Name: Lentiviral-induzierte striatale Pathologie als präklinisches Modell der polyglutamin-spinocerebellären Ataxie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-13T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Erfahren Sie die Entwicklung eines lentiviralen Striatum-Modells für SCA2 mit stereotaktischer Injektion. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Neurodegenerationsmechanismen und die Evaluation therapeutischer Ansätze.

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<ol><li>Afonso-Reis, R., Afonso, I. T., Nóbrega, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Status+of+Gene+Therapy+Research+in+Polyglutamine+Spinocerebellar+Ataxias%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Current Status of Gene Therapy Research in Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias.</a> Int J Mol Sci. 22 (8), 4249(2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,9% NaCl</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Verwendet für die Herstellung von Anästhesie- und Antagonisten-Mischungen</td></tr><tr><td>100 mm Gewebekulturschalen</td><td>SPL Life Sciences</td><td>11090</td><td></td></tr><tr><td>ABC-Kit (Avidin-Biotin-Komplex)</td><td>VECTASTAIN Elite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole (5,0 mg/ml)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Antagonist von Medetomidin</td></tr><tr><td>Tischzentrifuge</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Biosicherheitsschrank, Klasse II (BSL-2 konform)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylierter Sekundärantikörper</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA)</td><td>NZYTech</td><td>MB47002</td><td></td></tr><tr><td>Hirnschnitte (z. B. 30&ndash;40 &micro;m koronales Schnitte) immungefärbt für DARPP-32</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counter-Plugin (FIJI)</td><td>Eingebaut / ImageJ</td><td>&mdash;</td><td>Tool für manuelle Aggregatenzählung</td></tr><tr><td>CO2-Inkubator (37 °C, 5% CO2, befeuchtet)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Computerarbeitsplatz</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Verwendet für Bildverarbeitung und Softwareausführung</td></tr><tr><td>Konische Ultrazentrifugenniere</td><td>Beckman Coulter</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>Wattestäbchen</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Verwendet für Periosteum-Entfernung</td></tr><tr><td>Kryostat mit Probenhalter-Scheiben</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>DAB (Diaminobenzidin)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Digitaler stereotaktischer Koordinatenleser</td><td>Stoelting/WPI</td><td>51725</td><td>Digitale Anzeige zur Koordinatenmessung</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modifiziertes Eagle Medium (DMEM, hohe Glukose)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>11-965-092</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70, 96 und 100%</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, 70%</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Für Kopfhautdesinfektion</td></tr><tr><td>Fentanyl (0,05 mg/ml)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Anästhetische Komponente</td></tr><tr><td>Fetales bovines Serum (FBS), hitzeinaktiviert</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>10500064</td><td></td></tr><tr><td>FIJI (ImageJ-Distribution)</td><td>NIH / ImageJ</td><td>https://fiji.sc/</td><td>Open-Source-Software für manuelle Quantifizierung von Aggregaten</td></tr><tr><td>Feinzange (für Zehenkniffen)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Für Anästhesie-Tiefenüberwachung</td></tr><tr><td>Flumazenil (0,1 mg/ml)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Antagonist von Midazolam</td></tr><tr><td>Zange und Skalpell</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Für Periosteum-Entfernung und Schädelexposition</td></tr><tr><td>Hamilton&nbsp;700/1700 Serie Mikroliter/Gasdichte Spritzen</td><td>Hamilton / Fisher Sci.</td><td>7653-01/10550203</td><td>Für Viruslösungsladung</td></tr><tr><td>Hamilton&nbsp;Kleine Hub-Abnehmbare Nadeln (26G)</td><td>Hamilton / Fisher Sci.</td><td>7804-03/ 10698205</td><td>Für Viruszufuhr</td></tr><tr><td>Heizkissen (für Nagetiere)</td><td>Kent Scientific / SOMNI</td><td>z. B. 04-777-177</td><td>Zum Aufrechterhalten der Körpertemperatur</td></tr><tr><td>HEK 293T-Zellen (&le; Passage 10, mykoplasmafrei)</td><td>ATCC oder Äquivalent</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Wasserstoffperoxid</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>IHCAggreCount-Software</td><td>Wird auf Anfrage bereitgestellt</td><td>N/A</td><td>Proprietäre Inhouse-Software für halbautomatische Erkennung und Quantifizierung von Aggregaten</td></tr><tr><td>Invertiertes Mikroskop (für Zellkonfluenz)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Laborvortexmischer</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Lentivirale Vektoren (WT und Mutant)</td><td>Inhouse / Kerneinrichtung</td><td>N/A</td><td>Viruslösung für Injektion</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Lichtmikroskop mit Kamera (Hellfeld)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidin (1,0 mg/ml)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Anästhetische Komponente</td></tr><tr><td>Mikrobohrer (stereotaktisch kompatibel)</td><td>Stoelting / Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Für Kraniotomie</td></tr><tr><td>Mikroinjektionspumpe (z. B. Stoelting)</td><td>Stoelting/WPI</td><td>53210</td><td>Automatisierte Infusionspumpe für Virusinjektionen</td></tr><tr><td>Mikropipette (P1000, P200, P10) und Spitzen</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopiebilder (IHC-Schnitt)</td><td>Im Haus erstellt</td><td>N/A</td><td>Immunhistochemiebilder zur Analyse</td></tr><tr><td>Mikrotom-Klingen (niedriges Profil, Einweg)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam (5,0 mg/ml)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Anästhetische Komponente</td></tr><tr><td>Montiermedium</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Naloxon (0,4 mg/ml)</td><td>Lokaler Lieferant</td><td>&mdash;</td><td>Antagonist von Fentanyl</td></tr><tr><td>Nadelhalter und feine Seziernadeln</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Normales Ziegen-Serum (NGS)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. Compound</td><td>Tissue-Tek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmische Salbe (Bepanthen Augen- und Nasensalbe, 5% Dexpanthenol)</td><td>Bayer</td><td>11568-0053</td><td>Verhindert Hornhauttrocknung während der Operation</td></tr><tr><td>Orbitalmischer</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>p24 ELISA-Kit</td><td>ZeptoMetrix</td><td>0801111</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>PBS ohne Ca2+/Mg2+, pH 7,0</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>10-010-031</td><td></td></tr><tr><td>pCMV-dR8.2</td><td>Addgene</td><td>Plasmid #12263</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (100×)</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Phenylhydrazin</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>Plasmid #12259</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenimin (PEI), 1 mg/ml</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td>Primärantikörper</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev</td><td>Addgene</td><td>Plas

lentiviral-induzierte striatale pathologie als präklinisches modell der polyglutamin-spinocerebellären ataxie

Lentiviral-Induced Striatal Pathology as a Preclinical Model of Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias

Lentiviral-induzierte striatale Pathologie als präklinisches Modell der polyglutamin-spinocerebellären Ataxie

Polyglutamine spinocerebellar ataxias are a group of six neurodegenerative diseases caused by a mutation in the trinucleotide CAG tract within the coding ...

lentiviral-induced-striatal-pathology-as-preclinical-model

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Wir beschreiben ein Protokoll für die schnelle und sensitive Quantifizierung der Schwere der Erkrankung in Mausmodellen der Ataxie. Die Maßnahmen umfassen Hinterbein umklammert, ledge Test, Gang-und Kyphose. Dieses Protokoll effektiv unterscheidet zwischen betroffenen und nicht betroffenen Personen, und erkennt das Fortschreiten der Betroffenen im Laufe der Zeit.

Eine einfache Composite-Phänotyp Scoring System für die Beurteilung von Mausmodellen zerebelläre Ataxie

Quelle: Tagliafierro, L., et al. Lentivirale Vektorplattform für die effiziente Bereitstellung von Epigenom-Editing-Werkzeugen in humane induzierte pluripotente Stammzell-abgeleitete Krankheitsmodelle. J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video zeigt die lentivirale Transduktion von neuralen Vorläuferzellen (NPCs) zur gezielten epigenetischen Modifikation von alpha-Synuclein, einem Schlüsselprotein bei der Parkinson-Krankheit. Das Protokoll ermöglicht eine Methyltransferase-vermittelte DNA-Methylierung,...

Lentivirale Transduktion von neuralen Vorläuferzellen zur epigenetischen Regulation der Alpha-Synuclein-Expression

Wir präsentieren ein biochemisches und verhaltensbezogenes Protokoll zur Bewertung der Wirksamkeit von wasserlöslichen Verbindungen, die auf Mitochondrien abzielen, zur Behandlung von spinozerebellärer Ataxie Typ 1 (SCA1) und anderen zerebellären neurodegenerativen Erkrankungen.

Die Behandlung von SCA1 Mäuse, die mit wasserlöslichen Verbindungen zu unspezifisch Erhöhung mitochondriale Funktion

Das Ziel dieses Protokolls ist, ein Zell-basierte System, das die Bildung von Alpha-Synuclein repliziert in Vivoaggregiert zu bieten. Intrazelluläre Alpha-Synuclein Einschlüsse sind in primären Neuronen durch die Internalisierung ausgesät und Vermehrung von exogenen verabreicht native microsomen-assoziierten Alpha-Synuclein-Aggregaten von erkrankten Alpha-Synuclein transgenen Mäusen isoliert.

Exogene Verabreichung von Alpha-Synuclein Microsomen verbundenen Aggregate zur primären Neuronen als eine mächtige Zellmodell der Fibrillen Bildung

Das Ziel dieser Technik ist eine hoch angereicherte Kultur der primären Motoneurone (MNs) aus murinen Rückenmark vorzubereiten. Um die Folgen von Mutationen MN Krankheiten verursachen zu bewerten, beschreiben wir hier die Isolation dieser isolierten MNs und ihre Transfektion von Magnetofection.

Charcot-Marie-Zahn Krankheit In Vitro Modellierung durch Transfecting Maus primären Motoneurone

In diesem Protokoll wird ein Verfahren beschrieben, bei dem menschliche neuronale Kulturen mit Linsenkonstrukten übertragen werden, die für mutwillige menschliche Tauben kodieren. Durchgeführte Kulturen zeigen Tau-Aggregate und damit verbundene Pathologien.

Ein In-Vitro-Modell für das Studium der Tau Aggregation mit Lentiviral-vermittelter Transkription menschlicher Neuronen

Verschiedene Kleinhirnregionen spielen eine Rolle bei unterschiedlichen Verhaltensergebnissen, aber die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen bleiben unbekannt. Diese Arbeit beschreibt eine Methode, um die Kleinhirnrinde der Hemisphären, der vorderen und hinteren Regionen der Vermis und der tiefen Kleinhirnkerne reproduzierbar und schnell zu sezieren, um durch Isolierung von RNA und Tests auf Unterschiede in der Genexpression auf molekulare Unterschiede zu untersuchen.

Zerebelläre regionale Dissektion für die molekulare Analyse

Es werden zwei verwandte Methoden beschrieben, um subzelluläre Ereignisse zu visualisieren, die für die synaptische Übertragung erforderlich sind. Diese Protokolle ermöglichen die Echtzeitüberwachung der Dynamik des präsynaptischen Kalziumeinflusses und der synaptischen Vesikelmembranfusion mittels Lebendzellbildgebung von in vitro kultivierten Neuronen.

Echtzeit-Fluoreszenzmessung synaptischer Funktionen in Modellen der amyotrophen Lateralsklerose

Hier stellen wir ein Protokoll zur Beurteilung der neuroprotektiven Aktivitäten von Testverbindungen in Caenorhabditis elegans vor, einschließlich Polyglutaminaggregation, neuronalem Tod und Chemovermeidungsverhalten, sowie eine beispielhafte Integration mehrerer Phänotypen.

Caenorhabditis elegans als Modellsystem zur Entdeckung bioaktiver Verbindungen gegen Polyglutamin-vermittelte Neurotoxizität

Diese Arbeit analysiert die Vektordosis und die Expositionszeit, die erforderlich sind, um Neuroinflammation, Neurodegeneration und motorische Beeinträchtigung in diesem präklinischen Modell der Parkinson-Krankheit zu induzieren. Diese Vektoren, die das menschliche α-Synuclein kodieren, werden in die Substantia nigra geliefert, um die mit der Parkinson-Krankheit verbundene Synuclein-Pathologie zu rekapitulieren.

Analyse des Parkinson-Mausmodells, das durch Adeno-assoziierte virale Vektoren induziert wird, die menschliches α-Synuclein kodieren

Erfahren Sie die Entwicklung eines lentiviralen Striatum-Modells für SCA2 mit stereotaktischer Injektion. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Neurodegenerationsmechanismen und die Evaluation therapeutischer Ansätze.

Lentiviral-induzierte striatale Pathologie als präklinisches Modell der polyglutamin-spinocerebellären Ataxie

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