Name: Verfahren zur Identifizierung von SARS-CoV-2-Eintrittsinhibitoren als potenzielle antivirale Mittel mittels MLV-basierten Pseudoviren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Lernen Sie ein optimiertes Protokoll zur Erzeugung von MLV-basierten SARS-CoV-2-Spike-Pseudoviren für sichere Antiviral-Screenings unter BSL-2-Bedingungen.

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<ol><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+and+emerging+variants%3A+Unmasking+structure%2C+function%2C+infection%2C+and+immune+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 and emerging variants: Unmasking structure, function, infection, and immune escape mechanisms.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 869832(2022).</li>
<li>Jackson, C. B., Farzan, M., Chen, B., Choe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+SARS-CoV-2+entry+into+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into cells.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 23 (1), 3-20 (2022).</li>
<li>Le, K., Kannappan, S., Kim, T., Lee, J. H., Lee, H. -R., Kim, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+understanding+of+SARS-CoV-2+virus+entry+to+host+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Structural understanding of SARS-CoV-2 virus entry to host cells.</a> Front Mol Biosci. 10, 1288686(2023).</li>
<li>Ayoub, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+SARS-CoV-2+spike+glycoproteins+for+pseudotyping+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Virol%22%5BJournal%5D)">Improved SARS-CoV-2 spike glycoproteins for pseudotyping lentiviral vectors.</a> Front Virol. 1, 793320(2021).</li>
<li>Lippi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosafety+measures+for+preventing+infection+from+COVID-19+in+clinical+laboratories%3AIFCC+Taskforce+Recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Biosafety measures for preventing infection from COVID-19 in clinical laboratories:IFCC Taskforce Recommendations.</a> Clin Chem Lab Med. 58 (7), 1053-1062 (2020).</li>
<li>Cruz-Cardenas, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pseudovirus-based+platform+to+measure+neutralizing+antibodies+in+Mexico+using+SARS-CoV-2+as+proof-of-concept%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A pseudovirus-based platform to measure neutralizing antibodies in Mexico using SARS-CoV-2 as proof-of-concept.</a> Sci Rep. 12 (1), 17966(2022).</li>
<li>Rizatdinova, S. N., Ershova, A. E., Astrakhantseva, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotyped+viruses%3A+A+useful+platform+for+pre-clinical+studies+conducted+in+a+BSL-2+laboratory+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Pseudotyped viruses: A useful platform for pre-clinical studies conducted in a BSL-2 laboratory setting.</a> Biomolecules. 15 (1), 135(2025).</li>
<li>Millet, J. K., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+%28MLV%29-based+coronavirus+spike-pseudotyped+particle+production+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus (MLV)-based coronavirus spike-pseudotyped particle production and infection.</a> Bio Protoc. 6 (23), e2035(2016).</li>
<li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+pseudotyped+particles+to+study+highly+pathogenic+coronaviruses+in+a+biosafety+level+2+setting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of pseudotyped particles to study highly pathogenic coronaviruses in a biosafety level 2 setting.</a> J Vis Exp. (145), e59010(2019).</li>
<li>Eichler, M., Aksi, E., Pfeilschifter, J., Imre, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudotyped+virus+particles+to+monitor+Ebola+virus+and+SARS-CoV-2+viral+entry+in+human+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Application of pseudotyped virus particles to monitor Ebola virus and SARS-CoV-2 viral entry in human cell lines.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100818(2021).</li>
<li>Thomas, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+pseudo-typed+virus+particle+based+method+to+determine+the+efficacy+of+virucidal+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of a pseudo-typed virus particle based method to determine the efficacy of virucidal agents.</a> Sci Rep. 14 (1), 2174(2024).</li>
<li>Yang, S., Zhou, X., Li, R., Fu, X., Sun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+PEI-based+transfection+method+for+transient+transfection+and+lentiviral+production%3APEI-based+transfection+for+lentiviral+production%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized PEI-based transfection method for transient transfection and lentiviral production:PEI-based transfection for lentiviral production.</a> Curr Protoc Chem Biol. 9 (3), 147-157 (2017).</li>
<li>Gee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+nanovesicles+for+packaging+of+CRISPR-Cas9+protein+and+sgRNA+to+induce+therapeutic+exon+skipping%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular nanovesicles for packaging of CRISPR-Cas9 protein and sgRNA to induce therapeutic exon skipping.</a> Nat Commun. 11 (1), 1334(2020).</li>
<li>Ferrara, F., Temperton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotype+neutralization+assays%3AFrom+laboratory+bench+to+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pseudotype neutralization assays:From laboratory bench to data analysis.</a> Methods Protoc. 1 (1), 8(2018).</li>
<li>Soneoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+three-plasmid+expression+system+for+the+production+of+high+titer+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A transient three-plasmid expression system for the production of high titer retroviral vectors.</a> Nucleic Acids Res. 23 (4), 628-633 (1995).</li>
<li>Chen, Y., Miller, W. M., Aiyar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+efficiency+of+pantropic+retroviral+vectors+is+controlled+by+the+envelope+plasmid+to+vector+plasmid+ratio%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Prog%22%5BJournal%5D)">Transduction efficiency of pantropic retroviral vectors is controlled by the envelope plasmid to vector plasmid ratio.</a> Biotechnol Prog. 21 (1), 274-282 (2005).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> J Biomol Screen. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
<li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses%3AIdentification+of+receptor-deficient+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses:Identification of receptor-deficient cell lines.</a> J Virol. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li>
<li>Giroglou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+vectors+pseudotyped+with+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+S+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Retroviral vectors pseudotyped with severe acute respiratory syndrome coronavirus S protein.</a> J Virol. 78 (17), 9007-9015 (2004).</li>
<li>Ma, M., Kersten, D. B., Kamrud, K. I., Wool-Lewis, R. J., Schmaljohn, C., González-Scarano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+bunyaviruses%3AA+system+for+analysis+of+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Res%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan bunyaviruses:A system for analysis of cell tropism.</a> Virus Res. 64 (1), 23-32 (1999).</li>
<li>Bruett, L., Clements, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+murine+leukemia+virus+vectors+pseudotyped+with+the+visna+virus+envelope+show+expanded+visna+virus+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional murine leukemia virus vectors pseudotyped with the visna virus envelope show expanded visna virus cell tropism.</a> J Virol. 75 (23), 11464-11473 (2001).</li>
<li>Radoshitzky, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferrin+receptor+1+is+a+cellular+receptor+for+New+World+haemorrhagic+fever+arenaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transferrin receptor 1 is a cellular receptor for New World haemorrhagic fever arenaviruses.</a> Nature. 446 (7131), 92-96 (2007).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+retroviral+pseudotypes+with+influenza+hemagglutinins+from+H1%2C+H3%2C+and+H5+subtypes+for+sensitive+and+specific+detection+of+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of retroviral pseudotypes with influenza hemagglutinins from H1, H3, and H5 subtypes for sensitive and specific detection of neutralizing antibodies.</a> J Virol Methods. 153 (2), 111-119 (2008).</li>
<li>Bulcha, J. T., Wang, Y., Ma, H., Tai, P. W. L., Gao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vector+platforms+within+the+gene+therapy+landscape%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vector platforms within the gene therapy landscape.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 53(2021).</li>
<li>Sholukh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cell-based+and+surrogate+SARS-CoV-2+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cell-based and surrogate SARS-CoV-2 neutralization assays.</a> J Clin Microbiol. 59 (10), e0052721(2021).</li>
<li>Xiang, Q., Li, L., Wu, J., Tian, M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudovirus+system+in+the+development+of+vaccine%2C+antiviral-drugs%2C+and+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">Application of pseudovirus system in the development of vaccine, antiviral-drugs, and neutralizing antibodies.</a> Microbiol Res. 258, 126993(2022).</li>
<li>Johnson, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+pseudotyping+conditions+for+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Optimized pseudotyping conditions for the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> J Virol. 94 (21), e01062-e01120 (2020).</li>
<li>Xiaojie, S., Yu, L., Lei, Y., Guang, Y., Min, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+targeting+SARS-CoV-2+spike+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies targeting SARS-CoV-2 spike protein.</a> Stem Cell Res. 50, 102125(2021).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+of+picomolar+SARS-CoV-2+miniprotein+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">De novo design of picomolar SARS-CoV-2 miniprotein inhibitors.</a> Science. 370 (6515), 426-431 (2020).</li>
<li>Monteil, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+SARS-CoV-2+infections+in+engineered+human+tissues+using+clinical-grade+soluble+human+ACE2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inhibition of SARS-CoV-2 infections in engineered human tissues using clinical-grade soluble human ACE2.</a> Cell. 181 (4), 905-913.e7 (2020).</li>
<li>Ahmad, I., Pawara, R., Surana, S., Patel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repurposed+ACE2+inhibitors%3ASARS-CoV-2+entry+blockers+of+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Top+Curr+Chem%22%5BJournal%5D)">The repurposed ACE2 inhibitors:SARS-CoV-2 entry blockers of COVID-19.</a> Top Curr Chem. 379 (6), 40(2021).</li>
<li>Alqaaf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+natural+products+as+potential+inhibitors+of+SARS-CoV-2+spike+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Discovering natural products as potential inhibitors of SARS-CoV-2 spike proteins.</a> Sci Rep. 15 (1), 200(2025).</li>
<li>Chan, C. C. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+small-molecule+inhibitors+of+SARS-CoV-2+by+chemical+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm+Sin+B%22%5BJournal%5D)">Identification of novel small-molecule inhibitors of SARS-CoV-2 by chemical genetics.</a> Acta Pharm Sin B. 14 (9), 4028-4044 (2024).</li>
<li>Lei, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+SARS-CoV-2+spike+pseudotyped+virus+by+recombinant+ACE2-Ig%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Neutralization of SARS-CoV-2 spike pseudotyped virus by recombinant ACE2-Ig.</a> Nat Commun. 11 (1), 2070(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-influenza+virus+drug%2C+arbidol+is+an+efficient+inhibitor+of+SARS-CoV-2+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">The anti-influenza virus drug, arbidol is an efficient inhibitor of SARS-CoV-2 in vitro.</a> Cell Discov. 6 (1), 28(2020).</li>
<li>Kang, Y., Shi, Y., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arbidol%3AThe+current+demand%2C+strategies%2C+and+antiviral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">Arbidol:The current demand, strategies, and antiviral mechanisms.</a> Immun Inflamm Dis. 11 (8), e984(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.2 &Mikro; m Low protein-bindende Spritzenfilter&nbsp;</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>720-1320</td><td>Spritzenfilter (0,2 & mu; m,13 mm, PES, steril)</td></tr><tr><td>0,25 % Trypsin-EDTA 1X-Lösung</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Trypsin-EDTA (0,25 %), Phenolrot</td></tr><tr><td>0,45 &Mikro; m PVDF-Flaschendeckel-Filtereinheiten&nbsp;</td><td>Avantor</td><td>514-1045</td><td>Flaschenverschluss-Vakuumfiltersysteme (PVDF, 250 ml, 50 mm, 0,45 & Mikro; m)</td></tr><tr><td>1,5 mL sterile Mikrozentrifugenröhren</td><td>Eppendorf</td><td>30123611</td><td>Safe-Lock&nbsp; Röhren</td></tr><tr><td>100 x Penicillin-Streptomycin-Lösung</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td>Penicillin-Streptomycin-Lösung, 100x</td></tr><tr><td>5 X Luciferase-Assay-Lysepuffer&nbsp;</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>Teil des Promega Bright-Glo Luciferase Assay System</td></tr><tr><td>50 mL sterile konische Röhren</td><td>Corning&nbsp;</td><td>352070</td><td>50 mL hochklares PP-Zentrifugenrohr, konischer Boden, steril</td></tr><tr><td>6-Well-Gewebekulturplatten</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>140675</td><td>Zellkulturbehandelte Multidishes</td></tr><tr><td>96-Well-Gewebekulturplatten</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>168055</td><td>Nunk und Handel; MicroWell&trade; 96-Well, Nunclon Delta-behandelte, flache Mikroplatte</td></tr><tr><td>Arbidolhydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0860</td><td></td></tr><tr><td>Verzweigtes Polyethylenimin, 25 kDa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Lasermikroskop &nbsp; (FV 3000)</td><td>Olympus Co.</td><td>SKU: FV3000</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxidid (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (Dulbeccos modifiziertes Adlermedium) mit: hohem Glukosespiegel, L-Glutamin, Phenolrot, Natriumpyruvat)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td>Hitzeinaktiviert (56°F; C, 30 min.)</td></tr><tr><td>HEK293T-abgeleitete Zellen (Lenti-X 293T-Zelllinie)</td><td>Takara-Biografie</td><td>632180</td><td>Hoch transfektierbarer Subklon der HEK293-Zelllinie und unterstützt hohe Mengen an viraler Proteinexpression</td></tr><tr><td>HEPES-Puffer</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Hochanfällige Zellen für eine Infektion (293T-ACE2. TMPRSS2 (mCherry) Zelllinie)</td><td>BEI-Ressourcen</td><td>NR-55293</td><td>HEK293T Zelllinie modifiziert, um ACE2 und TMPRSS2 stabil auszudrücken</td></tr><tr><td>Salzsäure & nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Invertiertes Phasenkontrastmikroskop &nbsp;</td><td>Olympus Co.&nbsp;</td><td>SKU: 2404040005</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Luciferase-Substrat</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>Teil des Bright-Glo Luciferase-Assay-Systems</td></tr><tr><td>Mikroplattenleser mit Lumineszenzdetektion</td><td>Agilent BioTek</td><td>BTH1MG</td><td></td></tr><tr><td>MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazoliumbromid]</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>Undurchsichtige weiße 96-Well-Platten</td><td>Corning</td><td>3917</td><td>96-Well-Solid-White-Flat-Bottom-Polystyrol-TC-behandelte Mikroplatten</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM999</td><td></td></tr><tr><td>pcDNA3-EGFP-Plasmid</td><td>Addgene</td><td>13031</td><td>pcDNA3-EGFP war ein Geschenk von Doug Golenbock (Addgene Plasmid # 13031 ; http://n2t.net/addgene:13031 ; RRID:Addgene_13031)</td></tr><tr><td>pCMV-MLVgagpol-Plasmid</td><td>-</td><td>-</td><td>Freundlicherweise gespendet von Dr. Gary Whittaker&nbsp;</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung ohne Ca2+ und Mg2+ (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 1x ohne Kalzium und Magnesium</td></tr><tr><td>Promega PureYield Plasmid Maxiprep System</td><td>Promega</td><td>A2393</td><td></td></tr><tr><td>pTG-Luc-Plasmid</td><td>-</td><td>-</td><td>Freundlicherweise gespendet von Dr. Gary Whittaker&nbsp;</td></tr><tr><td>pUNO1-SARS-CoV-2 Spike (Wuhan) Plasmid</td><td>Invivogen</td><td>p1-Spike</td><td></td></tr><tr><td>pVSV-G-Plasmid</td><td>Addgene</td><td>138479</td><td>pVSV-G war ein Geschenk von Akitsu Hotta (Addgene Plasmid # 138479 ; http://n2t.net/addgene:138479 ; RRID:Addgene_138479)</td></tr><tr><td>Rekombinantes humanes ACE2-Fc-Fusionsprotein</td><td>Invivogen</td><td>fc-hace2</td><td></td></tr><tr><td>Reduziertes Serummedium (Opti-MEM)</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>Opti-MEM reduziertes Serummedium</td></tr></tbody></table>

verfahren zur identifizierung von sars-cov-2-eintrittsinhibitoren als potenzielle antivirale mittel mittels mlv-basierten pseudoviren

Procedures for the Identification of SARS-CoV-2 Entry Inhibitors as Potential Antivirals using MLV-Based Pseudoviruses

Verfahren zur Identifizierung von SARS-CoV-2-Eintrittsinhibitoren als potenzielle antivirale Mittel mittels MLV-basierten Pseudoviren

The SARS-CoV-2 virus is an emergent, zoonotic pathogen that has caused a huge burden of disease and mortality around the world since its emergence in ...

procedures-for-identification-sars-cov-2-entry-inhibitors-as

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt einen viralen Attachment-Assay zum Screening antiviraler Verbindungen. Unter Verwendung von genetisch veränderten Hepatitis-C-Viren und Luciferase werden inhibitorische Effekte auf die Virusanheftung bewertet, was sich in einer geringeren Lichtintensität in gleichzeitig behandelten Vertiefungen im Vergleich zu Vertiefungen, die nur mit dem Virus behandelt wurden, zeigt.

Ein Virus-Attachment-Assay für das Screening von antiviralen Verbindungen

Drei Assays, einschließlich des zytopathischen Effekts (CPE)-basierte Assays, Dosis-Wirkungs-Assay und Time-of-Addition (TOA)-Assay entwickelt, optimiert, validiert und genutzt, um neue antivirale Mittel gegen Blauzungenvirus (BTV) zu identifizieren, sowie um den möglichen Mechanismus-of-Aktion (MoA) für neu identifizierten antiviralen Medikamenten zu bestimmen.

Tests für die Identifizierung neuer Antivirale gegen Blauzungenvirus

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das spezifische Schritte des Viruseintritts untersucht, um neuartige antivirale Wirkstoffe zu identifizieren und zu bewerten.

Frühe das Eindringen des Virus-Assays für die Ermittlung und Bewertung von antiviralen Verbindungen

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur pseudotyped Partikel in eine Einstellung "BSL-2" unter Einbeziehung der Spike-Protein des hoch pathogenen Viren Nahen Osten respiratorisches Syndrom und Schweres Akutes Respiratorisches Syndrom Coronaviren zu generieren. Diese pseudotyped Partikel enthalten eine Luciferase Reporter-gen ermöglicht die Quantifizierung der Virus Eintritt in Zielzellen Host.

Produktion von Pseudotyped Partikel hoch pathogene Coronaviren in eine Einstellung "Biosafety Level 2" zu studieren

Das Ziel des Protokolls ist es, die verschiedenen Assays im Zusammenhang mit viralen Eintritte zu veranschaulichen, die verwendet werden können, um Kandidaten-Virus-Eintrittshemmer zu identifizieren.

Verwendung von Viral Entry Assays und Molekulardocking-Analysen zur Identifizierung antiviraler Kandidaten gegen Coxsackievirus A16

Das hier beschriebene Protokoll skizziert eine schnelle und effektive Methode zur Messung neutralisierender Antikörper gegen das SARS-CoV-2-Spike-Protein, indem die Fähigkeit rekonvaleszenter Serumproben bewertet wird, die Infektion durch ein verbessertes grün fluoreszierendes proteinmarkiertes vesikuläres Stomatitisvirus zu hemmen, das mit Spike-Glykoprotein pseudotypisiert ist.

Nachweis von SARS-CoV-2 neutralisierenden Antikörpern mittels Hochdurchsatz-Fluoreszenzbildgebung von Pseudovirus-Infektionen

Dieses Protokoll beschreibt die Dynamik von Virusinfektionen unter Verwendung von Luciferase- und Fluoreszenz-exprimierenden rekombinanten (r)SARS-CoV-2 und einem in vivo Bildgebungssystem (IVIS) in transgenen K18 hACE2-Mäusen, um den Bedarf an sekundären Ansätzen zu überwinden, die zur Untersuchung von SARS-CoV-2-Infektionen in vivo erforderlich sind.

Live-Bildgebung und Quantifizierung von Virusinfektionen in transgenen K18-hACE2-Mäusen mit Reporter-exprimierendem rekombinantem SARS-CoV-2

Wir stellen ein Protokoll zur Verfügung, das im Allgemeinen auf die Auswahl von Aptameren angewendet werden kann, die nur an infektiöse Viren binden und nicht an Viren, die durch eine Desinfektionsmethode nicht infektiös gemacht wurden, oder an andere ähnliche Viren. Dies eröffnet die Möglichkeit, den Infektiositätsstatus in tragbaren und Schnelltests zu bestimmen.

In-vitro-Selektion von Aptameren zur Unterscheidung von infektiösen und nicht-infektiösen Viren

Pseudotypisierte Viren (PVs) sind replikationsdefekte Virionen, die verwendet werden, um Wirt-Virus-Interaktionen unter sichereren Bedingungen zu untersuchen als mit authentischen Viren. Hier wird ein detailliertes Protokoll vorgestellt, das zeigt, wie SARS-CoV-2-PVs verwendet werden können, um die neutralisierende Fähigkeit des Serums von Patienten nach einer COVID-19-Impfung zu testen.

Pseudotypisierte Viren als molekulares Werkzeug zur Überwachung humoraler Immunantworten gegen SARS-CoV-2 mittels Neutralisationsassay

Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung eines neuartigen hybriden Alphavirus-SARS-CoV-2-Pseudovirus (Ha-CoV-2) als Plattform für die schnelle Quantifizierung der Infektiosität von SARS-CoV-2-Varianten und ihrer Empfindlichkeit gegenüber neutralisierenden Antikörpern.

Anwendung des Ha-CoV-2-Pseudovirus zur schnellen Quantifizierung von SARS-CoV-2-Varianten und neutralisierenden Antikörpern

Wir stellen ein optimiertes In-vitro-Protokoll zur Herstellung von SARS-CoV-2-Virus-ähnlichen Partikeln vor, die das authentische Virus genau nachahmen. Dieser Ansatz ermöglicht die Untersuchung von Virusinfektions-, Assemblierungs- und Austrittsmechanismen, ohne dass ein Labor der Biosicherheitsstufe 3 erforderlich ist.

Herstellung eines SARS-CoV-2 Virus ähnlichen Partikelsystems zur Untersuchung viraler Lebenszyklen in vitro

Lernen Sie ein optimiertes Protokoll zur Erzeugung von MLV-basierten SARS-CoV-2-Spike-Pseudoviren für sichere Antiviral-Screenings unter BSL-2-Bedingungen.

Verfahren zur Identifizierung von SARS-CoV-2-Eintrittsinhibitoren als potenzielle antivirale Mittel mittels MLV-basierten Pseudoviren (Video) | JoVE Journal

Verfahren zur Identifizierung von SARS-CoV-2-Eintrittsinhibitoren als potenzielle antivirale Mittel mittels MLV-basierten Pseudoviren

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