Name: Kleinskalige Dissektion und Antikörperfärbung der Augen-, Antennen- und Flügel-Imaginalscheiben von Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-15T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Lernen Sie die effiziente Präparation und Antikörperfärbung von Drosophila-Imaginalscheiben für Entwicklungsbiologie. Diese Methode minimiert Reagenzienverbrauch und ermöglicht präzise Proteinvisualisierung in Augen-, Antennen- und Flügelgeweben.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Dinatriumphosphat</td><td>Fisher</td><td>7558-79-4</td><td>Na2HPO4 – Natriumphosphat dibasisch wasserfrei. Andere Hydratationszustände können verwendet werden, verändern jedoch das Molekulargewicht</td></tr><tr><td>Pinzette: Dumont #5 Biologie-Zange</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>11252-20</td><td>Stil: #5</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Spitzenform: Gerade</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Länge: 11 cm</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Autoklav-sicher: Ja</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Tipps: Biologie</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Tippmaße:</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>0,05 x 0,02 mm</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Legierung / Material: Inox</td></tr><tr><td>Formaldehyd</td><td>Fisher</td><td>BP531-500</td><td>Molekularbiologie-Qualität, 37 % Formaldehyd. 500ml</td></tr><tr><td>Formaldehydfixativ</td><td>Fisher</td><td>BP531-500</td><td>3,7 % Formaldehyd im 0,1 M Natriumphosphatpuffer pH 7,2, hergestellt durch Verdünnung aus 37 % Lager.</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>Eis</td><td>Benutzerpräferenz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Lysin, 98 %</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>J62225.22</td><td></td></tr><tr><td>mAb40-1</td><td>DHSB</td><td>40-1a-s</td><td>Anti-Beta-Galaktosidase</td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhren</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5520</td><td>1,5-ml-Röhren zum Aufnehmen von Proben.</td></tr><tr><td>Mikrodissektionsschere</td><td>Feine wissenschaftliche Werkzeuge</td><td>15003-08</td><td>5 mm Schneide, gerade Spitze, 8,5 cm</td></tr><tr><td>Mononatriumphosphat</td><td>Fisher</td><td>7558-80-7</td><td>NaH2PO4 – Natriumphosphat monobasisch wasserfrei. Bei Verwendung einer hydratisierten Form würde sich das Gewicht, das für eine 0,1-Meter-Lösung benötigt wird, verändern.</td></tr><tr><td>Montagemedium</td><td></td><td></td><td>75 % Glycerollösung in 0,1 M Natriumphosphatpuffer pH 7,2 mit 2,5 % n-Propylgallat. Mische durch Inversion, um Blasen zu minimieren.</td></tr><tr><td>NSG</td><td></td><td></td><td>0,1 M Natriumphosphatpuffer pH 7,2, 0,1 % Saponin, 5 % NGS</td></tr><tr><td>n-Propylgallat</td><td>MP Biomedizin</td><td>210274780</td><td></td></tr><tr><td>Nagellack</td><td>Ted Pella, von Fisher gekauft</td><td>NC0381432</td><td>Zum Abdichten von Schlitten</td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Fisher</td><td>NC0099380</td><td>Für Mikrodissektionsnadeln. Hohler Edelstahl; Grifflänge: 4 3/4" Länge</td></tr><tr><td>Nunc Microwell MiniTrays</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>12565155</td><td>MicroWell MiniTray für serologische Anwendungen. Brunnenzählung 60</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>StatLab</td><td>PM996</td><td>StatLab ParaFilm M Selbstabdichtender flexibler Film</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>00380-250</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Benutzerpräferenz</td><td></td><td>Bereiten Sie 800 ml destilliertes Wasser in einem geeigneten Behälter vor.</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Gib 1,37 M Natriumchlorid zur Lösung hinzu.</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Gib 26,8 mM Kaliumchlorid zur Lösung hinzu.</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Gib 101 mM Natriumphosphat-Dibasisch zur Lösung hinzu.</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Fügen Sie 18,0 mM Kaliumphosphat monobasisch zur Lösung hinzu.</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Lösung auf den gewünschten pH-Wert anpassen (typischerweise pH & Asymp; 7,4).</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Geben Sie destilliertes Wasser, bis das Volumen 1 L beträgt.</td></tr><tr><td>PBT</td><td>Benutzerpräferenz</td><td></td><td>0,1 M Natriumphosphatpuffer pH7,2, 0,1 % Rinderserumalbumin und 0,2 % Triton X-100.</td></tr><tr><td>PDT</td><td>Benutzerpräferenz</td><td></td><td>0,1 M Natriumphosphatpuffer (pH = 7,2), 0,3 % Desoxycholat und 0,3 % Triton x-100</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>Falcon</td><td>Corning 351007</td><td>Petrischale; 60 mm; Nicht behandelt</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>Falcon</td><td>Corning 351008</td><td>Petrischale; 35 mm; Nicht behandelt</td></tr><tr><td>Zange</td><td>Benutzerpräferenz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PLP</td><td>n/a</td><td></td><td>2 % Paraformaldehyd 1,35 % Lysin im 0,05 M Natriumphosphatpuffer pH 7,2</td></tr><tr><td>Sekundäre Antikörper</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-545-151</td><td>0,5 mg Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Maus IgG.</td></tr><tr><td>Dia-Abdeckungen</td><td>VWR</td><td>48393-172</td><td>VWR Deckglas #1.5 22x40 (GEHÄUSE)</td></tr><tr><td>Folien</td><td>Fisher</td><td>125442</td><td>Fisher Glass Slides 10bx/CS</td></tr><tr><td>Natriumdesoxycholat</td><td>Thermo Fisher Wissenschaft</td><td>89904</td><td>Natriumdeoxycholat-Waschmittel; 5 mg</td></tr><tr><td>Natriumperiodat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71859-25G</td><td>Natriumperiodat &ndash; 25 Gramm</td></tr><tr><td>Natriumphosphatpuffer</td><td></td><td></td><td>0,1M NaPO4-Puffer pH 7,2. Mische 28 ml 0,1 M Anyhdrous Monosodium Phosphat Fond (11,998 g NaH2PO4 bis 1 L destilliertes Wasser) mit 72 ml 0,1 M Anyhydrous Dinatriumphosphat-Fond (14,196 g Na2HPO4 bis 1L destilliertes Wasser), um 100 ml 0,1M NaPO4-Puffer zu erzeugen. Alternativ kann PBS verwendet werden.</td></tr><tr><td>Wolframdraht</td><td>Ted Pella</td><td>27-11</td><td>.005" DIA.</td></tr><tr><td>Triton x-100</td><td>Thermo Fisher Wissenschaft</td><td>A16046AE</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Benutzerpräferenz</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kleinskalige dissektion und antikörperfärbung der augen-, antennen- und flügel-imaginalscheiben von drosophila melanogaster

Small Scale Dissection and Antibody Staining of Eye-Antennal and Wing Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

Kleinskalige Dissektion und Antikörperfärbung der Augen-, Antennen- und Flügel-Imaginalscheiben von Drosophila melanogaster

Drosophila imaginal discs have long been studied as models of epithelial development, patterning, and regeneration. Antibody labeling and imaging of ...

small-scale-dissection-antibody-staining-eye-antennal-wing-imaginal

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Hier beschreiben wir ein Protokoll, um die Migration von Gliazellen in den Entwicklungsländern Drosophila Auge mit Live-mikroskopische Analyse mit GFP markierten Gliazellen gepaart untersuchen.

Live-Imaging von Gliazellen Migration in der Drosophila Eye Imaginalscheibe

Wir beschreiben ein neuartiges rot fluoreszierendes Protein (RFP) Reporter, der speziell in den...

A Novel RFP Reporter in der Visualisierung des Eye Imaginalscheibe in Aid Drosophila</em

Dissektion und Immunhistochemie von Larven, Puppen und Erwachsenenbildung<em&gt; Drosophila</em&gt; Netzhäute

Bei der Färbung von Drosophila-Imaginalscheiben wird oft eine grobe Dissektion durchgeführt, bei der die Scheiben freigelegt werden, aber am Körper haften. Nach dem Färben werden die interessierenden Discs isoliert und montiert. Das Beispielprotokoll demonstriert ein Verfahren zum Disparieren und Montieren von Flügel-Imaginalscheiben.

Drosophila Dissektion der Imaginalscheibe der Larva: Eine Methode zur Beobachtung der Entwicklung von Epithelien

Die adulten Strukturen von Drosophila stammen von sackartigen Strukturen ab, die imaginale Scheiben genannt werden. Die Analyse dieser Scheiben bietet Einblicke in viele Entwicklungsprozesse, einschließlich der Gewebebestimmung, der Etablierung von Kompartimentgrenzen, der Zellproliferation, der Spezifikation des Zellschicksals und der planaren Zellpolarität. Dieses Protokoll wird verwendet, um imaginale Scheiben für die Licht-/Fluoreszenzmikroskopie vorzubereiten.

Präparation und Immunfärbung von Imaginalscheiben aus Drosophila melanogaster

Das Ziel dieser Technik ist es, Forschern die Möglichkeit zu geben, Puppenaugenscheiben jeden Alters zu dissektionieren, Immunfärbung  und Montage von Puppenaugenscheiben durchzuführen.

Dissection und Montage<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye Discs

Dieses Protokoll zeigt , wie fluoreszierend markiert, genetisch definierten klonalen Tumoren im Auge von Drosophila melanogaster / antennal Imaginalscheiben (EAD) zu erzeugen. Es beschreibt, wie der EAD und Gehirn aus dem dritten Larvenstadium zu sezieren und wie sie zu verarbeiten, zu visualisieren und zu Veränderungen der Genexpression und Tumorinvasivität quantifizieren.

Das<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginalscheibe Tumormodell: Visualisierung und Quantifizierung von Genexpression und Tumorinvasivität mit Genetischen Mosaiken

Dieses Protokoll beschreibt die Dissektion und Immunostaining von Erwachsenen Drosophila Melanogaster Gewebe des Gehirns. Insbesondere unterstreicht dieses Protokoll die Verwendung von Drosophila Pilz Körper und Photorezeptor Neuronen als Beispiel neuronale Teilmengen, die genau verwendet werden, um die allgemeinen Grundsätze für viele Aspekte der neuronalen Entwicklung aufzudecken.

Dissektion, Immunofluorescent Färbung der Pilz Körper und Photorezeptor Neuronen im Gehirn Erwachsener Taufliege melanogaster

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Bühne und sezieren, olfaktorische Gewebe von Drosophila -Arten zu entwickeln. Das sezierte Gewebe kann später für Molekulare Analysen, wie quantitative RT-PCR (Reverse Transkription-Polymerase Chain Reaction) oder RNA Sequenzierung (RNAseq), sowie in-Vivo -Analysen wie Immunohistochemistry oder in Situ verwendet werden Hybridisierung.

Vorbereitung, Entwicklung von peripheren olfaktorische Gewebe für Molekulare und immunhistochemische Analysen in Drosophila

Dieses Papier stellt eine Operationsmethode für sezieren Drosophila pupal Netzhaut zusammen mit Protokolle für die Verarbeitung von Gewebe für Immunohistochemistry, westlichen Analyse und RNA-Extraktion.

Dissektion der Drosophila Pupal Netzhaut Immunohistochemistry, westlichen Analyse und RNA-Isolation

Drosophila ist ein leistungsfähiges Modell, um die grundlegenden Mechanismen der Myogenese zu verstehen. Dieses Protokoll für die Dissektion und Präparation von Thorax-Hemisektionen ermöglicht die mikroskopische Analyse des indirekten Flugmuskels sowohl im Puppen- als auch im Erwachsenenstadium. Dieses Protokoll ermöglicht die konfokale Bildgebung der zellulären Morphologie, der Proteinlokalisierung, der Muskelstruktur und mehrerer anderer Aspekte der Myogenese.

Dissektion von Drosophila melanogaster Indirekte Flugmuskulatur für Mikroskopie-Ansätze

Lernen Sie die effiziente Präparation und Antikörperfärbung von Drosophila-Imaginalscheiben für Entwicklungsbiologie. Diese Methode minimiert Reagenzienverbrauch und ermöglicht präzise Proteinvisualisierung in Augen-, Antennen- und Flügelgeweben.

Kleinskalige Dissektion und Antikörperfärbung der Augen-, Antennen- und Flügel-Imaginalscheiben von Drosophila melanogaster

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