Name: Ein Protokoll zur Entnahme von Einzelzell-Suspension aus Maushornhäuten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Lernen Sie ein robustes Protokoll zur Isolierung hochwertiger Einzelzell-Suspensionen aus intakten Maushornhäuten. Diese Methode kombiniert enzymatische Verdauung mit mechanischer Dissoziation für Single-Cell-RNA-Sequenzierung und Durchflusszytometrie.

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<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
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<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594 Esel-Anti-Kaninchen</td><td>Abcam</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>Antikeratin</td><td>Abcam</td><td>ab230175</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Pancytokeratin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AE1/AE3, Alexa FluorTM 488</td><td></td></tr><tr><td>Autoklav-Sterilisator</td><td>An Shen</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserum Albumin V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>Zellfilter</td><td>NEST</td><td>258369</td><td>40 &mu; m</td></tr><tr><td>Zentrifugalmaschine</td><td>Eppendorf AG</td><td>22331 Hamburg</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>&nbsp; Oberkochen</td><td>Zeiss LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Zählschild</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugalröhre</td><td>NEST</td><td>620611</td><td>2 mL, 50mL</td></tr><tr><td>Coverslip</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>Seziermikroskop</td><td>Carl ZEISS</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; Medien</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Solarbio</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Fetal&nbsp; Bovine&NBSP; Serum</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Solarbio</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>ITS</td><td>Gibco</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>Epidermalwachstumsfaktor der Maus</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>ophthalmische chirurgische&NBSP; Pinzette</td><td>Dumot</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Augenärztliche chirurgische Schere</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Ofen</td><td>AISITE</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin & Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>NEST</td><td>705201</td><td>60mm</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Solarbio</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>Thermostatischer Inkubator</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Reinigungstisch</td><td>You Qi</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4 % Paraformaldehyd</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

ein protokoll zur entnahme von einzelzell-suspension aus maushornhäuten

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

Ein Protokoll zur Entnahme von Einzelzell-Suspension aus Maushornhäuten

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

a-protocol-for-harvesting-single-cell-suspension-from-mouse-corneas

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video beschreibt eine einfache, zeitsparende Technik für die automatisierte Gewebedissoziation mit dem gentleMACS Dissociator zu Single-Zellsuspensionen von Maus-Splenozyten vorzubereiten.

Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator

Distanziert Zellen aus bestimmten Gewebearten erfordert spezifische Parameter für Gewebe aggitation zu einem hohen Volumen von lebensfähigen, kultivierbaren Zellen zu erhalten. Die Miltenyi gentleMACS Dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. In dieser Veröffentlichung wird die Verwendung dieser Vorrichtung auf nerual Gewebe erklärt.

Generierung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Nervengewebe

In diesem Video zeigen wir Ihnen, wie Sie retinalen Stammzellen aus dem Ciliarepithels der Maus Auge zu isolieren und zu wachsen sie in Kultur zu klonalen Netzhaut Kugeln zu bilden. Die Kugeln, die isoliert besitzen den Kardinal Eigenschaften von Stammzellen: Selbsterneuerung und multipotentiality.

Isolierung von Retinal Stammzellen aus der Maus Eye

Dieses Video zeigt die Kultivierung von Müller-Gliazellen (MG), die aus der Netzhaut von Mäusen isoliert wurden. Die Netzhaut wird mit Hilfe von Verdauungsenzymen in eine einzellige Suspension dissoziiert. Die Zellen werden dann in einem Medium mit einem Wachstumsfaktor gezüchtet, der die MG-Zellproliferation und die neuronale Zellsterblichkeit fördert. Tote neuronale Zellen werden während der Passage entfernt und MG-Zellen für die weitere Analyse gezüchtet.

Etablierung einer Müller-Gliazellkultur aus der Netzhaut von Mäusen

Dieses Video demonstriert das Verfahren zur Isolierung von primären retinalen Ganglienzellen (RGCs) von Mäusen mit Hilfe der Durchflusszytometrie. Diese Methode ermöglicht die zukünftige Untersuchung von RGCs mit dem Ziel, den starken Rückgang der Sehschärfe besser zu verstehen, der aus dem Verlust funktioneller RGCs bei neurodegenerativen Erkrankungen resultiert.

Isolierung von murinen retinalen Ganglienzellen mittels fluoreszenzaktivierter Zellsortierung

Die Haut beherbergt ein komplexes Immunzellnetzwerk. Wir beschreiben eine effiziente Methodik für die Verdauung von Maushaut aus verschiedenen Körperteilen des Tieres, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten und die verschiedenen Leukozytenpopulationen, die in der Haut leben, mittels Durchflusszytometrie zu analysieren.

Herstellung von Einzelzellsuspensionen für Cytofluorimetric Analyse von verschiedenen Mäusehaut Regionen

Millionen von Menschen leiden an retinalen degenerativen Erkrankungen, die zu irreversibler Blindheit führen. Ein gemeinsames Element vieler dieser Krankheiten ist der Verlust von Netzhautganglienzellen (RGCs). Dieses detaillierte Protokoll beschreibt die Isolierung von primären murinen RGCs durch positive und negative Selektion mit Durchflusszytometrie.

Isolierung von primären murinen Retinal-Ganglion-Zellen (RGCs) durch Durchflusszytometrie

Das retinale Pigmentepithel (RPE) ist eine multifunktionale Epithel des Auges. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur primären Zellkulturen, abgeleitet von der murinen RPE zu etablieren.

Primären Zellkulturen aus das retinale Pigmentepithel Maus

Ziel dieses Protokolls ist es, epidermale Keratinozyten aus der dorsalen Haut erwachsener Mäuse für eine Vielzahl nachgelagerter Anwendungen wie Molekularbiologie, Biochemie, Fluoreszenzaktivierte Zellsortierung und primäre In-vitro-Anwendungen (z. B. clonogene Keratinozyten).

Isolierung von Maus epidermalen Keratinozyten und ihrer In-Vitro-Clonogenen Kultur

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung von murinen postnatalen retinalen Endothelzellen, die für Zellertrag, Reinheit und Lebensfähigkeit optimiert sind. Diese Zellen eignen sich für Next-Generation-Sequenzierungsansätze.

Isolierung von retinen retinalen Endothelzellen für die Sequenzierung der nächsten Generation

Das retinale Pigmentepithel (RPE) fungiert als entscheidende Barriere zwischen Aderhaut und Netzhaut und fördert die Gesundheit und Funktion von retinalen Zelltypen, wie z. B. Photorezeptoren. Darin beschreiben wir ein einfaches und effektives Protokoll zur Isolierung und Kultivierung adulter muriner RPE.

Eine vereinfachte Methode zur Isolierung und Kultivierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus erwachsenen Mäusen

Lernen Sie ein robustes Protokoll zur Isolierung hochwertiger Einzelzell-Suspensionen aus intakten Maushornhäuten. Diese Methode kombiniert enzymatische Verdauung mit mechanischer Dissoziation für Single-Cell-RNA-Sequenzierung und Durchflusszytometrie.

Ein Protokoll zur Entnahme von Einzelzell-Suspension aus Maushornhäuten

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