Automatisierte HPLC-Trennung mit LC-mate: Ein integrierter wiederholender Autosampler und Fraktionssammler für die Mikroskalenreinigung

Unsere Forschung konzentriert sich darauf, ein Instrument zu entwerfen, das direkt an HPLC-Setups angeschlossen wird, um all diese sich wiederholenden manuellen Schritte zu automatisieren. Manuelle Probeninjektion und die Fraktionsentnahme sind sehr mühsam. LC-Mate bietet eine plattformübergreifende automatisierte Lösung für die HPLC-Probenreinigung an.

Zu Beginn überprüfen Sie die Lösungsmittelleitungsverbindungen zwischen dem HPLC-System, dem LC-Mate und der chromatografischen Säule, um korrekte Durchflusswege sicherzustellen. Um die Verbindung der Signalübertragungsleitung zwischen UV-Detektor und LC-Mate zu überprüfen, verbinden Sie das schwarze Kabel mit dem roten Anschluss und das weiße Kabel mit dem schwarzen Terminal, um die Polarität des analogen Signalausgangs anzupassen. Beobachten Sie das LC-Mate-Display, um zu bestätigen, dass die analoge Signalwellenform erscheint.

Wenn keine Wellenform sichtbar ist, kehren Sie die Drahtverbindungen um, indem Sie den schwarzen Draht an den schwarzen Anschluss und den weißen Draht an den roten Anschluss anschließen. Um die Triggerverbindung zwischen dem Ultraviolettdetektor und dem LC-Mate zu überprüfen, stecken Sie das einzelne Ende des Datenkabels in den Ausgangsanschluss des Ultraviolettdetektors. Verbinden Sie die schwarzen und weißen Drähte vom anderen Ende des Kabels mit den schwarzen und blauen Trigger-Anschlüssen am LC-Mate. Ziehen Sie die Anschlüsse fest, um eine feste Triggerverbindung sicherzustellen.

Als Nächstes wird der ordnungsgemäße Start des HPLC-Systems und LC-Mate sichergestellt. Klicken Sie auf das LC Mate-Symbol auf der Schnittstelle, um das System-Selbsttestprogramm automatisch auszuführen und wichtige Hardwaremodule zu initialisieren. Warte auf den kurzen Prompt-Ton und das Verschwinden der Selbsttest-Nachricht, um zu bestätigen, dass die Initialisierung abgeschlossen ist.

Konfigurieren Sie die HPLC-Trennbedingungen und beginnen Sie mit der Elution, um die Säule auszugleichen. In der Testschnittstelle geben Sie das Einspritzvolumen, die Elutionszeit und die Wiederholungszeiten ein und drücken Sie dann das Start-Symbol, um den Auto-Sampler, den Fraktionskollektor und die HPLC-Operation zu starten. Identifizieren Sie zulässige Trennbedingungen, einschließlich Auflösung, Laufzeit, Retentionszeit, Injektionsvolumen und ultravioletter Wellenlänge.

Wählen Sie das Schwellenfunktionsmodul auf der linken Seite der Schnittstelle, um den Parametereinstellungsbildschirm zu öffnen. Geben Sie das Einspritzvolumen, Wiederholungszeiten, Schwellenwert und Elutionszeit ein und drücken Sie Start, um den automatisierten Betrieb zu starten. Überwachen Sie die Statusanzeigen.

Beobachten Sie die Injektion im Gange, um die Probeeinführung zu bestätigen. Überprüfen Sie den Indikator "Separation in Progress", um sicherzustellen, dass die chromatografische Trennung stattfindet. Beachten Sie den Spritzenentleerungsindikator, um anzuzeigen, wann die Spritze die Restflüssigkeit ausspült.

Um eine zeitliche Fraktionserfassung durchzuführen, wählen Sie das Timing-Sammelmodul auf der linken Seite der Schnittstelle aus, um das Parametermenü zu öffnen. Eingangseinspritzvolumen, Wiederholungszeiten, Elutionszeit und die erforderlichen Sammelzeiten. Drücken Sie die Starttaste, um die wiederholte automatische Sequenz zu starten.

Wählen Sie als Nächstes das Function Collect All auf der linken Seite der Schnittstelle aus. Stellen Sie einen Sammelschwellenwert ein, um alle chromatografischen Peaks separat zu erfassen. Für die Rohrreinigung wird die Einspritzpipeline des Autos-Samplers in eine kleine Flasche mit sauberem Lösungsmittel eingefügt.

Wählen Sie das Reinigungsmodul von der linken Seite der Benutzeroberfläche aus, um das Parametermenü zu öffnen. Dann stellen Sie das Einspritzvolumen zwischen null und 1000 ein und stellen die Wiederholungszeiten für die Reinigung der Injektorpipeline ein. Klicken Sie unten auf Reinigung abgeschlossen, um mit der Reinigung der Injektionsleitung zu beginnen.

Überwachen Sie die Anzahl der Zyklen, um abgeschlossene Waschzyklen zu verfolgen. Stellen Sie die Reinigungszeit für die Reinigung der Sammelpipeline fest. Klicken Sie unter Current Pipeline auf Reinigung, um mit der Reinigung der Sammlungspipeline zu beginnen.

Überwachen Sie die aktuelle Pipeline-Anzeige, um die sequentielle Reinigung von Pipeline 0 bis Pipeline 10 zu bestätigen. Automatische Speicherung aktivieren, damit das System nach jedem Elutionszyklus Chromatogramme speichern kann. Alternativ kannst du nach der Elution auf die Schaltfläche Speichern klicken, um die Daten manuell zu speichern.

Nach Eingabe der Metadaten im Dialogfeld wählen Sie den Speicherort aus lokalem Speicher, einer SD-Karte oder einem externen universellen seriellen Buslaufwerk. Die semi-präparative HPLC-Trennung mit LC-Mate erreichte eine kontinuierliche und stabile Probeninjektion und Fraktionsentnahme während der Reinigung von 2"O-Galloyl-Hyperosid. Kleinere Verunreinigungen wurden effektiv entfernt, um gereinigtes 2"O-Galloyl-Hyperosid mit dem LC-Mate-System zu erhalten.

Kontinuierliche und stabile Probeninjektion und Fraktionsentnahme wurden ebenfalls erfolgreich während der Reinigung von Phloridzin und Trilobatin erreicht. Es wird gezeigt, dass das LC-Mate-System die Betriebseffizienz erheblich verbessert, indem es manuelle Eingriffe erheblich reduziert. Die relative Standardabweichung der gesamten Ringinjektionsspitzenfläche betrug 0,813 %, was auf eine ausgezeichnete Stabilität und Reproduzierbarkeit der LC-Mate-Injektionen hinweist.

Dieses System ermöglicht die automatisierte Reinigung der jeweiligen Fraktionen und die präzise Fraktionserfassung für effiziente makroskalierte HPLC-Workflows. Korrekte Signalvariante, korrekte Modusauswahl und die Parametereinstellung sind entscheidend für eine erfolgreiche Anwendung des LC-Mate-Instruments. Wir planen, die Kanalkapazität zu erhöhen und neue Detektoren für eine bessere plattformübergreifende Kompatibilität zu integrieren.