen.

Neuartige menschlichen epitheliale Enteroid Modellcharakter für die nekrotisierende Enterokolitis

Wir entwickelten ein Modell der Chorioamnionitis, um die fetale Exposition gegenüber mütterlichen Entzündungen (FEMI) ohne Komplikationen lebender Organismen zu simulieren, um die Auswirkungen von FEMI auf die Entwicklung des Darmtraktes der Nachkommen zu untersuchen. Dies ermöglicht die Untersuchung der mechanistischen Ursachen für die Entwicklung von Darmverletzungen nach Chorioamnionitis.

Ein murines Modell der fetalen Exposition gegenüber mütterlicher Entzündung, um die Auswirkungen der akuten Chorioamnionitis auf die Darmentwicklung von Neugeborenen zu untersuchen

Die Infektion von neonatalen Mäusen mit biolumineszierendem E. coli O1:K1:H7 führt zu einer septischen Infektion mit signifikanter Lungenentzündung und Lungenpathologie. Hier beschreiben wir Verfahren zur Modellierung und weiteren Untersuchung der neonatalen Sepsis unter Verwendung von längsinaler intravitaler Bildgebung parallel zur Aufzählung systemischer bakterieller Belastungen, entzündlicher Profilierung und Lungenhistopathologie.

Ein neonatales Bildgebungsmodell der gramnegativen bakteriellen Sepsis

Dysregulierte intestinale epitheliale Barrierefunktion und Immunantworten sind Kennzeichen entzündlicher Darmerkrankungen, die aufgrund fehlender physiologischer Modelle noch schlecht untersucht sind. Hier beschreiben wir ein Maus-Darmschleifenmodell, das ein gut vaskularisiertes und exteriorisiertes Darmsegment verwendet, um die Schleimhautpermeabilität und die Leukozytenrekrutierung in vivo zu untersuchen.

Funktionelle Beurteilung der Intestinalpermeabilität und der neutrophilen transepithelialen Migration bei Mäusen mit einem standardisierten Darmschleifenmodell

Nekrotisierende Enterokolitis (NEC) ist die schwerste gastrointestinale (GI) Erkrankung, die häufig bei Frühgeborenen auftritt, insbesondere bei Säuglingen mit sehr niedrigem Geburtsgewicht, mit hoher Mortalität und unklarer Pathogenese. Die Ursache von NEC kann mit entzündlichen Anomalien des Immunregulationssystems zusammenhängen. Ein NEC-Tiermodell ist ein unverzichtbares Werkzeug für die Immunforschung von NEC-Erkrankungen. NEC-Tiermodelle verwenden normalerweise C57BL/6J-Neugeborenenmäuse;...

Ein neonatales BALB/c-Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis

Dieses Protokoll beschreibt ein in vitro Modell der nekrotisierenden Enterokolitis (NEC), das für mechanistische Studien zur Krankheitspathogenese verwendet werden kann. Es verfügt über einen mikrofluidischen Chip, der mit Darmenteroiden besät ist, die aus dem menschlichen Neugeborenendarm, Endothelzellen und dem Darmmikrobiom eines Neugeborenen mit schwerem NEC stammen.

Mikrofluidisches Modell der nekrotisierenden Enterokolitis unter Einbeziehung menschlicher neonataler Darmenteroide und eines dysbiotischen Mikrobioms

Frühgeburten (Entbindung &lt; 37. Woche) sind ein dringendes globales Gesundheitsproblem mit suboptimalen Präventions- und Behandlungsmöglichkeiten. Wir stellen ein Mausmodell der aufsteigenden vaginalen bakteriellen Infektion induzierten Frühgeburt vor und skizzieren, wie die daraus resultierende neonatale Morbidität und Mortalität analysiert werden kann.

Modellierung von aufsteigenden vaginalen Infektionen, Frühgeburten und neonataler Morbidität bei Mäusen

Erfahren Sie, wie man ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis etabliert und Immunzellen aus der Lamina propria für Durchflusszytometrie isoliert. Dieses Protokoll ermöglicht detaillierte Analysen intestinaler Immunantworten.

Ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis und der Isolierung von Lamina propria für die Erstellung von Immunzellprofilen (Video) | JoVE Journal

Ein neonatales Mausmodell der nekrotisierenden Enterokolitis und der Isolierung von Lamina propria für die Erstellung von Immunzellprofilen

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