Mikrovaskuläre Perfusion überwacht durch Laser-Speckle-Kontrastbildgebung während der Nierenischämie-Reperfusionsverletzung bei Mäusen

In dieser Studie verwenden wir die Laser-Speckle-Kontrastbildsysteme, um die Mikroperfusionen im Guinea während der Ischämie-Reperfusion zu überwachen. Diese Technologie kann in Forschungsarbeiten im Zusammenhang mit Veränderungen des Blutflusses angewandt werden, wie Transplantationen von festen Organen, Wirksamkeit von Medikamenten und Isämiestudien. Beginnen Sie mit der Desinfektion des OP-Tisch vor jedem Eingriff.

Ordne sterilisierte Instrumente, Wattestäbchen, Mullbinde, vorverdünnte Anästhetika und alle anderen benötigten Gegenstände ordentlich auf dem Tisch an. Verabreichen Sie Meloxicam mit 0,2 Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht durch subkutane Injektion 30 Minuten vor der Operation, um die Schmerzen zu lindern. Gieße sterilisierte Kochsalzlösung in einen sauberen Behälter.

Mit einer Schere schneiden Sie eine geeignete Öffnung in der Mitte eines Mullstücks. Lege eine betäubte Maus auf das Heizkissen und befestige sie mit Klebeband. Tragen Sie Enthaarungscreme auf, um Bauchhaare zu entfernen.

Mit dem Heizkissen halten Sie die rektale Temperatur während der gesamten Operation bei 37 Grad Celsius. Desinfizieren Sie mit einem Wattestäbchen den Operationsbereich zuerst mit 75 % Alkohol, dann mit Iodophor, und wiederholen Sie das Verfahren noch zweimal. Dann benutze eine Pinzette, um den Mauszeh zu kneifen, um das Fehlen einer Schmerzreaktion zu bestätigen.

Mit einer Schere machen Sie einen vertikalen Schnitt in der Mitte des Bauches. Trennen Sie vorsichtig die Haut vom Peritoneum und schneiden Sie dann das Peritoneum ein, um in die Bauchhöhle einzutreten. Setzen Sie einen Retraktor an, um die Sicht zu verbessern.

Decken Sie das Operationsfeld mit Mull ab und richten Sie die Öffnung auf die Bauchhöhle aus. Befeuchte die Mullbinde mit Kochsalzlösung. Mit einem Wattestäbchen den Darm vorsichtig zur Seite bewegen, um die rechte Niere und das umliegende Gewebe freizulegen.

Falten Sie die Mullbinde, um den Darm zu bedecken, und befeuchten Sie sie dann mit Kochsalzlösung, um ein Austrocknen zu verhindern. Als Nächstes verwenden Sie eine schräg gebogene Pinzette, um den rechten Harnleiter anzuheben. Führe zwei 6-0-Nahtfäden durch den Harnleiter und ligiere an zwei Positionen.

Mit einer Mikroskopschere schneiden Sie den Harnleiter zwischen den beiden Ligaturen. Dann verwenden Sie mit salzlösung befeuchtete Wattebällchen, die mit einer feinen Pinzette gehalten werden, um die Leber sanft nach oben zu drücken. Fixiere die Leber mit den Wattebäuschchen, um die Nieren und die rechten Gefäße freizulegen.

Als Nächstes verwenden Sie eine schräge Pinzette, um die perinephrischen Fettpolster stumpf zu trennen, bis die Nierenarterie und Vene vollständig freiliegen. Vorsichtig. Schieben Sie die Pinzette unter die Nierenarterie und Vene, um einen Kanal zu bilden, führen Sie eine 6-0 Seidennaht um beide Gefäße und verbinden Sie sie miteinander. Schneiden Sie die verstopfte Nierenarterie und Vene in der Nähe der Niere durch.

Entfernen Sie die Niere mit haftendem Gewebe. Dann entferne du den Wattebaul, mit dem die Leber gehalten wurde. Schalten Sie das Laser-Speckle-Kontrastbildsystem ein und starten Sie die dedizierte Software.

Klicken Sie auf das Originalbild und dann auf die Vorschau, um das rohe Operationsfeldbild anzuzeigen. Positioniere die Maus um. Stellen Sie die Vergrößerung der Kamera beim Betrachten des Originalbildes an, um eine klare Sicht auf die Zielniere zu erhalten.

Klicken Sie dann auf Simultananzeige, um die Echtzeit-Blutflussaufnahmen zu sehen. Stellen Sie die Vergrößerung auf 2,5X ein und wählen Sie die automatische Anpassung des Blutflusses. Dann sperren Sie die Blutflussparameter.

Stellen Sie die Aufnahme so ein, dass alle 5.000 Millisekunden ein Bild aufgenommen wird. Setzen Sie anschließend den Parameter der quadratischen Flächengröße auf 112 und positionieren Sie gleichmäßig fünf quadratische Bereiche auf dem Nierenbild. Klicken Sie auf Echtzeit-Bildregistrierung und Aufnahme, um mit der Blutflussmessung zu beginnen.

Nach der Aufzeichnung eines 30-minütigen Ausgangswerts wird das Fettgewebe um die linken Nierengefäße stumpf getrennt. Mit hämostatischer Pinzette wird eine Mikroklemme über die linke Nierenarterie und Vene in der Nähe des Hilums gelegt. Setzen Sie die Echtzeitüberwachung weitere 30 Minuten fort.

Lösen Sie die Mikroklemme, um die Reperfusion einzuleiten. Überwachung und Aufzeichnung der Echtzeit-Erholung des mikrovaskulären Blutflusses der Nieren. Nach mindestens 60 Minuten Überwachung der Reperfusion stoppen Sie die Aufzeichnung und schließen Sie den Bauchschnitt.

Geben Sie eine Milliliter Kochsalzlösung per intraperitonealer Injektion, um Dehydrierung zu verhindern. Leg die Maus auf das Heizkissen und Monitor, bis sie wieder zu Bewusstsein kommt und sich wieder aufrichtet. Während der ersten 30 Minuten wurde der mikrovaskuläre Blutfluss der Nierene zu Beginn allmählich stabil.

Vor der Ischämie wurde eine Heterogenität der Perfusionswerte zwischen verschiedenen Interessensregionen beobachtet. Nach dem Abklemmen der Nierenarterie und Vene sank der Blutfluss stark ab und die Nierenmikrozirkulation verfiel in einen Zustand ohne Perfusion. Nach dem Lösen der Klemme stieg der Blutfluss sofort auf einen Höhepunkt an, verringerte sich dann und erholte sich allmählich auf ein vergleichsweise stabiles Niveau.

Die mikrovaskuläre Perfusion während 60 Minuten Reperfusion war deutlich niedriger als vor der Ischämie. Wir können den Blutfluss der Nierenmikroperfusion über die Laser-Speckle-Kontrastbildgebung bestimmen. Damit wird der Prozess der Ischämie und die Reperfusion überprüft.

Um eine saubere Niere mit gutem Kontrast zu erhalten, müssen wir geduldig sein und Zeit darauf verwenden, die Niere von der umgebenden Ressource und dem Gewebe zu trennen. In Zukunft können zusätzliche Indikatoren der Pathophysiologie integriert werden, und diese Technologie kann genutzt werden, um die Wirkung von Medikamenten auf die Nierenischämie zu überwachen.