Name: Untersuchung der Glykolyse in primären Mikroglia mittels extrazellulärem Flussassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie die Glykolyse in primären Mikroglia mittels extrazellulärem Flussassay untersuchen. Diese Methode ermöglicht die Echtzeitmessung der extrazellulären Azidifizierungsrate unter entzündlichen Bedingungen.

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<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1M HEPES-Lösung</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1X HBSS</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 14175-079</td><td></td></tr><tr><td>2,5 % Trypsin</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotikum/Antimykotikum&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D & Strich; (+)Glukose, wasserfrei & nbsp;</td><td>Thermowissenschaftlich&nbsp; &nbsp;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>&nbsp; 11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>11284932001- Roche</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Fisherbrand</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-Laktat-Kit</td><td>Abcam</td><td>ab65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp; L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM NEAA&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin A</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 15240-062</td><td></td></tr><tr><td>pH-Anzeigestreifen</td><td>Fisherbrand</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe24</td><td>Agilent Technologien</td><td>N/A</td><td>Generischer Name: Extrazellulärer Flussanalysator</td></tr><tr><td>Seahorse 24 V7 PS Zellkultur-Mikroplatten</td><td>Agilent Seepferdchen</td><td>100777-004</td><td>Gattungsname: Extrazelluläre Fluxzellkultur-Mikroplatten</td></tr><tr><td>Seepferdchen-Assay XF Calibrant-Puffer (pH 7,4)</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;</td><td>&nbsp; 100840-000</td><td>Generischer Name: Extrazellulärer Flux-Kalibrantpuffer</td></tr><tr><td>Seepferdchen-Test XF DMEM-Medien (pH 7,4)</td><td>Agilent Seahorse&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; 103575-100</td><td>Generischer Name: Extrazelluläres Flux-Testmedium</td></tr><tr><td>Seahorse Extrazelluläres Flussassay-Kit</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;</td><td>102342-100</td><td>Generischer Name: Extrazelluläre Flusskalibrierungsplatte&nbsp;</td></tr><tr><td>Natriumpyruvat&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

untersuchung der glykolyse in primären mikroglia mittels extrazellulärem flussassay

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Untersuchung der Glykolyse in primären Mikroglia mittels extrazellulärem Flussassay

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Isolieren primären Mikroglia aus der zellulären Heterogenität des Gehirns ist wichtig, um deren Rolle bei physiologischen und pathologischen Bedingungen zu untersuchen. Dieses Protokoll beschreibt eine mechanische Isolation und gemischten Zellkultur-Technik, die eine hohe Ausbeute und hoher Reinheit liefert, lebensfähigen primären Mikrogliazellen...

Primäre Mikroglia Isolation vom gemischten Zellkulturen von Gliazellen Neonatal Rattenhirngewebe

Dieses Protokoll bietet einen biochemischen Ansatz zur Messung der extrazellulären Ansäuerungsrate (ECAR) und der Sauerstoffverbrauchsrate (OCR) von primären leukämischen Zellen mit einem extrazellulären Fluss-Assay. Die Beurteilung des metabolischen Profils dieser Zellen hilft, ihre Bedürfnisse zu charakterisieren, was zu einer personalisierten Therapie führt.

Extrazellulärer Flux-Assay: Eine Methode zur Messung des metabolischen Profils von Zellen

Metabolische Reprogrammierung ist ein Merkmal und eine Voraussetzung für die Polarisation von M1- und M2-Makrophagen. Dieses Manuskript beschreibt einen Assay zur Messung grundlegender Parameter der Glykolyse und der mitochondrialen Funktion in aus dem Knochenmark der Maus stammenden Makrophagen. Mit diesem Werkzeug kann untersucht werden, wie bestimmte Faktoren den Stoffwechsel und den Phänotyp des Makrophagen beeinflussen.

Metabolische Charakterisierung Polarized M1 und M2-Knochenmark-Makrophagen über die Echtzeit-Extrazelluläre Flußanalyse

Glykolyse ist ein definierender metabolischer Marker in mehreren biologischen Systemen. Die Überwachung der Glykolyse durch Messung des extrazellulären Flusses von H+ ist üblich, erfordert jedoch eine Korrektur, um quantitativ und eindeutig zu sein. Hier zeigen wir, wie extrazelluläre Flussdaten gesammelt und korrigiert werden können, um zwischen respiratorischen und glykolytischen Quellen der extrazellulären Versauerung zu unterscheiden.

Messung und Analyse von extrazellulären Säureproduktion zu ermitteln glykolytischen Rate

Die Erforschung des Stoffwechsels wird für die immunologische Forschung immer relevanter. Hier stellen wir eine optimierte Methode zur Messung der Glykolyse und der mitochondrialen Atmung in Maus-Splenozyten sowie T- und B-Lymphozyten vor.

Ein optimiertes Protokoll Glykolyse und die mitochondriale Atmung in Lymphozyten zu analysieren

In diesem Artikel beschreiben wir eine Methode zur Messung der Glykolyse und mitochondrialen Atmung in primären menschlichen natürlichen Killerzellen (NK), die aus peripherem Blut isoliert sind, im Ruhezustand oder nach IL15-induzierter Aktivierung. Das beschriebene Protokoll könnte leicht auf primäre menschliche NK-Zellen ausgedehnt werden, die durch andere Zytokine oder lösliche Reize aktiviert werden.

Analyse des menschlichen natürlichen Killerzellstoffwechsels

Hier stellen wir zwei Protokolle zur Quantifizierung des mikroglialen Engulfments von vGLUT1-positiven Synapsen und pHRodo Red markierten rohen Synaptosomen mittels Durchflusszytometrie vor.

Quantifizierung des mikroglialen Engulfments von synaptischem Material mittels Durchflusszytometrie

Alkoholmissbrauch beeinträchtigt die Immunität der Alveolarmakrophagen (AM) aufgrund einer unterdrückten mitochondrialen Atmung und Bioenergetik. Wir haben kürzlich gezeigt, dass die Exposition gegenüber Ethanol (EtOH) die Glutaminabhängigkeit für die mitochondriale Atmung bei AMs erhöht. Hierin werden Methoden zur Bestimmung der Verwendung von Glutamin für die mitochondriale Atmung in EtOH-behandelten AMs unter Verwendung eines extrazellulären Flussbioanalysators bereitgestellt.

Bewertung von Glutamin als Brennstoffquelle für Alveolarmakrophagen, die chronischem Ethanol ausgesetzt sind, mit einem extrazellulären Flussbioanalysator

Hier beschreiben wir detailliert Methoden zur Extraktion von Makrophagen aus dem Knochenmark, der Milz und dem infarktierten Herzen und zur anschließenden Bestimmung des metabolischen Flusses in lebenden Zellen.

Analyse des ex vivo metabolischen Flusses in Milz- und Herzmakrophagen und Knochenmarkmonozyten

Es wurde ein Protokoll für die Präparation gereinigter Mitochondrien aus Mikrogliazellen, die Isolierung mitochondrialer Proteine für die Freisetzung von N-Glykanen und den schnellen Nachweis subzellulärer, mitochondrialer Glykane mittels Infrarot-Matrix-unterstützter Laserdesorptions-Elektrospray-Ionisation in Verbindung mit hochauflösender präziser Massenanalysator-Massenspektrometrie entwickelt.

Mitochondriales Präparat aus Mikroglia für die Glykananalyse

Erfahren Sie, wie Sie die Glykolyse in primären Mikroglia mittels extrazellulärem Flussassay untersuchen. Diese Methode ermöglicht die Echtzeitmessung der extrazellulären Azidifizierungsrate unter entzündlichen Bedingungen.

Untersuchung der Glykolyse in primären Mikroglia mittels extrazellulärem Flussassay

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