Name: Neuprogrammierung induzierter pluripotenter Stammzelllinien aus eingefrorenen Buffy-Coat-Proben (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie eingefrorene Buffy-Coat-Proben in induzierte pluripotente Stammzellen reprogrammieren. Dieses Protokoll nutzt Sendai-Virus-Transduktion mit Yamanaka-Faktoren und morphologische Kontrollpunkte für maximale Erfolgsraten bei begrenzten Patientenproben.

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<ol><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>10 cm Standard-Gewebekulturschalen</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>12 Brunnenplatten</td><td>Falcon</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>15-mL konische Röhren</td><td>Fisher</td><td>7200886</td><td></td></tr><tr><td>24 Brunnenplatten</td><td>Corning</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>4%-Paraformaldehydlösung</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>6 Brunnenplatten</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012927</td><td></td></tr><tr><td>accuSpin1R</td><td>Fisher Scientific</td><td>75003449</td><td></td></tr><tr><td>Activin A</td><td>Biotechne</td><td>338-n. Chr.</td><td></td></tr><tr><td>AF488-Esel & Alpha; Ziege</td><td>Invitrogen</td><td>A11055</td><td></td></tr><tr><td>AF555-Esel & Alpha; RBT</td><td>Invitrogen</td><td>A31572</td><td></td></tr><tr><td>AF647-Esel & Alpha; m</td><td>Invitrogen</td><td>A31571</td><td></td></tr><tr><td>AF647-Esel & Alpha; RBT</td><td>Invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotikum-Antimykotikum (100X)</td><td>Fisher</td><td>15 240 096&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Basix Polystyrol-Serologische Pipette</td><td>Fisher</td><td>14955233 14955234 14955235 14955236</td><td></td></tr><tr><td>BD Tuberkulinspritzen</td><td>Fisher</td><td>14-826-87</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutaine Glass Mononukleare Zellvorbereitung (CPT) Röhren</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-685-125</td><td>PBMC Isolierende Blutabnahmeröhrchen</td></tr><tr><td>BD&nbsp; Vakuum-Plastik-Blutabnahmeröhrchen mit K2EDTA: Hämogard-Verschluss</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-657-32</td><td>Antikoagulente beschichtete Blutsammelröhrchen</td></tr><tr><td>B-Mercaptoethanol</td><td>Fisher</td><td>21 985 023&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Rindergelatine</td><td>Sigma</td><td>G1393</td><td></td></tr><tr><td>Brachyury-T-Antikörper polyklonale Ziege IgG</td><td>R& D</td><td>AF2085</td><td></td></tr><tr><td>CellDrop BF</td><td>Denovix</td><td>CellDrop BF</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge 5702</td><td>Eppendorf</td><td>EP022628102-1EA</td><td></td></tr><tr><td>chemisch definiertes Lipidkonzentrat</td><td>Fisher</td><td>NC9022744</td><td></td></tr><tr><td>Chir 99021&nbsp;</td><td>R& D</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Inkubator</td><td>Sanyo</td><td>MCO-20AIC</td><td></td></tr><tr><td>Kryokonservierungsspeichersystem</td><td>Maßgeschneiderte biogene Systeme</td><td>V-1500AB</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor CS10</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>100-1061</td><td>alternatives Gefriermedium</td></tr><tr><td>CytoTune-iPS 2.0 Sendai-Umprogrammierkit</td><td>Fisher</td><td>A16517</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma</td><td>D2915</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Fisher</td><td>11965118</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Fisher</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher</td><td>BP231-1</td><td></td></tr><tr><td>DPBS 1X OHNE CA MG&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>MT21031CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher</td><td>AM9262</td><td></td></tr><tr><td>Erythropoeitin (EPO)</td><td>Bio-Techne</td><td>287-TC-500</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 Medium (E6)</td><td>Fisher</td><td>A1516401</td><td>Differenzierungsbasis&nbsp;</td></tr><tr><td>Essential 8 Medium (E8)</td><td>Fisher</td><td>A1517001</td><td>hPSC Basalmedium</td></tr><tr><td>EVOS FL-Mikroskop</td><td>Thermo</td><td>AMF4300</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum</td><td>VWR</td><td>45000-734</td><td></td></tr><tr><td>FGF basic (FGF2)</td><td>Biotechne</td><td>233-FB/CF&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Geltrex</td><td>Fisher</td><td>A1413202</td><td>Matrizenbeschichtung</td></tr><tr><td>Gibco MEM nicht-essentielle Aminosäurelösung (100X)</td><td>Fisher</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Fisher</td><td>35050061</td><td>L-Glutamin-Substitut&nbsp;</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>7980</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque 1077</td><td>Sigma</td><td>10771</td><td>Dichtegradientenlösung 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Holotransferrin</td><td>Sigma</td><td>T0665</td><td></td></tr><tr><td>Menschlicher Stammzellfaktor (SCF)</td><td>Peprotech</td><td>300-07-100UG</td><td></td></tr><tr><td>Insulinähnlicher Wachstumsfaktor 1 (IGF1)</td><td>Peprotech</td><td>100-11-100UG</td><td></td></tr><tr><td>Interleukin-3 (IL-3)</td><td>Peprotech</td><td>200-03-2UG</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 210 Wasserbad</td><td>Fisher Scientific</td><td>210</td><td></td></tr><tr><td>Knockout-Serum-Ersatz (KSR)</td><td>Fisher</td><td>10828028</td><td>FBS kostenloses Supplement&nbsp;</td></tr><tr><td>L-Ascorbinsäure</td><td>Sigma</td><td>A4544-100G</td><td></td></tr><tr><td>LDN193189</td><td>Stemgent</td><td>04-0074</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Fisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>7801</td><td>Dichtegradientenlösung 2</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>CB-40234</td><td>Matrizenbeschichtung</td></tr><tr><td>Mausembryonale Fibroblasten</td><td>Fisher</td><td>A34964&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nanog polyklonale Ziege IgG</td><td>R& D</td><td>AF1997-SP</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Biobanking und Zellkultur-Kryogene Röhren</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-163N</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Fisher</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Purified anti-Pax-6 Antikörper polyklonales IgG für Kaninchen</td><td>Biolegende</td><td>901301</td><td></td></tr><tr><td>QBSF-60 Serumfreies Medium</td><td>Qualitätsbiologisch</td><td>160-204-101</td><td>EM-Basis</td></tr><tr><td>Erholungszellkultur-Gefriermedium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12648010</td><td>alternatives Gefriermedium</td></tr><tr><td>rhVitronectin (VTN)</td><td>Fisher</td><td>A31804</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Mittel</td><td>Fisher</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SB431542</td><td>R& D</td><td>1614</td><td></td></tr><tr><td>Sendai-Virus HN Monoklonaler Antikörper Maus IgG2a</td><td>Invitrogen</td><td>14649482</td><td></td></tr><tr><td>Natriumselenit</td><td>Sigma</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Sox17-Antikörper polyklonale Ziege IgG</td><td>R& D</td><td>af1924</td><td></td></tr><tr><td>StemSpan Erythroid Expansion Supplement</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>2692</td><td>Alternatives kommerzielles Erweiterungsmedium Ergänzungsmaterial</td></tr><tr><td>StemSpan SFEM II-Medium</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>9605</td><td>Alternatives kommerzielles Expansionsmedium</td></tr><tr><td>Ultra-Niedrigtemperatur-Gefrierschrank</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>TSX60086A</td><td></td></tr><tr><td>Universelle Pipettenspitzen – gefiltert</td><td>VWR</td><td>76322-132 76322-134 76322-150 76322-156</td><td></td></tr><tr><td>XAV939</td><td>Biotechne</td><td>3748/10</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 Dihydrochlorid</td><td>BioGems</td><td>1293823</td><td></td></tr></tbody></table>

neuprogrammierung induzierter pluripotenter stammzelllinien aus eingefrorenen buffy-coat-proben

Reprogramming Induced Pluripotent Stem Cell Lines from Frozen Buffy Coat Samples

Neuprogrammierung induzierter pluripotenter Stammzelllinien aus eingefrorenen Buffy-Coat-Proben

Human pluripotent stem cells (hPSCs) are a valuable tool for disease modeling. Further stem cells can be reprogrammed from adult somatic cells, called ...

reprogramming-induced-pluripotent-stem-cell-lines-from-frozen-buffy

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die Stemgent Dox Inducible Maus TF Lentivirus Set kann embryonalen Maus-Fibroblasten (MEFs), um induzierte pluripotente Stammzellen (iPS-Zellen) neu zu programmieren. Hier haben wir das Protokoll für DOX-induzierbare Expression von Maus Umprogrammierung Transkriptionsfaktoren Oct4 zu demonstrieren, Sox2, Klf4 und c-Myc iPS Kolonien, die ausdrückliche gemeinsamen mES Pluripotenz Marker zu generieren.

Erzeugung von induzierten pluripotenten Stammzellen durch Reprogrammierung embryonalen Maus-Fibroblasten mit einem Vier Transcription Factor, induzierbare Doxycycline Lentivirale Transduktionssystems

Wir präsentieren ein Protokoll für die effiziente Reprogrammierung von menschlichen Körperzellen in die menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (hiPSC) mit retroviralen Vektoren kodieren Oct3 / 4, Sox2, Klf4 und c-Myc (OSKM) und Identifizierung von richtig umprogrammiert hiPSC durch Live-Färbung mit Tra- 1-81 Antikörper ist.

Selektieren und Isolieren Colonies of Human induzierten pluripotenten Stammzellen aus adulten Fibroblasten Umprogrammierte

Hier zeigen wir, ein einfaches und effektives Protokoll für die Herstellung von menschlichen IPSCs 3-4 ml peripheres Blut unter Verwendung eines einzigen lentiviralen Vektors Umprogrammierung. Reprogrammierung von leicht verfügbaren Blutkörperchen verspricht die Nutzung von iPS-Technologie, indem sie Zugang zu einem breiteren Forschungsgemeinschaft beschleunigen.

Generation of Human induzierten pluripotenten Stammzellen aus dem peripheren Blut mit dem STEMCCA Lentivirusvektor

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Erzeugung von menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen aus dem peripheren Blut mit Hilfe eines Episoms basierend Neuprogrammierung Strategie und Histon-Deacetylase-Inhibitoren.

Effiziente iPS Zellgeneration aus Blut Mit Episomen und HDAC-Inhibitoren

Pluripotenten Stammzellen (iPS) Quelle eines patientenspezifischen Geweben für die klinische Anwendung und Grundlagenforschung. Hier präsentieren wir ein detailliertes Protokoll für die menschliche periphere mononukleäre Blutzellen (PBMNC) von gefrorenen Buffy Coats in virale freien iPSCs mit nicht-integrierenden episomalen Plasmiden erhalten neu zu programmieren.

Erzeugung von induzierten pluripotenten Stammzellen aus Gefrorene Buffy Coats mit Non-Integration episomalen Plasmiden

Wir schlagen ein Protokoll zur Reprogrammierung von mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) in induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) vor. Durch das Plattieren der transduzierten Blutzellen auf matrixbeschichtete Platten mit Zentrifugation werden iPS-Zellen erfolgreich aus schwimmenden Zellen induziert. Diese Technik schlägt ein einfaches und effektives Reprogrammierungsprotokoll für Zellen wie PBMCs und CBMCs vor.

Induzierte pluripotente Stammzellen Erzeugung von Blutzellen mit Sendai-Virus und Zentrifugation

Dieses Protokoll beschreibt eine detaillierte Methode zur effizienten Erzeugung integrationsfreier iPSCs aus menschlichen adulten peripheren Blutzellen. Durch die Verwendung von vier oriP/EBNA-basierten episomalen Vektoren zur Expression der Reprogrammierungsfaktoren KLF4, MYC, BCL-XL oder OCT4 und SOX2 können Tausende von iPS-Kolonien aus 1 ml peripherem Blut gewonnen werden.

Die Erzeugung von Integration freien induzierte pluripotente Stammzellen aus menschlichen peripheren einkernigen Blutzellen Mit Episomale Vektoren

Dieses Protokoll beschreibt die Reprogrammierung von primären amniotische Flüssigkeit und Membran mesenchymalen Stammzellen in induzierte pluripotente Stammzellen unter Verwendung eines nicht-Integration von episomal Ansatzes in vollem Umfang chemisch definierten Bedingungen. Verfahren der Gewinnung, Kultur, Neuprogrammierung und Charakterisierung der daraus resultierenden induzierten pluripotenten Stammzellen durch strenge Methoden werden detailliert beschrieben.

Reprogrammierung primäre Fruchtwasser und Membrane Zellen zur Pluripotenz in Xeno-freien Bedingungen

Hier beschreiben wir eine klinisch relevante, hohem Wirkungsgrad, Feeder-free Methode, um menschliche primäre Fibroblasten in induzierte pluripotente Stammzellen mit modifizierten mRNAs codieren Neuprogrammierung Faktoren neu zu programmieren und Reife MicroRNA-367/302 imitiert. Ebenfalls enthalten sind Methoden zur Beurteilung der Neuprogrammierung Effizienz klonalen iPSC Kolonien zu erweitern, und Ausdruck der Pluripotenz Markierung TRA-1-60 zu bestätigen.

RNA-basierten Reprogrammierung von menschlichen primäre Fibroblasten in induzierte pluripotente Stammzellen

Die Zellumprogrammierung erfordert die Einführung von Schlüsselgenen, die den pluripotenten Zellzustand regulieren und aufrechterhalten. Das beschriebene Protokoll ermöglicht die Bildung induzierter pluripotenter Stammzellen (iPSCs) aus menschlichen dermalen Fibroblasten ohne virale/integrierende Methoden, aber unter Verwendung nicht modifizierter RNAs (NM-RNAs) in Kombination mit Immunumgehungsfaktoren, die die zellulären Abwehrmechanismen reduzieren.

Isolierung von adulten menschlichen Dermal-Fibroblasten aus der Bauchhaut und Generierung induzierter pluripotenter Stammzellen mit einer nicht-integrierenden Methode

Erfahren Sie, wie Sie eingefrorene Buffy-Coat-Proben in induzierte pluripotente Stammzellen reprogrammieren. Dieses Protokoll nutzt Sendai-Virus-Transduktion mit Yamanaka-Faktoren und morphologische Kontrollpunkte für maximale Erfolgsraten bei begrenzten Patientenproben.

Neuprogrammierung induzierter pluripotenter Stammzelllinien aus eingefrorenen Buffy-Coat-Proben

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