Name: Erstellung eines auf Prostataorganoiden basierenden Mausmodells zur Untersuchung von Wirts-Pathogen-Interaktionen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Erfahren Sie die Erstellung eines 2D-Prostataepithelmodells aus Mausorganoiden zur Untersuchung von Wirts-Pathogen-Interaktionen mit uropathogenem Escherichia coli. Diese Methode ermöglicht direkten Zugang zur apikalen Oberfläche für Infektionsstudien.

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<table><tbody><tr><td>48 Brunnenplatten</td><td>Sarstedt</td><td>83.3923</td><td>Untere Form: flach</td></tr><tr><td>5&alpha;-Androstan-17&beta;-ol-3-one Dihydrotestosteron</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380</td><td>Es wurde als DHT bezeichnet. Stocklösung 10&mu; M in 100 % Ethanol</td></tr><tr><td>8-Bohrloch-PET-Objektträger mit 40 Elektroden pro Brunnen&nbsp;</td><td>Angewandte Biophysik</td><td>8W10E+</td><td>Objektträger für TEER-Messungen verwendet</td></tr><tr><td>96 Brunnenplatten</td><td>Sarstedt</td><td>82.1583</td><td>Untere Form: konisch</td></tr><tr><td>Vorwärts Dulbecco' s modifizierte Eagle Medium/F12&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td>Es wurde als adDMEM/F12+/+ bezeichnet, wenn es mit 10 mmol L&minus ergänzt wurde; 1 HEPES und 1x GlutaMAX</td></tr><tr><td>Ampicilin</td><td>Roth</td><td>K029.2&nbsp;</td><td>Konzentrationsbestand 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Anti-CD24a-Antikörper</td><td>Proteintech</td><td>10600-1-AP</td><td>Primärer Antikörper; Verdünnung 1:100 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anti-Cytokeratin 5 Alexa Fluor 647 Antikörper&nbsp;</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab193895</td><td>Primärer Antikörper; Verdünnung 1:100 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anti-Rabbit IgG Alexa Fluor 488&nbsp; Antikörper</td><td>Invitrogen</td><td>A21441</td><td>Sekundärer Antikörper; Verdünnung 1:500 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anti-ZO-1 Polyklonaler Antikörper</td><td>Proteintech</td><td>21773-1-AP</td><td>Primärer Antikörper; Verdünnung 1:750 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>B27, 50x</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA) Fraktion V, Neuseeland – Ursprung</td><td>Roth</td><td>8076.3</td><td>Komponente des Blockierungspuffers, die bei 1 % in 1x PBS verwendet wird</td></tr><tr><td>Kammer-&micro;-Slide-8-Bohrungen</td><td>Ibidi</td><td>80806</td><td>Oberflächenmodifikation: ibiTreat</td></tr><tr><td>Konisches Rohr (15 mL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1943</td><td>Der flache Boden eignet sich besser für kleine Pellets.&nbsp;</td></tr><tr><td>Dinatriumethylendiamintetraacetat 2H2O (EDTA)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>8043.2</td><td>Hausgemacht: 93,0 g in 400 mL H2O, pH-Wert auf 8,0 anpassen, einfach das Volumen mit H2O bis 500 mL; 0,5 M EDTA; Komponente des Durchflusszytometerpuffers</td></tr><tr><td>Dulbeccos ausgewogene Salzlösung (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>PBS</td></tr><tr><td>ECHO Revolve Mikroskop&nbsp;</td><td>ECHO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECIS&nbsp; Z-Theta -&nbsp; Impedanzbasiertes Zellanalysesystem</td><td>Angewandte Biophysik</td><td>ECIS&nbsp; Z-Theta</td><td>Das System umfasst: 16 und/oder 96 Brunnenstationen; externes Steuermodul; Laptop-PC; ECIS-Steuerungs-, Erfassungs- und Anzeigesoftware; erhöhtes Feldmodul für automatisierte Zellmigration und Elektroporation&NBSP;</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS) Superior</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0615</td><td>Komponente des Durchflusszytometerpuffers; Komponente des Kulturmediums der 293T-Zelllinie; Bestandteil des Kulturmediums HEK293T Zelllinie</td></tr><tr><td>Flash-Phalloidin Rot 594</td><td>Biolegende</td><td>424203</td><td>Verdünnung 1:250 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Durchflusszytometerpuffer</td><td></td><td></td><td>1x PBS, 10% FBS, 5 mM EDTA</td></tr><tr><td>Gentamicin &nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-038</td><td>L-Alanyl-L-Glutamin-Dipeptid, Bestandteil von adDMEM/F12+/+&nbsp;</td></tr><tr><td>Harvard Biochrom Ultrospec 10 Zelldichtemeter</td><td>Fisher Scientific</td><td>10704417</td><td></td></tr><tr><td>HCS CellMask Deep Red Fleck</td><td>Lebenstechnologien</td><td>H32721</td><td>Verdünnung 1:1.000 in 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>HEK293T Zelllinie, transfiziert mit dem Noggin-Fc-Expressionsvektor der Maus</td><td>Zelllinie von Prof. Dr. Clevers</td><td></td><td>Wurde verwendet, um Noggin zu produzieren; Kulturmedium: 500 ml DMEM, hoher Glukosespiegel, GlutaMAX, Pyruvat (Gibco Life Technologies, 31966) + 50 ml FBS; Farin et al. Gastroenterologie 143.6 (2012): 1518-1529</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630056</td><td>Komponente von adDMEM/F12+/+&nbsp;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp;</td><td>Lebenstechnologien</td><td>H3570</td><td>Verdünnung 1:5.000 in 1x PBS</td></tr><tr><td>Menschlicher epidermaler Wachstumsfaktor (EGF)&nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>Konzentrationsstock 500 & Mikro; g/mL</td></tr><tr><td>Inokulationsschleifen</td><td>Sarstedt</td><td>86.1567.010</td><td></td></tr><tr><td>Inokulationsröhrchen</td><td>Sarstedt</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>Leica Stellaris 5 Konfokalmikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luria Bertani Brühe (LB Brühe)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>X968.1</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>Extrazelluläre Matrix (ECM)</td></tr><tr><td>N-Acetylcystein&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-25G</td><td>Konzentrationsstock 500 mM</td></tr><tr><td>Noggin CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NovoCyte Quanteon&nbsp;</td><td>Agilent</td><td></td><td>Durchflusszytometer</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>verwendet mit 4 % in 1x PBS, 4 % Saccharose</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ant-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>Q-VETTES semi-mikro</td><td>Ratiolab</td><td>2712120</td><td></td></tr><tr><td>RHOKi (Y-27632)</td><td>AbMole</td><td>M1817</td><td>RhoA/ROCK-Inhibitor; Konzentrationsstock 10 mM</td></tr><tr><td>R-spodin1 CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin1 exprimiert die 293T-Zelllinie</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCC111</td><td>Zur Herstellung von R-spo1 CM verwendet; Kulturmedium: 500 ml DMEM, hoher Glukosespiegel, GlutaMAX, Pyruvat (Gibco Life Technologies, 31966) + 60 ml FBS&nbsp;</td></tr><tr><td>TGF&beta; i (A-83-01)</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>ALK4/5/7-Inhibitor; Konzentrationsbestand 5 mM&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td>verwendet 0,5 % verdünnt in PBS 1x</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzym&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>Enzymatisches Zell-Dissoziationsmittel zur Verdauung von 3D-Maus-Prostataorganoiden</td></tr><tr><td>Uropathogene Escherichia coli Stamm UTI89</td><td>WT-Stamm von Prof. Dr. Dobrindt</td><td></td><td>transformiert mit pFPV-mCherry (Addgene #20956)</td></tr></tbody></table>

erstellung eines auf prostataorganoiden basierenden mausmodells zur untersuchung von wirts-pathogen-interaktionen

Generation of a Mouse Prostate Organoid-Based Model for Studying Host-Pathogen Interactions

Erstellung eines auf Prostataorganoiden basierenden Mausmodells zur Untersuchung von Wirts-Pathogen-Interaktionen

Aging men are highly affected by prostate diseases, such as benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer. Together, these conditions ...

generation-mouse-prostate-organoid-based-model-for-studying-host

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Organoide, die von Tumoren abgeleitet werden, sind eine Art von 3D-Zellkulturmodell, das die pathologischen Merkmale und die organspezifische Zelllinie von Tumoren beibehalten kann. Im Beispielprotokoll werden wir sehen, wie Wissenschaftler Organoide aus einem Prostatatumor aus einem gentechnisch veränderten Mausmodell erzeugen.

Herstellung von Organoiden aus Tumoren: Ein 3D-In-vitro-Tumormodell

In diesem Video demonstrieren wir die Kultivierung von isolierten Prostata-Epithelzellen der Maus mit einer auf Matrix-Gel-Ringen basierenden Kulturtechnik. Dieser Ansatz kann ergänzende Informationen über die Differenzierungsfähigkeit von Prostataepithelzellen zur Bildung von 3D-Drüsenstrukturen als Reaktion auf genetische oder pharmakologische Manipulation liefern.

Prostata-Organoid-Assay: Eine auf Matrixgel-Ringen basierende Ex-vivo-Kulturtechnik zur Untersuchung der Differenzierungsfähigkeit von Prostata-Epithelzellen

Aus Stammzellen gewonnene Kulturen bergen ein enormes Potenzial zur Modellierung von Infektionskrankheiten. Hier wird die Kultur von mausischen und menschlichen Magenorganoiden beschrieben, die aus adulten Stammzellen gewonnen werden. Den Organoiden wird der Magenerreger Helicobacter pylori mikroinjiziert.

Organoide als Modell für Infektionskrankheiten: Kultur von humanen und murinen Magen Organoide und Mikroinjektion von Helicobacter Pylori

Gentechnisch veränderte Mäuse sind nützliche Modelle für die Untersuchung von Prostata-Krebs-Mechanismen. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Identifizierung und sezieren Prostate Lappen aus einer Maus Urogenitales System, basierend auf Histologie, zu unterscheiden und zu isolieren und als Sphäroide für nachgelagerte Analysen der primären Prostata-Zellen in Vitro Kultur.

Identifikation, histologische Charakterisierung und Dissektion der Maus Prostata Lappen für In-vitro-3D Sphäroid Kultur Modelle

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um menschliche primäre Prostata organoide Handhabung führen dann empfehle Endpunkte zur Beurteilung der Phänotyp. Aussaat, Kultur Wartung, Wiederherstellung von Matrix Gel sind morphologische Quantifizierung, einbetten und schneiden, FFPE-Schnitt, ganz-Mount Färbung und Anwendung von kommerziellen Assays bezeichnet.

Bearbeitung und Bewertung der menschlichen primäre Prostata organoide Kultur

Wir zeigen eine Methode zur Nekropsie und Zerlegung von Prostatakrebsmodellen der Maus, die sich auf die Prostatatumorsektion konzentriert. Ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Erzeugung von Maus-Prostatatumor-Organoiden wird ebenfalls vorgestellt.

Generierung von Tumororganoiden aus gentechnisch veränderten Mausmodellen von Prostatakrebs

Maus-Prostata-Organoide stellen einen vielversprechenden Kontext zur Bewertung von Mechanismen dar, die die Differenzierung regulieren. Dieses Papier beschreibt einen verbesserten Ansatz zur Etablierung von Prostataorganoiden und führt Methoden ein, um (1) Proteinlysat aus Organoiden zu sammeln und (2) Organoide für die konfokale Volltonmikroskopie zu fixieren und zu färben.

Bewertung der Differenzierungskapazität von Mausprostataepithelzellen mithilfe der organoiden Kultur

Hier wird ein Protokoll zur Untersuchung pharmakologischer Reaktionen bei prostataepitheliale Organoide vorgestellt. Organoide ähneln der in vivo-Biologie und rekapitulieren die Genetik der Patienten, was sie zu attraktiven Modellsystemen macht. Prostata-Organoide können aus Wildtyp-Prostata, gentechnisch veränderten Mausmodellen, gutartigem menschlichem Gewebe und fortgeschrittenem Prostatakrebs hergestellt werden.

Prostataorganoidkulturen als Werkzeuge zur Übersetzung von Genotypen und Mutationsprofilen in pharmakologische Reaktionen

Dreidimensionale Kulturen von Patienten-BMPC-Proben und Xenografts von Knochenmetastasierung Prostatakrebs erhalten die funktionelle Heterogenität ihrer ursprünglichen Tumoren, was zu Zysten, Sphäroiden und komplexen, tumorartigen Organoiden führt. Dieses Manuskript bietet eine Optimierungsstrategie und ein Protokoll für die 3D-Kultur heterogener Patientenproben und deren Analyse mit IFC.

Etablierung und Analyse von dreidimensionalen (3D) Organoiden, abgeleitet von Patienten prostatakrebs Knochenmetastasen Proben und ihre Xenografts

Die Heterogenität des Prostatakarzinoms und die Resistenz gegen die Behandlung bleiben Herausforderungen. Wir beschreiben ein Protokoll zur Generierung von patientenabgeleiteten Organoiden (PDOs), die wichtige elterliche Tumoreigenschaften erhalten. Dieses standardisierte Modell unterstützt das Wirkstoffscreening und die Weiterentwicklung der Präzisionsmedizin.

Etablierung und Pflege von patienteneigenen Prostatakrebs-Organoiden: Ein detailliertes experimentelles Protokoll

Die Studie präsentiert eine Methode zur in-vitro-Untersuchung bakterieller Infektionen unter Verwendung von Gewebestammzell-abgeleiteten Intestinalorganoiden. Das Protokoll beschreibt, wie man Organoide in zwei Dimensionen kultiviert und differenziert, sie mit adhärent-invasiven Escherichia coli infiziert und wichtige Werte bewertet, darunter das Durchbrechen der Epithelbarriere, die Bildgebung der Infektion und die Antwort der epithelialen RNA.

Eine zweidimensionale Organoidkultur auf Invasin- oder Basementmembranextrakt zur Untersuchung von Wirts-Bakterien-Interaktionen

Erfahren Sie die Erstellung eines 2D-Prostataepithelmodells aus Mausorganoiden zur Untersuchung von Wirts-Pathogen-Interaktionen mit uropathogenem Escherichia coli. Diese Methode ermöglicht direkten Zugang zur apikalen Oberfläche für Infektionsstudien.

Erstellung eines auf Prostataorganoiden basierenden Mausmodells zur Untersuchung von Wirts-Pathogen-Interaktionen

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