Testen der physiologische Barrieren für die virale Transmission in Blattläuse mit Mikroinjektion

Wenn es sich um wirksame Transmitter von Pflanzenviren handelt, wenn es sich um eine Mikroinjektion von Viren handelt, ist das Verfahren, das wir Ihnen heute zeigen werden, eine Technik, die es Forschern ermöglicht, Viren direkt in die Hämozelle des Vorhofflimmerns zu injizieren und dabei den Darm zu umgehen, eine der beiden Hauptbarrieren für die Virusübertragung auf zirkulative Weise. Hallo, ich bin Cecilia Tamrin Dehi, Postdoktorandin in der Abteilung für Pflanzenpathologie an der Cornell University. Heute zeige ich Ihnen, wie Sie Viren in das AFI-Hämozellvirus injizieren, die dann auf verschiedene Pflanzenarten übertragen werden können.

Zum Beispiel ist diese FE-Pflanze mit dem PLRV-Kartoffelblattvirus infiziert. Du kannst den Unterschied zwischen einer gesunden und einer infizierten Pflanze erkennen. Das auffälligste Symptom ist die Tavensklerose.

PLRV ist ein Geigenbauvirus, das von APHIS in seiner Hämolymphe übertragen wird, dem Insektenäquivalent zum Säugetierblut. Wenn sich ein nicht infizierter AFI von einer infizierten Pflanze ernährt, infiziert er sich mit dem Virus durch die Pflanzengrippe, die Sie hier sehen können. Nach der Aufnahme muss das Virus vom Insektendarm in die Hämolymphe gelangen und dann die Speicheldrüse passieren, um zurück zur ESE-Pflanze übertragen zu werden.

Und wenn es bei der Fütterung einer ESE-Pflanze viele Viren braucht, dann nur so viele, wie mehr Fraktion durch den Darm und die Speicheldrüse gelangt. Die beiden Haupthindernisse für die Übertragung sind es, mehr Pflanzen zu infizieren, die getestet werden müssen. Wenn ein AFI nicht in der Lage ist, ein Virus zu übertragen, füttern wir das AFI zwei Tage lang mit infiziertem Gewebe und lassen es dann fünf Tage lang eine gesunde Pflanze fressen.

Die Pflanze wird dann begast und nach drei Wochen beginnen wir mit der Suche nach Symptomen. Wenn wir ein Vorhofflimmern finden, das ein Virus nicht vektorisieren kann, können wir mit dem Mikroinjektionsverfahren, das ich Ihnen heute zeigen werde, beurteilen, welche der beiden Barrieren das Virus stoppt. Bei diesem Verfahren wird das Virus direkt in die dortige Hämozelle injiziert, wobei die Übertragungsbarriere im Darm umgangen wird.

Fangen wir also an und ich zeige Ihnen, wie Sie etwas Apex mikroinjizieren können. Das ist also das Glas, die Glasnadeln, die wir verwenden. Wir ziehen Glasnadeln aus diesen Glasabschirmungen mit APU apu herunter.

Das ist also der Mikroinjektor. Um die Mikroinjektion eines Virus durchzuführen. Ich fange an, die Nadel in den Nadelhalter zu stecken.

Also setze ich einfach die Nadel ein und setze sie an ihren Platz. Jetzt werde ich das Virus in die Nadel an der Spitze dieses Helms laden. Jetzt müssen wir AFI für die Mikroinjektion positionieren.

Ich werde also einen AFI mit dem Schmerzdruck nehmen und ihn in den AFI-Halter legen. Im Idealfall werde ich versuchen, die Rückseite der Blattlaus gegen die Halterung zu legen, damit ich Zugang zum Bauchteil des Vorhofflimmerns habe. Okay, großartig.

Jetzt können wir mit der Mikroinjektion fortfahren. Okay, jetzt positioniere ich die Nadel und bringe sie näher an das Vorhofflimmern. Jetzt bringe ich die Nadel in Kontakt mit dem Vorhofflimmern und durchbohre das Exoskelett, am besten versuche ich, zwischen das Segment an der Basis der Beine zu stechen.

Also werde ich spritzen. Jetzt nehme ich das AFI mit dem Pinsel und lege es in das Wiederherstellungspapier, wo ich es für einen Moment aufnehmen lasse. Also müssen wir auch die Mikroinjektion der Steuer-AFI durchführen.

Diese Kontrollmikroinjektion erfolgt nur mit dem Puffer ohne Virus. Der Puffer, den wir verwenden, ist 0,1 mehr Phosphatpuffer pH sieben. Also werde ich das A fit in eine gesunde Pflanze setzen, wo ich ihm erlauben werde, fünf Tage lang fit zu sein, nachdem ich die Pflanze schicksalhaft gemacht habe, und auf die Entwicklung der Symptome nach der Mikroinjektion des untersträngigen NA während einer Woche jeden Tag warte, wird das Expressionsniveau des Zielgens in der AFI gemessen.

Wir haben also gerade ein Afit mikroinjiziert, das das Virus nicht übertragen konnte. Wenn das AFI nach der Mikroinjektion in der Lage ist, das Virus zu übertragen, bedeutet dies, dass dieses AFI eine Darmbarriere hat, die das Virus blockiert hat. Wenn sich andererseits keine Symptome entwickeln, bedeutet dies, dass dieser Afit eine starke Speicheldrüsenbarriere hat.

Wir haben gerade gezeigt, wie man Viren in die Blattläuse injiziert. Das gleiche Verfahren wird verwendet, um diese gestrandete RNA in die Blattläuse zu injizieren, um eine RNI-Augeninterferenz durchzuführen, was eine interessante Technik ist, um die Genfunktion bei Blattläusen zu untersuchen. Das war's also mit der Mikroinjektion.

Ich hoffe, es gefällt Ihnen und es wird für Ihre Experimente hilfreich sein. Vielen Dank.