Name: Kryo-Elektronen-Tomographie-Workflow für dickes Gewebe demonstriert im Maus-Hippocampus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-27T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
Description: Lernen Sie einen standardisierten Kryo-ET-Workflow für dickes Gewebe am Maus-Hippocampus. Diese Methode ermöglicht hochauflösende in-situ-Strukturanalyse nativer Zellumgebungen mit minimalen Artefakten.

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<ol><li>Young, L. N., Villa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bringing+structure+to+cell+biology+with+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Bringing structure to cell biology with cryo-electron tomography.</a> Annu Rev Biophys. 52 (1), 573-595 (2023).</li>
<li>Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography%3A+A+long+journey+to+the+inner+space+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography: A long journey to the inner space of cells.</a> Cell. 185 (15), 2649-2652 (2022).</li>
<li>Hong, Y., Song, Y., Zhang, Z., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography%3A+The+resolution+revolution+and+a+surge+of+in+situ+virological+discoveries%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography: The resolution revolution and a surge of in situ virological discoveries.</a> Annu Rev Biophys. 52 (1), 339-360 (2023).</li>
<li>Nogales, E., Mahamid, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+structural+and+cell+biology+with+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Bridging structural and cell biology with cryo-electron microscopy.</a> Nature. 628 (8006), 47-56 (2024).</li>
<li>Schur, F. K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+high-resolution+in+situ+structural+biology+with+cryo-electron+tomography+and+subtomogram+averaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Toward high-resolution in situ structural biology with cryo-electron tomography and subtomogram averaging.</a> Curr Opin Struct Biol. 58, 1-9 (2019).</li>
<li>Briggs, J. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+biology+in+situ%E2%80%94the+potential+of+subtomogram+averaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural biology in situ—the potential of subtomogram averaging.</a> Curr Opin Struct Biol. 23 (2), 261-267 (2013).</li>
<li>Berger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography+on+focused+ion+beam+lamellae+transforms+structural+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography on focused ion beam lamellae transforms structural cell biology.</a> Nat Methods. 20 (4), 499-511 (2023).</li>
<li>McCafferty, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+cellular+electron+microscopy+with+multimodal+data+to+explore+biology+across+space+and+time%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Integrating cellular electron microscopy with multimodal data to explore biology across space and time.</a> Cell. 187 (3), 563-584 (2024).</li>
<li>Pöge, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+plant+tissue+accessible+for+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Making plant tissue accessible for cryo-electron tomography.</a> Elife. 106455, 1-41 (2025).</li>
<li>Bäuerlein, F. J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography+of+large+biological+specimens+vitrified+by+plunge+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography of large biological specimens vitrified by plunge freezing.</a> Preprint. bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Creekmore, B. C., Kixmoeller, K., Black, B. E., Lee, E. B., Chang, Y. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+human+brain+tissue+vitrified+from+autopsy+revealed+by+cryo-ET+with+cryo-plasma+fib+milling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of human brain tissue vitrified from autopsy revealed by cryo-ET with cryo-plasma fib milling.</a> Nat Commun. 15 (1), 2660(2024).</li>
<li>Chen, Z., Guo, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+in+cryo-electron+tomography+for+tissues%3A+Challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Innovations in cryo-electron tomography for tissues: Challenges and future prospects.</a> Curr Opin Struct Biol. 93, 103112(2025).</li>
<li>Dubochet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+microscopy+of+vitrified+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Q+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron microscopy of vitrified specimens.</a> Q Rev Biophys. 21 (2), 129-228 (2009).</li>
<li>Matsui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomographic+investigation+of+native+hippocampal+glutamatergic+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomographic investigation of native hippocampal glutamatergic synapses.</a> Elife. 13, RP98458(2024).</li>
<li>Ning, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncovering+synaptic+and+cellular+nanoarchitecture+of+brain+tissue+via+seamless+in+situ+trimming+and+milling+for+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Uncovering synaptic and cellular nanoarchitecture of brain tissue via seamless in situ trimming and milling for cryo-electron tomography.</a> Preprint. bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vhut-cryo-fib%2C+a+method+to+fabricate+frozen+hydrated+lamellae+from+tissue+specimens+for+in+situ+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Vhut-cryo-fib, a method to fabricate frozen hydrated lamellae from tissue specimens for in situ cryo-electron tomography.</a> J Struct Biol. 213 (3), 107763(2021).</li>
<li>Glynn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+generalizable+and+targeted+molecular+biopsy+approach+for+in+situ+cryogenic+electron+tomography+of+vitreous+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">A generalizable and targeted molecular biopsy approach for in situ cryogenic electron tomography of vitreous brain tissue.</a> Cell Rep Methods. 5 (7), 101080(2025).</li>
<li>Kelley, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waffle+method%3A+A+general+and+flexible+approach+for+improving+throughput+in+fib-milling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Waffle method: A general and flexible approach for improving throughput in fib-milling.</a> Nat Commun. 13 (1), 1857(2022).</li>
<li>Pierson, J., Ziese, U., Sani, M., Peters, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+vitreous+cryo-section-induced+compression+at+the+macromolecular+level+using+electron+cryo-tomography%3B+80s+yeast+ribosomes+appear+unaffected%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Exploring vitreous cryo-section-induced compression at the macromolecular level using electron cryo-tomography; 80s yeast ribosomes appear unaffected.</a> J Struct Biol. 173 (2), 345-349 (2011).</li>
<li>Alamoudi, A., Studer, D., Dubochet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+artefacts+and+cutting+process+in+vitreous+sections+for+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Cutting artefacts and cutting process in vitreous sections for cryo-electron microscopy.</a> J Struct Biol. 150 (1), 109-121 (2005).</li>
<li>Rigort, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+ion+beam+micromachining+of+eukaryotic+cells+for+cryoelectron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Focused ion beam micromachining of eukaryotic cells for cryoelectron tomography.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (12), 4449-4454 (2012).</li>
<li>Mahamid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+focused+ion+beam+milling+and+lift-out+approach+for+site-specific+preparation+of+frozen-hydrated+lamellas+from+multicellular+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A focused ion beam milling and lift-out approach for site-specific preparation of frozen-hydrated lamellas from multicellular organisms.</a> J Struct Biol. 192 (2), 262-269 (2015).</li>
<li>Marko, M., Hsieh, C., Schalek, R., Frank, J., Mannella, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused-ion-beam+thinning+of+frozen-hydrated+biological+specimens+for+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Focused-ion-beam thinning of frozen-hydrated biological specimens for cryo-electron microscopy.</a> Nat Methods. 4 (3), 215-217 (2007).</li>
<li>Engel, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+architecture+of+the+Chlamydomonas+chloroplast+revealed+by+in+situ+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Native architecture of the Chlamydomonas chloroplast revealed by in situ cryo-electron tomography.</a> Elife. 4, e04889(2015).</li>
<li>Hayles, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+making+of+frozen-hydrated%2C+vitreous+lamellas+from+cells+for+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">The making of frozen-hydrated, vitreous lamellas from cells for cryo-electron microscopy.</a> J Struct Biol. 172 (2), 180-190 (2010).</li>
<li>Rubino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+site-specific+focused-ion-beam+lift-out+method+for+cryo+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A site-specific focused-ion-beam lift-out method for cryo transmission electron microscopy.</a> J Struct Biol. 180 (3), 572-576 (2012).</li>
<li>Schiøtz, O. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+lift-out%3A+Sampling+the+molecular+anatomy+of+whole+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Serial lift-out: Sampling the molecular anatomy of whole organisms.</a> Nat Methods. 21 (9), 1684-1692 (2023).</li>
<li>Nguyen, H. T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serialized+on-grid+lift-in+sectioning+for+tomography+%28solist%29+enables+a+biopsy+at+the+nanoscale%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Serialized on-grid lift-in sectioning for tomography (solist) enables a biopsy at the nanoscale.</a> Nat Methods. 21 (9), 1693-1701 (2024).</li>
<li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+procedure+for+an+optimized+serial+lift-out+cryo-focused+ion+beam+milling+technique+in+tissue+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Step-by-step procedure for an optimized serial lift-out cryo-focused ion beam milling technique in tissue analysis.</a> Biophys Rep. 11, 1-13 (2025).</li>
<li>Wolff, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind+the+gap%3A+Micro-expansion+joints+drastically+decrease+the+bending+of+fib-milled+cryo-lamellae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Mind the gap: Micro-expansion joints drastically decrease the bending of fib-milled cryo-lamellae.</a> J Struct Biol. 208 (3), 107389(2019).</li>
<li>Berger, C., Watson, H., Naismith, J. H., Dumoux, M., Grange, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenon+plasma+focused+ion+beam+lamella+fabrication+on+high-pressure+frozen+specimens+for+structural+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Xenon plasma focused ion beam lamella fabrication on high-pressure frozen specimens for structural cell biology.</a> Nat Commun. 16 (1), 2286(2025).</li>
<li>Eisenstein, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+cryo+electron+tomography+on+in+situ+lamellae%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Parallel cryo electron tomography on in situ lamellae.</a> Nat Methods. 20 (1), 131-138 (2022).</li>
<li>Peck, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aretomolive%3A+Automated+reconstruction+of+comprehensively-corrected+and+denoised+cryo-electron+tomograms+in+real-time+and+at+high+throughput%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Aretomolive: Automated reconstruction of comprehensively-corrected and denoised cryo-electron tomograms in real-time and at high throughput.</a> Preprint. bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Liu, Y. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotropic+reconstruction+for+electron+tomography+with+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Isotropic reconstruction for electron tomography with deep learning.</a> Nat Commun. 13 (1), 6482(2022).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+data+processing+workflow+for+cryo-ET+and+subtomogram+averaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A complete data processing workflow for cryo-ET and subtomogram averaging.</a> Nat Methods. 16 (11), 1161-1168 (2019).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reduction+of+fib+damage+on+cryo-lamella+by+lowering+energy+of+ion+beam+revealed+by+a+quantitative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">The reduction of fib damage on cryo-lamella by lowering energy of ion beam revealed by a quantitative analysis.</a> Structure. 31 (10), 1275-1281.e4 (2023).</li>
<li>Tacke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+streamlined+workflow+for+automated+cryo+focused+ion+beam+milling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A streamlined workflow for automated cryo focused ion beam milling.</a> J Struct Biol. 213 (3), 107743(2021).</li>
<li>Boltje, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryogenic%2C+coincident+fluorescence%2C+electron%2C+and+ion+beam+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A cryogenic, coincident fluorescence, electron, and ion beam microscope.</a> Elife. 11, e82891(2022).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+fluorescence+microscopy+%28IFLM%29+for+cryo-fib-milling+and+in-situ+cryo-ET%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Integrated fluorescence microscopy (IFLM) for cryo-fib-milling and in-situ cryo-ET.</a> Preprint. bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eli+trifocal+microscope%3A+A+precise+system+to+prepare+target+cryo-lamellae+for+in+situ+cryo-ET+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Eli trifocal microscope: A precise system to prepare target cryo-lamellae for in situ cryo-ET study.</a> Nat Methods. 20 (2), 276-283 (2023).</li>
<li>Medeiros, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+workflow+and+instrumentation+for+cryo-focused+ion+beam+milling+of+samples+for+electron+cryotomography%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Robust workflow and instrumentation for cryo-focused ion beam milling of samples for electron cryotomography.</a> Ultramicroscopy. 190, 1-11 (2018).</li>
<li>Goetz, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+platform+for+automated+cryo-fib+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A modular platform for automated cryo-fib workflows.</a> Elife. 10, e70506(2021).</li>
<li>Eisenstein, F., Fukuda, Y., Danev, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+parallel+automated+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Smart parallel automated cryo-electron tomography.</a> Nat Methods. 21 (9), 1612-1615 (2024).</li>
<li>Swulius, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+learning-based+segmentation+of+cryo-electron+tomograms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Deep learning-based segmentation of cryo-electron tomograms.</a> J Vis Exp. (189), e64435(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Hexadecän</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H2131</td><td>Chemikalien & Reagenzien</td></tr><tr><td>2-Methylpentan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M65807</td><td>Chemikalien & Reagenzien</td></tr><tr><td>Clip-Ring</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1131750; 1188953</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Kupferfolie</td><td>Fengcheng-Metallmaterialien</td><td>1 & Mikro; m-Dicke</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Kupferunterstützung TEM-Gitter (100 Mesh)</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd</td><td>BZ10021b</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Cryo-EM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Krios G4</td><td>Ausrüstung&nbsp;</td></tr><tr><td>Kryo-FIB</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Aquilos 2</td><td>Ausrüstung&nbsp;</td></tr><tr><td>Cryo-FIB Autogrid</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1205101</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Gitter (UltrAufoil R 1.2/1.3 300 Mesh)</td><td>Quantifoil</td><td>AltrAufoil</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Hochdruckgefrierschrank</td><td>Leica Microsystems</td><td>EM ICE</td><td>Ausrüstung&nbsp;</td></tr><tr><td>HPF-Träger, Kupfer</td><td>Leica Microsystems</td><td>Typ B (6 mm)</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Ionen-Sputter-Beschichter</td><td>Quorum</td><td>Q150RS plus</td><td>Ausrüstung&nbsp;</td></tr><tr><td>Metallographische Polierpaste</td><td>Lab-testec</td><td>W0.5</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Poliertuch</td><td>GORAL</td><td>B00809</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Schleifpapier</td><td>Eagle Brand Sandpaper</td><td>8000-Körnung, 12000-Körnung</td><td>Verbrauchsgüter</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>S9i</td><td><ein Name="RANGE! D17">Equipment&nbsp; </a></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>200-334-9</td><td>Chemikalien & Reagenzien</td></tr><tr><td>Tilt-Series-Akquisitionssoftware</td><td>https://bio3d.colorado.edu/SerialEM/</td><td>SerialEM 4.0.9</td><td>Software</td></tr><tr><td>Tilt-Series Ausrichtung & Rekonstruktionssoftware</td><td>https://github.com/czimaginginstitute/AreTomo3&nbsp;</td><td>AreTomo 3</td><td>Software</td></tr><tr><td>Tilt-Series-Akquisitionssoftware</td><td>https://github.com/eisfabian/PACEtomo</td><td>PaceTomo</td><td>Software</td></tr><tr><td>Tilt-Series Ausrichtung & Rekonstruktionssoftware</td><td>https://github.com/IsoNet-cryoET/IsoNet</td><td>IsoNet</td><td>Software</td></tr><tr><td>Tilt-Series Ausrichtung & Rekonstruktionssoftware</td><td>https://github.com/cryoem/eman2</td><td>EMAN2</td><td>Software</td></tr><tr><td>Tilt-Series Ausrichtung & Rekonstruktionssoftware</td><td>https://relion.readthedocs.io/en/release-4.0/index.html</td><td>Relion 4</td><td>Software</td></tr></tbody></table>

kryo-elektronen-tomographie-workflow für dickes gewebe demonstriert im maus-hippocampus

Cryo-Electron Tomography Workflow for Thick Tissues Demonstrated in Mouse Hippocampus

Kryo-Elektronen-Tomographie-Workflow für dickes Gewebe demonstriert im Maus-Hippocampus

Cryo&#8209;electron tomography (cryo&#8209;ET) enables 3D visualization of native cellular ultrastructure, but its application to thick tissues is limited ...

cryo-electron-tomography-workflow-for-thick-tissues-demonstrated

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Nachgewiesene in diesem Video sind die Techniken für Flash Einfrieren und Schneiden embryonalen Hirngewebe von Mäusen. Nützliche Tipps für die Verwendung des Kryostaten gegeben sind, einschließlich Methoden zur Problembehandlung, mit denen während des Schneidens, um sicherzustellen, dass das resultierende Gewebe Abschnitte frei von Rissen und anderen Verzerrungen können.

Flash-Freezing und Kryoschneiden E12.5 Gehirn der Maus

Hier beschreiben wir eine schnelle und einfache Methode, um Bild fluoreszenzmarkierten Zellen in semi-dicken Hirnschnitten. Durch die Fixierung, Schneiden und optisch Clearing Hirngewebe beschreiben wir, wie Standard-epifluoreszenten oder konfokale Bildgebung verwendet werden, um einzelne Zellen und neuronalen Netzwerken im intakten Nervengewebe zu visualisieren.

Eine schnelle Annäherung an High-Resolution Fluoreszenz-Imaging in Semi-Thick Hirnschnitten

In diesem Video demonstrieren wir das Schneiden eines gefrorenen Hirntumorgewebes einer Maus mit einem Kryostaten. Die so gewonnenen gefrorenen Hirngewebeschnitte werden bis zur weiteren Analyse bei niedrigen Temperaturen gelagert.

Schnitt von gefrorenem Maushirngewebe: Ein Verfahren zur Gewinnung dünner gefrorener Gewebeschnitte aus gefrorenem Maushirngewebe

Neuronale Prozesse zur ultrastrukturellen Analyse zu erhalten, beschreiben wir ein Protokoll für die Beschichtung von primären Neuronen auf Elektronenmikroskopie Gitter gefolgt von einem Blitzgefrieren, wodurch Proben in einer Schicht von glasartigem Eis suspendiert. Diese Proben können mit einer Kryo-Elektronenmikroskop auf Strukturen im Nanometerbereich sichtbar zu prüfen.

Herstellung von primären Neuronen für die Visualisierung von Neuriten in einem tiefgefrorenen Zustand unter Verwendung von Kryo-Elektronentomographie

Hier wird ein Protokoll vorgestellt, das die Probenvorbereitungs- und Datenerfassungsschritte beschreibt, die in der Kryo-Soft-Röntgentomographie (SXT) erforderlich sind, um die Ultrastruktur ganzer kryokonservierter Zellen mit einer Auflösung von 25 nm Halbtonhöhe abzubilden.

Eine kartographische 3D-Beschreibung der Zelle durch Kryo-Soft-Röntgentomographie

Fokussiertes Ionenstrahlfräsen zur Herstellung von glasartigen On-Grid-Lamellen aus tiefgefrorenen biologischen Proben für die Kryo-Elektronentomographie.

Präparation von Lamellen aus glasartigen biologischen Proben mit einem Zweistrahl-Rasterelektronenmikroskop für die Kryo-Elektronentomographie

Wir präsentieren ein Protokoll zur Lamellenpräparation von gefrorenen biologischen Proben mittels kryofokussiertem Ionenstrahl-Mikrobearbeitung für hochauflösende Strukturstudien von Makromolekülen in situ mit Kryo-Elektronentomographie. Das vorgestellte Protokoll enthält Richtlinien für die Herstellung von hochwertigen Lamellen mit hoher Reproduzierbarkeit zur strukturellen Charakterisierung von Makromolekülen innerhalb der Saccharomyces cerevisiae.

Herstellung und Kryo-FIB-Mikrobearbeitung von Saccharomyces cerevisiae für die Kryo-Elektronentomographie

Die steigende Nachfrage nach großflächiger Datenerfassung in der kryogenen Elektronentomographie erfordert Bilderfassungsroutinen mit hohem Durchsatz. Hier wird ein Protokoll beschrieben, das die jüngsten Entwicklungen fortschrittlicher Akquisitionsstrategien implementiert, die darauf abzielen, die Zeiteffizienz und den Durchsatz der tomographischen Datenerfassung zu maximieren.

Strategien zur Optimierung der Datenerfassung in der Kryoelektronentomographie

Die Kryo-STEM-Tomographie bietet eine Möglichkeit, Organellen intakter Zellen ohne Einbettung, Schnitt oder andere invasive Präparate sichtbar zu machen. Die erzielte 3D-Auflösung liegt derzeit im Bereich von wenigen Nanometern, mit einem Sichtfeld von mehreren Mikrometern und einer zugänglichen Dicke in der Größenordnung von 1 μm.

Visualisierung von Organellen in situ mittels Kryo-STEM-Tomographie

Dieser Workflow ermöglicht die Lamellenproduktion für fluoreszenzmarkierte biologische Strukturen, die klein (&lt;1 μm axiale Ausdehnung) und selten (1 Kopie pro Zelle) sind, unter Verwendung einer kryogenen trikoinzidenten Bildgebungsplattform. Diese Plattform integriert Fluoreszenzmikroskopie, fokussiertes Ionenstrahlfräsen und Rasterelektronenmikroskopie in einer einzigen Fokusposition und ermöglicht die gleichzeitige Fluoreszenzmikroskopie während des Fräsens.

Arbeitsablauf mit einem kryogenen Koinzidenz-Fluoreszenz-, Elektronen- und Ionenstrahlmikroskop zur gezielten Fräsung von Zellen

Lernen Sie einen standardisierten Kryo-ET-Workflow für dickes Gewebe am Maus-Hippocampus. Diese Methode ermöglicht hochauflösende in-situ-Strukturanalyse nativer Zellumgebungen mit minimalen Artefakten.

Kryo-Elektronen-Tomographie-Workflow für dickes Gewebe demonstriert im Maus-Hippocampus

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