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<table><tbody><tr><td>4&prime;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td>verdünnt 1:2000 für Immunfärbung</td></tr><tr><td>50 mL Zentrifugenrohrfilter (0,22 &micro;m)</td><td>CellTreat</td><td>229710</td><td>Zur Herstellung steriler Lösungen</td></tr><tr><td>500 mL Filtereinheiten</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>566-0020</td><td>Zur sterilen Medienzubereitung</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Amphoterecin B</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Hypophysenextrakt</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>13028014</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Cholera Toxin</td><td>Sigma</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td>Kollagen I</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1048301</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td>W1 Spinning Disk Ti2 invertiertes Mikroskop mit Hamamatsu sCMOS-Kamera</td></tr><tr><td>Corning Transwell-Einsätze</td><td>Sigma</td><td>CLS3460</td><td></td></tr><tr><td>Diethylentriamin NONOate (DETA-NONOate)</td><td>Cayman Chemical</td><td>82120</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12-Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Sigma</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>Fetales bovines Serum</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Halt 1X Proteasehemmercocktail</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1860932</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F1-12 Nährstoffmischung</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>Insulinlösung</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Isoproterenolhydrochlorid</td><td>Sigma</td><td>I6504</td><td></td></tr><tr><td>Keratinozyten-serumfreies Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17005042</td><td></td></tr><tr><td>Muriner epidermaler Wachstumsfaktor</td><td>Sigma</td><td>E4127</td><td></td></tr><tr><td>N(G)-Nitro-L-Argininmethylester (L-NAME)</td><td>Sigma</td><td>N5751</td><td></td></tr><tr><td>NuSerum</td><td>Corning</td><td>355100</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatpufferlösung (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma</td><td>10165921001</td><td></td></tr><tr><td>Retinsäure</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Rho-Kinase-Inhibitor (Y-27632 Hydrochlorid)</td><td>Cayman Chemical</td><td>TOM-C837Z37</td><td></td></tr><tr><td>RIPA-Puffer</td><td>Sigma</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640-Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Natriumnitrit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S2252</td><td></td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma</td><td>T8158</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-Acetylierte Tubulin-Antikörper (Maus)</td><td>Sigma</td><td>T6793</td><td>verdünnt 1:200 für Immunfärbung</td></tr><tr><td>&alpha;-FoxJ1-Antikörper (Maus)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-9965-80</td><td>verdünnt 1:200 für Immunfärbung</td></tr><tr><td>&alpha;-MouseCy3-Sekundärantikörper</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A10521</td><td>verdünnt 1:1000 für Immunfärbung</td></tr><tr><td>&gamma;-Sekretase-Inhibitor IX (DAPT)</td><td>Sigma</td><td>D5942</td><td></td></tr></tbody></table>

messung der stickstoffmonoxidproduktion in maus-tracheal-epithelzellkulturen, die an der luft-flüssigkeit-grenzfläche differenziert wurden

Measurement of Nitric Oxide Production in Mouse Tracheal Epithelial Cell Cultures Differentiated at the Air Liquid Interface

Messung der Stickstoffmonoxidproduktion in Maus-Tracheal-Epithelzellkulturen, die an der Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche differenziert wurden

Airway epithelial cultures differentiated at the air&#8211;liquid interface (ALI) provide a physiologically relevant model to study nitric oxide (NO) ...

measurement-nitric-oxide-production-mouse-tracheal-epithelial-cell

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Pulmonale Epithelzellen aus den Atemwegen von Mäusen isoliert und kultiviert bei Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche als ein Modell der differenzierten respiratorischen Epithels. Ein Protokoll ist für die Isolierung, Kultivierung und Freilegen dieser Zellen zu Mainstream Zigarettenrauch beschrieben, um molekulare Antworten zu diesem Umweltgift zu studieren.

Isolierung von Maus respiratorischen Epithelzellen und der Exposition gegenüber Experimental Zigarettenrauch bei Air Liquid-Interface

Transgene Mäuse sind äußerst nützlich bei der Zuschreibung physiologischen Funktion von Genen. Als solcher Forschung im Allgemeinen und funktionelle Untersuchungen der Atemwege, insbesondere, haben eine bemerkenswerte Verschiebung hin zu Mausmodellen unterzogen. Hier bieten wir Protokolle...

In-vitro-Messungen des Tracheal Zusammenziehen mit Mäusen

Die endotheliale Glykokalyx / endothelial Oberflächenschicht ist ideal studiert mit Intravitalmikroskopie. Intravitalmikroskopie ist technisch anspruchsvoll in einem sich bewegenden Organ wie der Lunge. Wir zeigen, wie die gleichzeitige Hellfeld und Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden, um Endotheloberfläche Schichtdicke in einem frei beweglichen...

In vivo Messung der Maus Pulmonary Endothelial Surface Layer

Nasen Epithelzellen, durch oberflächliche Schürf Biopsie der menschlichen Freiwilligen erhalten, werden erweitert und auf Gewebekultureinsätze übertragen. Nach Erreichen der Konfluenz werden die Zellen an der Luft Flüssigkeit-Grenzfläche angebaut, was Kulturen der Wimper und nicht-Geißelzellen. Differenzierte Nasen epithelialen Zellkulturen bieten tragfähige experimentelle Modelle für die Untersuchung der Schleimhaut der Atemwege.

Die Kultivierung der menschlichen Nasen Epithelzellen an der Air flüssig-Grenzfläche

In diesem Artikel wurden primäre Lungenendothelzellen aus neonatalen Mäusen isoliert und kultiviert.

Isolierung von primären Lungenendothelzellen der Maus

Jüngste Fortschritte bei humaninduzierten pluripotenten Stammzelldifferenzierungsprotokollen ermöglichen die schrittweise Ableitung organspezifischer Zelltypen. Hier stellen wir detaillierte Schritte zur Erhaltung und Expansion von iPSC-abgeleiteten Atemwegsbasalzellen und deren Differenzierung zu einem mukoziliären Epithel in Luft-Flüssigkeits-Grenzflächenkulturen zur Verfügung.

Erzeugung von Atemwegs-Epithelzell-Luft-Flüssig-Grenzflächenkulturen aus humanen pluripotenten Stammzellen

In dieser Arbeit wird eine reproduzierbare, kostengünstige und robuste Methode zur Isolierung und Expansion von primären Bronchialepithelzellen für das langfristige Biobanking und die Erzeugung differenzierter Epithelzellen durch Kultur an der Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche vorgestellt.

Isolierung von Bronchialepithelzellen aus reseziertem Lungengewebe für Biobanken und Etablierung gut differenzierter Luft-Flüssigkeits-Grenzflächenkulturen

In dieser Arbeit beschreiben wir ein in vitro Modell zur Isolierung und Differenzierung von murinen Atemwegsepithelzellen, wobei der Schwerpunkt auf ihrer Akklimatisierung an chronischen Zigarettenrauchextrakt (CSE) liegt. Das Modell könnte verwendet werden, um die Multi-Omics-Auswirkungen von CSE umfassend zu charakterisieren, was möglicherweise Einblicke in die zellulären Reaktionen unter chronischer Rauchbelastung liefert.

In vitro Modell zur Untersuchung der Differenzierung und Veränderung von Multi-Omics an murinen Atemwegsepithelzellen, die mit Zigarettenrauchextrakt stimuliert wurden

Die Grenzflächenkultur zwischen Luft und Flüssigkeit wird häufig verwendet, um pseudostratifiziertes Atemwegsepithel zu entwickeln, indem primäre normale menschliche Bronchialepithelzellen differenziert werden, die die apikale Seite der Lungenatemwege nachahmen. Hier beschreiben wir ein einfaches Protokoll zur Bestimmung seiner Qualität durch Überwachung seiner biophysikalischen Eigenschaften, wie z. B. der Ziliarfunktion und der Membranintegrität.

Bestimmung der Ziliarfunktion und Membranundurchlässigkeit des pseudostratifizierten Lungenepithels der Atemwege

Die endogene Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) reguliert eine Vielzahl von biologischen Funktionen. Es wird zunehmend klar, dass Störungen oder Fehlregulation der NO-basierter Signalisierung in vielen menschlichen Krankheiten beteiligt ist. Methoden zur Quantifizierung relevanter keine Metaboliten können neue diagnostische oder prognostische Biomarker für Erkrankungen des Menschen bieten.

Analytische Verfahren zur Bestimmung von Stickoxid Bioaktivität

University of Maryland School of Medicine.  Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Quantifizierung der Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) in den Apithelkulturen der Luftwege, die an der Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche (ALI) differenziert sind, indem Nitrit in apikalen Sekreten mittels eines triiodidbasierten chemilumineszenzbasierten Assays gemessen wird.

Messung der Stickstoffmonoxidproduktion in Maus-Tracheal-Epithelzellkulturen, die an der Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche differenziert wurden

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