Name: Protokoll für Einzelzell-Dissoziation, RNA-Sequenzierung und Isolierung von Myoepithelzellen und Fibroblasten aus den gealterten Lacrimal- und Speicheldrüsen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-24T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Erfahren Sie eine optimierte Protokollmethode zur Einzelzell-Dissoziation gealterter Tränendrüsen für hochwertige RNA-Sequenzierung und Durchflusszytometrie. Diese Technik ermöglicht die Isolierung lebensfähiger Myoepithelzellen und Fibroblasten.

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<ol><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+aging-related+diseases%3A+from+molecular+mechanisms+to+interventions+and+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Aging and aging-related diseases: from molecular mechanisms to interventions and treatments.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 391(2022).</li>
<li>Zhang, X., Wang, L., Zheng, Y., Deng, L., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+dry+eye+disease+in+the+elderly%3A+A+protocol+of+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Prevalence of dry eye disease in the elderly: A protocol of systematic review and meta-analysis.</a> Medicine (Baltimore). 99 (37), e22234(2020).</li>
<li>Donthineni, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aqueous-deficient+dry+eye+disease%3A+Preferred+practice+pattern+guidelines+on+clinical+approach%2C+diagnosis%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Aqueous-deficient dry eye disease: Preferred practice pattern guidelines on clinical approach, diagnosis, and management.</a> Indian J Ophthalmol. 71 (4), 1332-1347 (2023).</li>
<li>Yuksel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+Affects+Lipid+Homeostasis+in+Lacrimal+Glands+by+Upregulating+Lipogenesis+and+Changing+Its+Specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Aging Affects Lipid Homeostasis in Lacrimal Glands by Upregulating Lipogenesis and Changing Its Specificity.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 66 (13), 1(2025).</li>
<li>Galletti, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+lymphoid+structures+in+the+aged+lacrimal+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ectopic lymphoid structures in the aged lacrimal glands.</a> Clin Immunol. 248, 109251(2023).</li>
<li>Delcroix, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+Gland+Epithelial+Cells+Shape+Immune+Responses+through+the+Modulation+of+Inflammasomes+and+Lipid+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal Gland Epithelial Cells Shape Immune Responses through the Modulation of Inflammasomes and Lipid Metabolism.</a> Int J Mol Sci. 24 (5), 4309(2023).</li>
<li>Mauduit, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+of+the+lacrimal+gland+features+macrophage+activity+and+epithelium+metabolism+as+key+alterations+during+chronic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics of the lacrimal gland features macrophage activity and epithelium metabolism as key alterations during chronic inflammation.</a> Front Immunol. 13, 1011125(2022).</li>
<li>Prasad, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+Independent+and+Combined+Effects+of+Hyperosmolarity+and+Inflammatory+Stress+on+Human+Corneal+Epithelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Assessing the Independent and Combined Effects of Hyperosmolarity and Inflammatory Stress on Human Corneal Epithelial Cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 66 (13), 47(2025).</li>
<li>Scholand, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+Parabiosis+Causes+Dacryoadenitis+in+Young+Lacrimal+Glands%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Heterochronic Parabiosis Causes Dacryoadenitis in Young Lacrimal Glands.</a> Int J Mol Sci. 24 (5), 4897(2023).</li>
<li>Molla Desta, G., Birhanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%3A+transforming+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Pol%22%5BJournal%5D)">Advancements in single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics: transforming biomedical research.</a> Acta Biochim Pol. 72, 13922(2025).</li>
<li>Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+preparation+of+single-cell+suspensions+from+mouse+lung+tissue+using+the+gentleMACS+Dissociator%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Standardized preparation of single-cell suspensions from mouse lung tissue using the gentleMACS Dissociator.</a> J Vis Exp. (29), e1266(2009).</li>
<li>Jankelow, A., Almeida-Porada, G., Atala, A., Sawyer, S. W., Porada, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advancements+in+tissue+dissociation+techniques+for+cell+manufacturing+single-cell+analysis+and+downstream+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Recent advancements in tissue dissociation techniques for cell manufacturing single-cell analysis and downstream processing.</a> Stem Cells Transl Med. 14 (11), szaf055(2025).</li>
<li>Duong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid+Human+Lung+Tissue+Dissociation+Protocol+Maximizing+Cell+Yield+and+Minimizing+Cellular+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A Rapid Human Lung Tissue Dissociation Protocol Maximizing Cell Yield and Minimizing Cellular Stress.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 71 (5), 509-518 (2024).</li>
<li>Koenitzer, J. R., Wu, H., Atkinson, J. J., Brody, S. L., Humphreys, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Nucleus+RNA-Sequencing+Profiling+of+Mouse+Lung%3A+Reduced+Dissociation+Bias+and+Improved+Rare+Cell-Type+Detection+Compared+with+Single-Cell+RNA+Sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Single-Nucleus RNA-Sequencing Profiling of Mouse Lung: Reduced Dissociation Bias and Improved Rare Cell-Type Detection Compared with Single-Cell RNA Sequencing.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 63 (6), 739-747 (2020).</li>
<li>Ikeuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+murine+oral+mucosal+tissues+for+single+cell+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Dissociation of murine oral mucosal tissues for single cell applications.</a> J Immunol Methods. 525, 113605(2024).</li>
<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Kahwaji, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKahwaji%2C+N+%22Universal+Precautions%22">Universal Precautions</a>. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2024).</li>
<li>Delcroix, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+First+Transcriptomic+Atlas+of+the+Adult+Lacrimal+Gland+Reveals+Epithelial+Complexity+and+Identifies+Novel+Progenitor+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The First Transcriptomic Atlas of the Adult Lacrimal Gland Reveals Epithelial Complexity and Identifies Novel Progenitor Cells in Mice.</a> Cells. 12 (10), 1435(2023).</li>
<li>Mauduit, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closer+look+into+the+cellular+and+molecular+biology+of+myoepithelial+cells+across+various+exocrine+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A closer look into the cellular and molecular biology of myoepithelial cells across various exocrine glands.</a> Ocul Surf. 31, 63-80 (2024).</li>
<li>Zyrianova, T., Basova, L. V., Makarenkova, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Myoepithelial+Cells+from+Adult+Murine+Lacrimal+and+Submandibular+Glands%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of Myoepithelial Cells from Adult Murine Lacrimal and Submandibular Glands.</a> J Vis Exp. (148), e59602(2019).</li>
<li>Montanari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated-Mechanical+Procedure+Compared+to+Gentle+Enzymatic+Tissue+Dissociation+in+Cell+Function+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated-Mechanical Procedure Compared to Gentle Enzymatic Tissue Dissociation in Cell Function Studies.</a> Biomolecules. 12 (5), 701(2022).</li>
<li>Liang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+skeletal+muscle+for+flow+cytometric+characterization+of+immune+cells+in+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Dissociation of skeletal muscle for flow cytometric characterization of immune cells in macaques.</a> J Immunol Methods. 425, 69-78 (2015).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+RNA-seq+artifacts%3A+a+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell RNA-seq artifacts: a molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+Practices+for+Preparing+a+Single+Cell+Suspension+from+Solid+Tissues+for+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Best Practices for Preparing a Single Cell Suspension from Solid Tissues for Flow Cytometry.</a> Cytometry A. 95 (2), 219-226 (2019).</li>
<li>Volovitz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-aggressive%2C+highly+efficient%2C+enzymatic+method+for+dissociation+of+human+brain-tumors+and+brain-tissues+to+viable+single-cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A non-aggressive, highly efficient, enzymatic method for dissociation of human brain-tumors and brain-tissues to viable single-cells.</a> BMC Neurosci. 17 (1), 30(2016).</li>
<li>Lai, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+methods+of+detaching+adherent+cells+and+their+effects+on+the+cell+surface+expression+of+Fas+receptor+and+Fas+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of Fas receptor and Fas ligand.</a> Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><stark>Material</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4919</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (1&nbsp; M-Lösung)</td><td>BioVision</td><td>B1010-100</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Kit zur Entfernung toter Zellen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit zur Entfernung toter Zellen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>C756V28</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-100MG</td><td></td></tr><tr><td>DPBS&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum, ultraniedriges IgG</td><td>Gibco</td><td># 16250078</td><td></td></tr><tr><td>Hanks ausgewogene Salzlösung (HBSS)</td><td>Corning (Thermo Fisher Scientific)</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1&nbsp; M-Lösung)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran-Lösung</td><td>Covertus</td><td># 11695067772</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (30 & micro; m)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-098-458</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (70 & Micro; m)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-916</td><td></td></tr><tr><td>Mittel/F12 (DMEM/F12)</td><td>Millipore</td><td>DF-042-B</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 1M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028-100ML</td><td></td></tr><tr><td>MS-Kolumnen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (5M Aktie)</td><td>Invitrogen&trade;</td><td>AM9759</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) Tabletten</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Rote Blutkörperchen-Lyselösung (10 & mal;)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blaue Lösung, 0,4 %</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-reines EDTA (0,5 M, pH 8,0)</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td><stark>Antikörper</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD140a (PDGFRA) monoklonaler Antikörper (APA5), APC-eFluor&trade; 780, Rat / IgG2a, Kappa</td><td>eBioscience</td><td>47-1401-82; RRID:AB_2784706</td><td></td></tr><tr><td>FcBlock (CD16/CD32 Fc-Blocker)</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>553141; RRID:AB_394656</td><td></td></tr><tr><td>FxCycle&trade; Veilchenfleck</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F10347</td><td></td></tr><tr><td>Ratte CD326 (EpCAM)-APC monoklonaler Antikörper (G8.8), Ratte IgG2a, kappa</td><td>eBioscience</td><td>17-579182; RRID:AB_2716944</td><td></td></tr><tr><td><stark>Mäuse</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acta2GFP&nbsp; </td><td>Ein freundliches Geschenk von Dr. Ivo Kalajzic</td><td>PMID: 18571490</td><td></td></tr><tr><td>PdgfraEGFP&nbsp; - B6.129S4-Pdgfratm11(EGFP)Sor/J</td><td>Das Jackson-Labor</td><td>RRID:IMSR_JAX:007669</td><td></td></tr><tr><td><stark>Ausrüstung</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen&trade; &nbsp; Gräfin & Handel; 3 Automatisierter Zellenzähler</td><td>Fisher Scientific</td><td>A49862; RRID:SCR_026963</td><td></td></tr></tbody></table>

protokoll für einzelzell-dissoziation, rna-sequenzierung und isolierung von myoepithelzellen und fibroblasten aus den gealterten lacrimal- und speicheldrüsen

Protocol for Single-Cell Dissociation, RNA Sequencing, and Isolation of Myoepithelial Cells and Fibroblasts from the Aged Lacrimal and Salivary Glands

Protokoll für Einzelzell-Dissoziation, RNA-Sequenzierung und Isolierung von Myoepithelzellen und Fibroblasten aus den gealterten Lacrimal- und Speicheldrüsen

Aging of the lacrimal gland (LG) is associated with reduced tear secretion and chronic inflammation, contributing to dry eye disease. Age-related LG ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Organspezifische sensorische Neuronen sind schwer zu identifizieren. Fast Blue Tracing wird verwendet, um Nodose-Neuronen zu identifizieren, die die Atemwege für die Zellsortierung innervieren. Sortierte Nodose-Neuronen werden verwendet, um hochwertige Ribonukleinsäure (RNA) für die Sequenzierung zu extrahieren. Mit Hilfe dieses Protokolls wird die Genexpression von atemwegsspezifischen Neuronen bestimmt.

Eine Methode zum Ziel und Isolieren Airway-innervating sensorischen Neuronen bei Mäusen

Das Ziel dieses Protokolls ist, hoher Integrität RNA-Proben von enterischen Ganglien isoliert von fixierten, frisch reseziert menschlichen Darmgewebe mit Laser Capture Microdissection (LCM) zu erhalten. Dieses Protokoll beinhaltet Probenvorbereitung Blitz eingefroren menschlichen Darmgewebe, Kryoschneiden, ethanolische Färbung und Dehydrierung, LCM, und RNA-Extraktion.

Optimierung der Capture-Laser Mikrodissektion für die Isolierung der enterischen Ganglien aus menschlichem Gewebe Tiefkühlfrische

Die Tränendrüse (LG) hat zwei Zelltypen, die α-glatte Muskelaktin (αSMA) ausdrücken: Myoepithelialzellen (MECs) und Pericytes. MECs sind ektodermaler Herkunft, der in vielen Drüsengeweben zu finden ist, während die Periicyten vaskuläre glatte Muskelzellen endodermalen Ursprungs sind. Dieses Protokoll isoliert MECs und Periicytes von murinen LGs.

Isolierung von myepithelialen Zellen aus der Urmorine, Lacrimal und Submandibular Drüsen

Wir präsentieren eine Methode zur Isolierung und Kultivierung primärer menschlicher Speicheldrüsen-abgeleiteten Epithelzellen. Diese Zellen zeigen Genexpressionsmuster, die mit ihrem Epithel-Ursprung übereinstimmen und können als Salisphären auf Kellermembranmatrizen aus Engelbreth-Holm-Schwarm-Tumorzellen oder als Monolayer auf behandelten Kulturgerichten angebaut werden.

Isolierung von Speicheldrüsenepithelzellen aus menschlichen Speicheldrüsen für In-Vitro-Wachstum als Speicheldrüsen oder Monolayer

Dieses Protokoll beschreibt lasercapture microdissection for the isolation of knorpel and bone from fresh frozen sections of the mouse embryo. Knorpel und Knochen können durch Kresylviolettfärbung schnell visualisiert und präzise gesammelt werden, um hochwertige RNA für die transkriptomische Analyse zu liefern.

Laser Capture Mikrodissektion von Maus embryonalen Knorpel und Knochen für Die Genexpressionsanalyse

Die Gewinnung einer reinen Population von Fibroblasten ist entscheidend für die Untersuchung ihrer Rolle bei der Wundreparatur und Fibrose. Beschrieben ist eine detaillierte Methode, um Fibroblasten und Myofibroblasten von unverletzten und verletzten Mausherzen zu isolieren, gefolgt von der Charakterisierung ihrer Reinheit und Funktionalität durch Immunfluoreszenz, RTPCR, Fluoreszenz-unterstützte Zellsortierung und Kollagen-Gel-Kontraktion.

Isolierung und Charakterisierung von adulten Herz-Fibroblasten und Myofibroblasten

Das aktuelle Protokoll stellt eine schnelle, effiziente und schonende Methode zur Isolierung einzelner Zellen dar, die für die Einzelzell-RNA-seq-Analyse aus einem kontinuierlich wachsenden Mausschneidezahn, Mausmollaren und menschlichen Zähnen geeignet sind.

Schnelle Isolierung einzelner Zellen aus Maus- und menschlichen Zähnen

Eine Methode zur Mikrodissektion des Eileiters der Maus, die die Sammlung der einzelnen Segmente unter Beibehaltung der RNA-Integrität ermöglicht, wird vorgestellt. Darüber hinaus wird ein nicht-enzymatisches oviduktales Zelldissoziationsverfahren beschrieben. Die Methoden eignen sich für die anschließende Gen- und Proteinanalyse der funktionell unterschiedlichen Eileitersegmente und dissoziierten Eileiterzellen.

Mikrodissektion und Dissoziation des Murinen Eileiters: Identifizierung einzelner Segmente und Einzelzellisolierung

Dieser Artikel bietet ein optimiertes Protokoll für die Dissektion und Dissoziation von murinem Geruchsepithel zum Zwecke der Einzelkern-RNA-Sequenzierung.

Schnelle Dissektion und Dissoziation des olfaktorischen Epithels der Maus für Einzelkernsuspensionen

Dieses Protokoll beschreibt die Trennung des Epithels der Maus-Augenlinse und der Volumenmasse der Faserzelle, gefolgt von der RNA-Isolierung und der qPCR-Analyse. Diese Methode ermöglicht die Trennung von Linsenzellkompartimenten für eine detailliertere Analyse des Transkriptoms und der biologischen Prozesse in Epithelzellen im Vergleich zu differenzierten Faserzellen.

RNA-Isolierung aus dem Epithel der Augenlinse der Maus und den Massenmassen von Faserzellen

Erfahren Sie eine optimierte Protokollmethode zur Einzelzell-Dissoziation gealterter Tränendrüsen für hochwertige RNA-Sequenzierung und Durchflusszytometrie. Diese Technik ermöglicht die Isolierung lebensfähiger Myoepithelzellen und Fibroblasten.

Protokoll für Einzelzell-Dissoziation, RNA-Sequenzierung und Isolierung von Myoepithelzellen und Fibroblasten aus den gealterten Lacrimal- und Speicheldrüsen (Video) | JoVE Journal

Protokoll für Einzelzell-Dissoziation, RNA-Sequenzierung und Isolierung von Myoepithelzellen und Fibroblasten aus den gealterten Lacrimal- und Speicheldrüsen

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