Name: Schnelle Produktion rekombinanter menschlicher SLFN14-Ribonuklease und stöchiometrische Analyse mittels Massenphotometrie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Erfahren Sie die schnelle Produktion rekombinanten menschlichen SLFN14-Ribonuklease in HEK293-Zellen und die stöchiometrische Analyse mittels Massenphotometrie. Diese Methode ermöglicht biochemische und strukturelle Studien.

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<ol><li>Pisareva, V. P., Muslimov, I. A., Tcherepanov, A., Pisarev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+ribosome-associated+endoribonuclease+slfn14+from+rabbit+reticulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel ribosome-associated endoribonuclease slfn14 from rabbit reticulocytes.</a> Biochemistry. 54 (21), 3286-3301 (2015).</li>
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<li>Seong, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+14+%28slfn14%29+is+a+novel+antiviral+factor+involved+in+the+control+of+viral+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Schlafen 14 (slfn14) is a novel antiviral factor involved in the control of viral replication.</a> Immunobiology. 222 (11), 979-988 (2017).</li>
<li>Jo, U., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+molecular%2C+and+functional+insights+into+schlafen+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural, molecular, and functional insights into schlafen proteins.</a> Exp Mol Med. 54 (6), 730-738 (2022).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Velcrin-induced+selective+cleavage+of+trna%28leu%29%28taa%29+by+slfn12+causes+cancer+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Velcrin-induced selective cleavage of trna(leu)(taa) by slfn12 causes cancer cell death.</a> Nat Chem Biol. 19 (3), 301-310 (2023).</li>
<li>Murai, J., Thomas, A., Miettinen, M., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+%28slfn11%29%2C+a+restriction+factor+for+replicative+stress+induced+by+DNA-targeting+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 (slfn11), a restriction factor for replicative stress induced by DNA-targeting anti-cancer therapies.</a> Pharmacol Ther. 201, 94-102 (2019).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+triggers+innate+immune+responses+through+its+ribonuclease+activity+upon+detection+of+single-stranded+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 triggers innate immune responses through its ribonuclease activity upon detection of single-stranded DNA.</a> Sci Immunol. 9 (96), eadj5465(2024).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Codon-usage-based+inhibition+of+hiv+protein+synthesis+by+human+schlafen+11%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Codon-usage-based inhibition of hiv protein synthesis by human schlafen 11.</a> Nature. 491 (7422), 125-128 (2012).</li>
<li>Valenzuela, C., Saucedo, S., Llano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen14+impairs+hiv-1+expression+in+a+codon+usage-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Schlafen14 impairs hiv-1 expression in a codon usage-dependent manner.</a> Viruses. 16 (4), (2024).</li>
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<li>Marenchino, M., Armbruster, D. W., Hennig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+efficient+purification+of+rna-binding+proteins%3A+Application+to+hiv-1+rev%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Rapid and efficient purification of rna-binding proteins: Application to hiv-1 rev.</a> Protein Expr Purif. 63 (2), 112-119 (2009).</li>
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<li>Adhikari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-stringency+blueprint+of+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-stringency blueprint of the human proteome.</a> Nat Commun. 11 (1), 5301(2020).</li>
<li>Liao, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rbpworld+for+exploring+functions+and+disease+associations+of+rna-binding+proteins+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rbpworld for exploring functions and disease associations of rna-binding proteins across species.</a> Nucleic Acids Res. 53 (D1), D220-D232 (2025).</li>
<li>Gebauer, F., Schwarzl, T., Valcarcel, J., Hentze, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rna-binding+proteins+in+human+genetic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Rna-binding proteins in human genetic disease.</a> Nat Rev Genet. 22 (3), 185-198 (2021).</li>
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<li>Mckenzie, E. A., Abbott, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+recombinant+proteins+in+insect+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Expression of recombinant proteins in insect and mammalian cells.</a> Methods. 147, 40-49 (2018).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Mercapptoethanol (b-Me)</td><td>Sigma</td><td>M3148-500ML</td><td>14,3 M Lösungs-Tock</td></tr><tr><td>AcquireMP 2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Datenerfassungssoftware</td></tr><tr><td>Adenosin-5'-Triphosphatdinatriumnatrium-Trihydrat (ATP)</td><td>Chem-Impex International</td><td>00015-100G</td><td>Lösung auf pH-Wert 7,0 anpassen</td></tr><tr><td>Anti-Flag M2 Affinitätsgel</td><td>Millipore</td><td>A2220</td><td>Anti-Flaggen-Affinitätsharz</td></tr><tr><td>Benzamidinhydrochloridhydrat</td><td>Sigma</td><td>B6506-25G</td><td>Proteaseinhibitor</td></tr><tr><td>Breitband-Proteinstandards (10–250 kDa)</td><td>Bio-Rad</td><td>P7719S</td><td>Standards für vorgefärbtes Protein</td></tr><tr><td>Gräfin 3</td><td>Invitrogen</td><td>A49862</td><td>Automatisierter Zellzähler</td></tr><tr><td>DiscoverMP v2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Datenanalyse-Software</td></tr><tr><td>Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td>1x-Lösungsschaft</td></tr><tr><td>DYKDDDDK-Peptid</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A36805</td><td>3xFlag-Peptid</td></tr><tr><td>FreeStyle 293-F-Zellen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R79007</td><td>Säugetier-Suspensionszellen</td></tr><tr><td>Geniust M Nuklease DMF eingereicht</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-391121B</td><td>Universalnuklease</td></tr><tr><td>HyClone CDM4HEK293 Medien</td><td>Cytiva</td><td>SH3085802</td><td>Serumfreies Wachstumsmedium</td></tr><tr><td>HyClone SFM4Transfx-293 Medien</td><td>Cytiva</td><td>SH3086002</td><td>Transienten Transfektionsmedium</td></tr><tr><td>Immersol 518F</td><td>Zeiss</td><td>4Y00-R0DY-1007-3BF3</td><td>Immersionsöl</td></tr><tr><td>Isopropylalkohol</td><td>Macron Feinchemikalien</td><td>3032-02</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli-Samplepuffer</td><td>Bio-Rad</td><td>1610737</td><td>2x-Lösungsstock</td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>VWR</td><td>J580-25MG</td><td>Proteaseinhibitor</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid-Hexahydrat (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>MassFerence P1&nbsp;</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-41033</td><td>500x Kaliberschaft</td></tr><tr><td>MassGlass UC Mustervorbereitungsset</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21022</td><td>Schlitten und Dichtung</td></tr><tr><td>Mikro-Biospin-Säule</td><td>Bio-Rad</td><td>7326204</td><td>Leere Polypropylen-Spin-Säule</td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7000 System</td><td>Millipore</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Typ-I-Ultrareins Wasser</td></tr><tr><td>Mini-Protean TGX fleckfreie Gels</td><td>Bio-Rad</td><td>4568086</td><td>4–15 % SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Minitron mit Feuchtigkeit, Kühlung und CO2</td><td>Infors</td><td>72175</td><td>Inkubator-Shaker</td></tr><tr><td>MP-Ausrichtungsset</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21019</td><td>Ausrichtungswerkzeug, weiche Pinzette, Magnet</td></tr><tr><td>Nanophotometer</td><td>Implen</td><td>NP80</td><td>UV-Vis-Spektrophotometer</td></tr><tr><td>Nutator</td><td>Marke Clay Adams</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin A</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-45036B</td><td>Proteaseinhibitor</td></tr><tr><td>Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)</td><td>Research Products International</td><td>P20270-25.0</td><td>Proteaseinhibitor</td></tr><tr><td>Polycarbonat-Shake-Kolben&nbsp;</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>WPFBC1000S</td><td>belüftete, gelüftete Bodenflasche</td></tr><tr><td>Polyethylenimin (PEI) MW 40.000</td><td>Polywissenschaften</td><td>24765</td><td>Transfektionsreagenz</td></tr><tr><td>Qubit 4 Fluorometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q33226</td><td></td></tr><tr><td>Qubit-RNA-Hochsensitivitäts-Assay-Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32852</td><td>Quantifizierung mit RNA-spezifischem Farbstoff</td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>LC6065</td><td>Coomassie G-250</td></tr><tr><td>SLFN14-Expressionsplasmid-DNA</td><td>Origene</td><td>RC226257</td><td>menschenmarkierter ORF-Klon</td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td><td>Millipore</td><td>1.37017</td><td></td></tr><tr><td>Tris, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J60202. K2</td><td>1 M gepufferte Lösung</td></tr><tr><td>Tris (2-Carboxyethyl) Phosphinhydrochlorid (TCEP)</td><td>Goldbiotechnologie</td><td>TCEP10</td><td>TCEP</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>M143-1L</td><td>Waschmittel</td></tr><tr><td>Trypan-Blau-Beize</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td>0,4 % Lösungsaktie</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>VWR</td><td>0777-1L</td><td>Waschmittel</td></tr><tr><td>TwoMP</td><td>Refeyn</td><td>MP-PRO-00001</td><td>Massenphotometer</td></tr><tr><td>Zeba 40K Desaltin-Säule</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A57759</td><td>Größenausschlusschromatographie</td></tr></tbody></table>

schnelle produktion rekombinanter menschlicher slfn14-ribonuklease und stöchiometrische analyse mittels massenphotometrie

Rapid Production of Recombinant Human SLFN14 Ribonuclease and Stoichiometric Analysis by Mass Photometry

Schnelle Produktion rekombinanter menschlicher SLFN14-Ribonuklease und stöchiometrische Analyse mittels Massenphotometrie

Ribonucleases are a specialized class of RNA binding proteins that catalyze RNA cleavage and contribute to diverse biological processes including gene ...

rapid-production-recombinant-human-slfn14-ribonuclease-stoichiometric

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Dieses Protokoll beschreibt, wie absolute Quantifizierungsassays von Zielproteinen in komplexen biologischen Proben unter Verwendung ausgewählter Reaktionsüberwachung durchgeführt werden. Es wurde verwendet, um Proteine des Chemotaxis-Signalwegs von Mausmakrophagen genau zu quantifizieren. Die Auswahl des Zielpeptids, die Assay-Entwicklung sowie qualitative und quantitative Assays werden ausführlich beschrieben.

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Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für eine LC-MS-basierte Sequenzierungsmethode, die als direkte Methode zur Sequenzierung kurzer RNA (&lt;35 nt pro Lauf) ohne cDNA-Zwischenprodukt und als allgemeine Methode zur Sequenzierung verschiedener Nukleotidmodifikationen in einer einzigen Studie mit Einzelbasenpräzision verwendet werden kann.

2D-HELS MS Seq: Eine allgemeine LC-MS-basierte Methode zur direkten und de novo Sequenzierung von RNA-Gemischen mit unterschiedlichen Nukleotidmodifikationen

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Es wird ein detailliertes Protokoll für die Synthese von Lipid-Nanopartikeln (LNPs) unter Verwendung von Confined Impinging Jet (CIJ)-Mischertechnologien demonstriert, einschließlich eines zweistrahligen CIJ und eines vierstrahligen Multi-Inlet-Vortex-Mischers (μMIVM). Die CIJ-Mischer erzeugen reproduzierbare, turbulente Mikromischumgebungen, die zur Produktion von monodispersen LNPs führen.

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Wir präsentieren ein aktualisiertes Protokoll für die Herstellung des OnePot-Systems "Protein synthesis Using Recombinant Elements" (PURE) und roher Ribosomen für die zellfreie Proteinsynthese, wobei der Schwerpunkt auf der Kontrolle des Zellwachstums liegt, um Variationen von Charge zu Charge zu minimieren.

Verfeinerung von OnePot PURE und Roh-Ribosomen-Produktion für reproduzierbare zellfreie Proteinsynthese

Dieses Protokoll beschreibt die rekombinante Produktion und Reinigung von Hydrophobin SC16 aus Escherichia coli und bietet fluoreszenzbasierte Tests zur Überwachung der Selbstassemblierung.

Rekombinante Produktion und Reinigung von Hydrophobin SC16 aus Escherichia coli sowie Überwachung ihrer Selbstassemblierung mittels Fluoreszenztests

Erfahren Sie die schnelle Produktion rekombinanten menschlichen SLFN14-Ribonuklease in HEK293-Zellen und die stöchiometrische Analyse mittels Massenphotometrie. Diese Methode ermöglicht biochemische und strukturelle Studien.

Schnelle Produktion rekombinanter menschlicher SLFN14-Ribonuklease und stöchiometrische Analyse mittels Massenphotometrie

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