Name: Immunfärbungs- und Farbstoffpenetrationsexperimente zur Definition von Kern-Plezier-Septaten-Übergangsproteinen in Drosophila-embryonalen Epitheln (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Lernen Sie Immunfärbung und Farbstoffpenetrationstests zur Analyse von pleated Septate Junctions in Drosophila-Embryonen. Diese Methoden ermöglichen die Untersuchung epithelialer Barrieren und Genfunktionen.

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<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kapillarröhre für Nadeln (Boro 1 x 0,5/Faser)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Leica</td><td>Stellaris 5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Abdeckglas 22 x 22 x 22 Zoll Dicke für Injektionen</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>Abdeckglas 22 x 30 1,5 Dicke für Bildgebung</td><td>Corning</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>Kulturröhre zur Immunfärbung (6 x 50 mm)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>Embryo-Sammelkäfig</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzstereomikroskop</td><td>Leica</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>Halocarbonöl (700)</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>Heptan</td><td>Fisher Scientific</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>Invertiertes Fluoreszenzmikroskop</td><td>Leica</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>Netzkörbe zum Dechorionieren von Embryonen</td><td>Genesee Scientific</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipulator</td><td>Narishige</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger mit dem Mikroskop</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>Nadelzieher</td><td>David Kopf-Instrumente</td><td>Modell 720</td><td></td></tr><tr><td>Normales Eselserum</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Nylon-Mesh (120 μm)</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>Objektiv HC PL FLUOTR 10X/0,32 PH 1</td><td>Leica</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>Objektivobjektiv HC PL APO 10x/0,40 CS2</td><td>Leica</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>Objektivobjektiv HC PL APO 40x/1.30 CS2</td><td>Leica</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>Petriplatten 60 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Bahnsteig-Kippe</td><td>Globe Scientific</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>Primärer Antikörper (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>Primärer Antikörper (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>Primärer Antikörper (E. Cadherin)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>Primärer Antikörper (Mcr)</td><td>Ward-Labor, CWRU</td><td>Meerschweinchen polyklonal</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamin als 10 kDa Dextran gekennzeichnet</td><td>Molekulare Sonden</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>Sekundärer Antikörper (Esel-Anti-Meerschweinchen Cy3)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>Sekundärer Antikörper (Esel-Anti-Maus Cy2)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>Sekundärer Antikörper (Esel-Antiratte Cy5)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>Tischschauspieler</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>C2-Plattformschüttler</td><td></td></tr><tr><td>Tegosept (Methyl4-Hydroxybenzoat)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>Phiolen zur Fixierung (20 ml WHEATON flüssige Szintillationsphiolen)</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 3MM&nbsp; Chromatographie-Papier</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><stark>Fliegenstock</stark></td><td><stark>Voll-Genotyp</stark></td><td><stark>Bestand Nummer</stark></td><td><stark>Quelle</stark></td></tr><tr><td>cor4</td><td>w*; P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>W1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td><stark>Lösung</stark></td><td><stark>Rezept</stark></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Mische 90 g NaCl, 20 g Na2HPO4 und 8,3 g NaH2PO4.H2O und dH20 zu 1 L. Filtersterilisieren. Verdünne auf 1X mit dH2O für Waschschritte bei der Immunfärbung.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% Triton X-100 Lösung</td><td>Mische 1 ml Triton X-100 bis 9 ml dH2O auf einem Plattform-Rocker, bis es aufgelöst ist. Lagern Sie bei Zimmertemperatur.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 % Bleichmittel</td><td>Mischen Sie 10 ml kommerzielles Bleichmittel (7,5 % Natriumhypochlorit) mit 10 ml Wasser, bevor die Embryonen entchorioniert werden.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Apfelsaftteller</td><td>Kochen Sie 15 g Drosophila-Agar in 725 ml dH2O. Fügen Sie 25 g Zucker und 250 ml Apfelsaft hinzu und rühren Sie sie bis zum Pürieren. Die Lösung auf 55 °C abkühlen lassen, dann 1,3 g Tegosept hinzufügen und vorsichtig rühren. Gieße sie in 60 x 15 Petriteller und lasse sie abkühlen. Lagere bei 4 °C.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blockierungslösung</td><td>Mische 9,8 ml 1x PBS mit 100 μl 10% Triton X-100 und 100 μl Normal Donkey Serum in einem 15-fachen konischen Rohr.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Embryo-Waschlösung</td><td>Stellen Sie eine 10-fache Embryo-Waschlösung her, indem Sie 70 g NaCl und 2 ml Triton X-100 auf 1 L dH2O mischen. Verdünne auf 1X mit dH2O für eine funktionierende Lösung.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fix</td><td>Erhitze 10 ml 1x PBS in der Mikrowelle vor. Fügen Sie 0,4 g&nbsp hinzu; aus Paraformaldehyd und Pipet zum Mischen. Füge 10 μl 14N NaOH hinzu, um die Auflösung zu beschleunigen. Auf einen 90-C-Heizblock legen, bis er sich auflöst. Sobald kein festes Paraformaldehyd mehr übrig ist, fügen Sie 10 μl 14N HCL hinzu, um den pH-Wert auf neutral zu stellen. Trage immer einen Laborkittel, Handschuhe und eine Brille, wenn du Paraformaldehyd verwendest.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Montagemedien</td><td>Mischen Sie 9 ml Glycerol und 1 ml 1 ml 1M Tris Basis-pH-Wert 8,0. Fügen Sie 0,05 g n-Propylgallat hinzu,&nbspoon; Mischen und erhitzen, damit es sich auflöst. Aliquot 0,5 ml in Eppendorf-Röhren.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rhodamin-Dextran-Lösung</td><td>Frische Farblösung herzustellen, indem man Rhodamin-markiertes 10 kDa Dextran auf 1 mg/ml in 0,5 M Natriumphosphat, pH 7,5 und 5 mM Kaliumchlorid auflöst.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hefepaste</td><td>Mische 50 g kommerzielle Hefe (Red Star) mit einer Prise Saccharose und genug Wasser, um eine dicke Paste zu machen. Lagere bei 4 °C.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

immunfärbungs- und farbstoffpenetrationsexperimente zur definition von kern-plezier-septaten-Übergangsproteinen in drosophila-embryonalen epitheln

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

Immunfärbungs- und Farbstoffpenetrationsexperimente zur Definition von Kern-Plezier-Septaten-Übergangsproteinen in Drosophila-embryonalen Epitheln

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Dieses Protokoll zeigt, wie Immunhistochemie auf seziert Drosophila Larve führen.

Drosophila Larven NMJ Immunhistochemie

Dissection und Imaging von aktiven Zonen in der Drosophila Neuromuskulären Synapse

Immunfärbung ist eine effektive Technik zur Visualisierung spezifischer Zelltypen und Proteine innerhalb von Geweben. Durch die Verwendung von Ultraschall verringert das hier beschriebene Protokoll die Notwendigkeit, Drosophila melanogaster-Gewebe von Embryonen und Larven im Spätstadium vor der Immunfärbung zu präparieren. Wir bieten eine effiziente Methodik für die Immunfärbung von Formaldehyd-fixierten Whole-Mount-Larven.

Beschallung-erleichtert Immunfluoreszenzfärbungen der Late-Stage embryonalen und Larven<em&gt; Drosophila</em&gt; Gewebe<em&gt; In-situ</em

Die adulten Strukturen von Drosophila stammen von sackartigen Strukturen ab, die imaginale Scheiben genannt werden. Die Analyse dieser Scheiben bietet Einblicke in viele Entwicklungsprozesse, einschließlich der Gewebebestimmung, der Etablierung von Kompartimentgrenzen, der Zellproliferation, der Spezifikation des Zellschicksals und der planaren Zellpolarität. Dieses Protokoll wird verwendet, um imaginale Scheiben für die Licht-/Fluoreszenzmikroskopie vorzubereiten.

Präparation und Immunfärbung von Imaginalscheiben aus Drosophila melanogaster

Dieses Protokoll zeigt, wie Proximity Ligation Assay kann verwendet werden, um in situ Protein-Protein-Wechselwirkungen an der Drosophila Larvenneuromuskulären Verbindung nachzuweisen. Mit dieser Technik werden Discs großen und Hu-li tai Shao gezeigt, um einen Komplex an der postsynaptischen Region, eine Vereinigung die vorher durch Co-Immunpräzipitation identifiziert bilden.

Detektion In-situ- Protein-Protein-Komplexe bei der Drosophila Larven Neuromuskuläre Junction Mit Proximity Ligation Assay

Es wird ein Protokoll der Ganzbett-Immunfärbung an Blattlausembryonen vorgestellt, in dem kritische Bedingungen für die Verringerung der Hintergrundfärbung und die Erhöhung der Gewebepermeabilität behandelt werden. Diese Bedingungen wurden speziell für den effektiven Nachweis der Proteinexpression im embryonalen Gewebe von Blattläusen entwickelt.

Identifizierung kritischer Bedingungen für die Immunfärbung in der Erbsenblattlaus Embryos: Erhöhung Gewebepermeabilität und abnehmender Hintergrundfärbung

Wir präsentieren hier ein verbessertes Protokoll für die Ganzkörperpräparation und Immunfärbung von Drosophila-Hoden, das für die konfokale Mikroskopie geeignet ist und auch eine reproduzierbare und zuverlässige Markierung ermöglicht. Wir veranschaulichen dieses Protokoll durch 3D-Darstellung und Quantifizierung von Kolokalisierungsexperimenten an den großen S4-S5-Spermatozyten.

Immunfärbung von Drosophila-Hoden für die konfokale 3D-Analyse großer Spermatozyten

Hier beschreiben wir ein Protokoll zum Nachweis und zur Lokalisierung von Drosophila-Embryoprotein und RNA von der Sammlung bis zur Voreinbettung und Einbettung, Immunfärbung und mRNA-in-situ-Hybridisierung.

Ein Protokoll für Immunhistochemie und RNA-in-situ-Verteilung im frühen Drosophila-Embryo

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Präparation und Visualisierung von festsitzendem Gewebe des Drosophila pupal notum. Es kann entweder für intaktes oder verwundetes Gewebe verwendet werden, und die ursprüngliche Architektur des Gewebes bleibt erhalten. Die Verfahren zum Sezieren, Fixieren und Färben werden alle in diesem Artikel beschrieben.

Sezieren, Fixieren und Visualisieren der Drosophila pupal notum

Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Visualisierung der Mikrotubuli-Netzwerke in neuromuskulären Verbindungen und Muskelzellen vor. In Kombination mit den leistungsstarken genetischen Werkzeugen von Drosophila melanogaster erleichtert dieses Protokoll das genetische Screening und die Analyse der Mikrotubuli-Dynamik für die Rolle von Mikrotubuli-Netzwerk-regulatorischen Proteinen im Nervensystem erheblich.

Verwendung von neuromuskulären Verbindungen und Muskelzellen von Drosophila-Larven zur Visualisierung des Mikrotubuli-Netzwerks

Dieses Protokoll beschreibt die maßgeschneiderte antikörperbasierte Fluoreszenzmarkierung und Injektion in frühe Drosophila-Embryonen , um Live-Imaging von Proteinen mit geringer Häufigkeit oder posttranslationalen Modifikationen zu ermöglichen, die mit herkömmlichen GFP/mCherry-Tag-Ansätzen nur schwer zu erkennen sind.

Visualisierung von Proteinen mit geringer Häufigkeit und posttranslationalen Modifikationen in lebenden Drosophila-Embryonen mittels Fluoreszenz-Antikörper-Injektion

Lernen Sie Immunfärbung und Farbstoffpenetrationstests zur Analyse von pleated Septate Junctions in Drosophila-Embryonen. Diese Methoden ermöglichen die Untersuchung epithelialer Barrieren und Genfunktionen.

Immunfärbungs- und Farbstoffpenetrationsexperimente zur Definition von Kern-Plezier-Septaten-Übergangsproteinen in Drosophila-embryonalen Epitheln (Video) | JoVE Journal

Immunfärbungs- und Farbstoffpenetrationsexperimente zur Definition von Kern-Plezier-Septaten-Übergangsproteinen in Drosophila-embryonalen Epitheln

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