Name: Ein stromlinienförmiges Protokoll für Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie in Arabidopsis-Kernen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-08T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Erfahren Sie ein optimiertes Protokoll für Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie in Arabidopsis thaliana-Kernen. Diese Methode ermöglicht nanoskalige Visualisierung von Chromatinarchitektur und epigenetischer Regulation in Pflanzenzellen.

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	<li>Misteli, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+sequence:+cellular+organization+of+genome+function.">Beyond the sequence: cellular organization of genome function.</a> Cell. 128 (4), 787-800 (2007).</li><li>Rowley, M. J., Corces, V. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organizational+principles+of+3D+genome+architecture.">Organizational principles of 3D genome architecture.</a> Nat Rev Genet. 19 (12), 789-800 (2018).</li><li>Fransz, P., de Jong, J. H., Lysak, M., Castiglione, M. R., Schubert, I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interphase+chromosomes+in+Arabidopsis+are+organized+as+well+defined+chromocenters+from+which+euchromatin+loops+emanate.">Interphase chromosomes in Arabidopsis are organized as well defined chromocenters from which euchromatin loops emanate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (22), 14584-14589 (2002).</li><li>Tessadori, F., Chupeau, M. C., Chupeau, Y., Knip, M., Germann, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+dissociation+and+sequential+reassembly+of+pericentric+heterochromatin+in+dedifferentiated+Arabidopsis+cells.">Large-scale dissociation and sequential reassembly of pericentric heterochromatin in dedifferentiated Arabidopsis cells.</a> J Cell Sci. 120 (7), 1200-1208 (2007).</li><li>Caballero, L., Pasternak, T., Riyazuddin, R., P&#233;rez-P&#233;rez, J. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connecting+high-resolution+3D+chromatin+maps+with+cell+division+and+cell+differentiation+at+the+root+apical+meristem.">Connecting high-resolution 3D chromatin maps with cell division and cell differentiation at the root apical meristem.</a> Plant Cell Rep. 43 (10), 232 (2024).</li><li>Pavlova, P., van Zanten, M., Snoek, B. L., de Jong, H., Fransz, P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2D+morphometric+analysis+of+Arabidopsis+thaliana+nuclei+reveals+characteristic+profiles+of+different+cell+types+and+accessions.">2D morphometric analysis of Arabidopsis thaliana nuclei reveals characteristic profiles of different cell types and accessions.</a> Chromosome Res. 30 (1), 5-24 (2022).</li><li>Shao, L., Kner, P., Rego, E. H., Gustafsson, M. G. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+3D+microscopy+of+live+whole+cells+using+structured+illumination.">Super-resolution 3D microscopy of live whole cells using structured illumination.</a> Nat Methods. 8 (12), 1044-1046 (2011).</li><li>Gustafsson, M. G. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+structured-illumination+microscopy:+Wide-field+fluorescence+imaging+with+theoretically+unlimited+resolution.">Nonlinear structured-illumination microscopy: Wide-field fluorescence imaging with theoretically unlimited resolution.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (37), 13081-13086 (2005).</li><li>Hell, S. W., Wichmann, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+the+diffraction+resolution+limit+by+stimulated+emission:+stimulated-emission-depletion+fluorescence+microscopy.">Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated-emission-depletion fluorescence microscopy.</a> Opt Lett, OL. 19 (11), 780-782 (1994).</li><li>Klar, T. A., Hell, S. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subdiffraction+resolution+in+far-field+fluorescence+microscopy.">Subdiffraction resolution in far-field fluorescence microscopy.</a> Opt Lett, OL. 24 (14), 954-956 (1999).</li><li>Hugelier, S., Colosi, P. L., Lakadamyali, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Single-Molecule+Localization+Microscopy.">Quantitative Single-Molecule Localization Microscopy.</a> Annu Rev Biophys. 52, 139-160 (2023).</li><li>Schermelleh, L., Ferrand, A., Huser, T., Eggeling, C., Sauer, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+microscopy+demystified.">Super-resolution microscopy demystified.</a> Nat Cell Biol. 21 (1), 72-84 (2019).</li><li>Hess, S. T., Girirajan, T. P. K., Mason, M. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high+resolution+imaging+by+fluorescence+photoactivation+localization+microscopy.">Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy.</a> Biophys J. 91 (11), 4258-4272 (2006).</li><li>Heilemann, M., van de Linde, S., Sch&#252;ttpelz, M., Kasper, R., Seefeldt, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subdiffraction-resolution+fluorescence+imaging+with+conventional+fluorescent+probes.">Subdiffraction-resolution fluorescence imaging with conventional fluorescent probes.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 47 (33), 6172-6176 (2008).</li><li>Ricci, M. A., Manzo, C., Garc&#237;a-Parajo, M. F., Lakadamyali, M., Cosma, M. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+fibers+are+formed+by+heterogeneous+groups+of+nucleosomes+in+vivo.">Chromatin fibers are formed by heterogeneous groups of nucleosomes in vivo.</a> Cell. 160 (6), 1145-1158 (2015).</li><li>Xu, J., Ma, H., Jin, J., Uttam, S., Fu, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+imaging+of+higher-order+chromatin+structures+at+different+epigenomic+states+in+single+mammalian+cells.">Super-resolution imaging of higher-order chromatin structures at different epigenomic states in single mammalian cells.</a> Cell Rep. 24 (4), 873-882 (2018).</li><li>Nozaki, T., Imai, R., Tanbo, M., Nagashima, R., Tamura, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+organization+of+chromatin+domains+revealed+by+super-resolution+live-cell+imaging.">Dynamic organization of chromatin domains revealed by super-resolution live-cell imaging.</a> Molecular Cell. 67 (2), 282-293.e7 (2017).</li><li>Komis, G., &#352;amajov&#225;, O., Ove&#269;ka, M., &#352;amaj, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+microscopy+in+plant+cell+imaging.">Super-resolution microscopy in plant cell imaging.</a> Trends in Plant Science. 20 (12), 834-843 (2015).</li><li>Kracik-Dyer, E., Baroux, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+STED+Imaging+of+isolated+Arabidopsis+thaliana+nuclei.">3D STED Imaging of isolated Arabidopsis thaliana nuclei.</a> Methods Mol Biol. 2873, 263-280 (2025).</li><li>Gaifas, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+live+fluorescence+imaging+with+in+situ+cryoelectron+tomography+sheds+light+on+the+septation+process+in+Deinococcus+radiodurans.">Combining live fluorescence imaging with in situ cryoelectron tomography sheds light on the septation process in Deinococcus radiodurans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 122 (19), e2425047122 (2025).</li><li>de Jong, I. G., Beilharz, K., Kuipers, O. P., Veening, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Cell+Imaging+of+Bacillus+subtilis+and+Streptococcus+pneumoniae+using+Automated+time-lapse+microscopy.">Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated time-lapse microscopy.</a> J Vis Exp. (53), e3145 (2011).</li><li>Vauclare, P., Wulffel&#233;, J., Lacroix, F., Servant, P., Canfalonieri, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress-induced+nucleoid+remodeling+in+Deinococcus+radiodurans+is+associated+with+major+changes+in+Heat+Unstable+(HU)+protein+dynamics.">Stress-induced nucleoid remodeling in Deinococcus radiodurans is associated with major changes in Heat Unstable (HU) protein dynamics.</a> Nucleic Acids Res. 52 (11), 6406-6423 (2024).</li><li>Schubert, V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+microscopy+&#8211;+Applications+in+plant+cell+research.">Super-resolution microscopy &#8211; Applications in plant cell research.</a> Front Plant Sci. 8, 531 (2017).</li><li>Carles, C. C., Ha, C. M., Jun, J. H., Fiume, E., Fletcher, J. C., Hennig, L., K&#246;hler, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+Shoot+Apical+Meristem+Development.">Analyzing Shoot Apical Meristem Development.</a> Plant Developmental Biology: Methods and Protocols. , 105-129 (2010).</li><li>Chincinska, I. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+infiltration+in+plant+science:+old+method,+new+possibilities.">Leaf infiltration in plant science: old method, new possibilities.</a> Plant Methods. 17 (1), 83 (2021).</li><li>Tse-Kang, S. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+immunity+in+C.+elegans+is+activated+by+pathogen+effector-triggered+aggregation+of+the+guard+protein+TIR-1+on+lysosome-related+organelles.">Intestinal immunity in C. elegans is activated by pathogen effector-triggered aggregation of the guard protein TIR-1 on lysosome-related organelles.</a> Immunity. 57 (10), 2280-2295.e6 (2024).</li><li>Lim, D., Ford, T. N., Chu, K. K., Mertz, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optically+sectioned+in+vivo+imaging+with+speckle+illumination+HiLo+microscopy.">Optically sectioned in vivo imaging with speckle illumination HiLo microscopy.</a> J Biomed Opt. 16 (1), 016014 (2011).</li><li>Culley, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+mapping+and+minimization+of+super-resolution+optical+imaging+artifacts.">Quantitative mapping and minimization of super-resolution optical imaging artifacts.</a> Nat Methods. 15 (4), 263-266 (2018).</li><li>Xue, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+amino+acid+mutations+in+histone+H3.3+illuminate+the+functional+significance+of+H3K4+methylation+in+plants.">Single amino acid mutations in histone H3.3 illuminate the functional significance of H3K4 methylation in plants.</a> Nat Commun. 16 (1), 4408 (2025).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BMC Bioinformatics. 18, 529 (2017).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Ovesn&#253;, M., K&#345;&#237;&#382;ek, P., Borkovec, J., &#352;vindrych, Z., Hagen, G. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ThunderSTORM:+a+comprehensive+ImageJ+plugin+for+PALM+and+STORM+data+analysis+and+super-resolution+imaging.">ThunderSTORM: a comprehensive ImageJ plugin for PALM and STORM data analysis and super-resolution imaging.</a> Bioinformatics. 30 (16), 2389-2390 (2014).</li><li>Thompson, R. E., Larson, D. R., Webb, W. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+nanometer+localization+analysis+for+individual+fluorescent+probes.">Precise nanometer localization analysis for individual fluorescent probes.</a> Biophys J. 82 (5), 2775-2783 (2002).</li><li>Van Heel, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similarity+measures+between+images.">Similarity measures between images.</a> Ultramicroscopy. 21 (1), 95-100 (1987).</li><li>Loureiro, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+plant+nuclei+for+estimation+of+nuclear+DNA+content:+Overview+and+best+practices.">Isolation of plant nuclei for estimation of nuclear DNA content: Overview and best practices.</a> Cytometry Part A. 99 (4), 318-327 (2021).</li><li>Deal, R. B., Henikoff, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+INTACT+method+for+cell+type-specific+gene+expression+and+chromatin+profiling+in+Arabidopsis+thaliana.">The INTACT method for cell type-specific gene expression and chromatin profiling in Arabidopsis thaliana.</a> Nat Protoc. 6 (1), 56-68 (2011).</li><li>Duncan, S., Olsson, T. S. G., Hartley, M., Dean, C., Rosa, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+detecting+single+mRNA+molecules+in+Arabidopsis+thaliana.">A method for detecting single mRNA molecules in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Methods. 12, 13 (2016).</li><li>Gutzat, R., Mittelsten Scheid, O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparing+chromatin+and+RNA+from+rare+cell+types+with+fluorescence-activated+nuclear+sorting+(FANS).">Preparing chromatin and RNA from rare cell types with fluorescence-activated nuclear sorting (FANS).</a> Methods Mol Biol. 2093, 95-105 (2020).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab5095</td><td>Primärantikörper, der in 1/200 Verdünnung in Immunfärbungspuffer verwendet wird, um die aktive Form der Polymerase zu visualisieren (Polyklonaler Antikörper, der in Kaninchen erzeugt wurde )</td></tr><tr><td>Acquisition software</td><td>Abbelight</td><td>NEO LiveImaging v2.18</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906&nbsp;&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Catalase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C40</td><td></td></tr><tr><td>Zertifizierte Low Melting Agarose</td><td>Bio-Rad</td><td>1613111</td><td></td></tr><tr><td>Deckgläser Dicke 1.5H rund</td><td>Marienfeld</td><td>117640</td><td>&Oslash;: 24 mm</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose, wasserfrei, 99%</td><td>Thermo Scientific</td><td>A16828-36&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dichroitischer Spiegel</td><td>Semrock</td><td>Di03-R405/488/561/635-t1</td><td>Dichroitischer Spiegel für Anregungs-/Emissionstrennung</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Phosphat-Pufferlösung 10&acute;</td><td>biowest</td><td>X0515 - 500&nbsp;</td><td>Arbeiten unter sterilen Bedingungen</td></tr><tr><td>Epredia Ultra Einweg-Mikrotomklingen</td><td>FisherScientific</td><td>12191830</td><td>Niedriges Profil, einmalige Verwendung</td></tr><tr><td>Falcon 6-Well Clear Flat Bottom TC-behandelte Multiwell-Zellkulturplatte mit Deckel</td><td>&nbsp;Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehydlösung 37%</td><td>Carl Roth</td><td>7398</td><td>Arbeiten unter dem Abzug</td></tr><tr><td>Glukoseoxidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2133</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>VWR</td><td>24388.295</td><td></td></tr><tr><td>Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H+L) hochgradig gekreuzt adsorbiertes sekundäres Antikörper, Alexa Fluor Plus 647</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32733TR</td><td>Verwendet bei 1/200 als sekundärer Antikörper, gekoppelt an AF647</td></tr><tr><td>Hoechst 33258-Lösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94403</td><td>Verwendet bei 1/500 zur Gegenfärbung der DNA, hinzugefügt zum Agarose-Pad</td></tr><tr><td>Salzsäurelösung</td><td>Chem-Lab</td><td>CL05.0311.1000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>JF549-Hoechst</td><td>Lavis lab and Open Chemistry team (Janelia)</td><td>JF549-Hoechst</td><td>Verwendet zur Gegenfärbung der DNA, hinzugefügt zum Agarose-Pad bei einer Endkonzentration von 1,5 nM</td></tr><tr><td>KIMBLE Dounce Gewebezerdrücker-Set</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8938</td><td>2-ml-Röhrchen mit großen (0,0030–0,0050 Zoll) und kleinen (0,0005–0,0025 Zoll) Freiräumen für Stößel</td></tr><tr><td>Lasereinheit</td><td>Oxxius</td><td>L6Cc</td><td>Ausgestattet mit sechs Lasern: 405 nm - 100 mW, 488 nm - 200 mW, 532 nm - 500 mW, 561 nm - 300 mW, 640 nm - 500 mW und 730 nm - 30 mW</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid-Hexahydrat</td><td>Carl Roth</td><td>HN03</td><td></td></tr><tr><td>Mercaptoethylamin (MEA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30070</td><td></td></tr><tr><td>MOPS-Natriumsalz 98%</td><td>Fisher Scientific SAS</td><td>352590010</td><td></td></tr><tr><td>Multiband-Emissionsfilter</td><td>Semrock</td><td>FF01-446/523/600/677</td><td>Multiband-Emissionsfilterung zur Blockierung von Laserstreulicht</td></tr><tr><td>Nanodiamanten</td><td>Adamas Nanotechnologies</td><td>NDNV100nmHiWGA2ml</td><td>Vorrat 1 mg/mL</td></tr><tr><td>ORCA-Fusion Digital CMOS-Kamera</td><td>Hamamatsu</td><td>C14440-20UP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale, 100/20 mm, PS, klar, mit Lüftungsöffnungen, steril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664161</td><td>Verwendet zum Anbau von Pflanzen auf 1/2 MS-Medium</td></tr><tr><td>Petrischale, quadratisch, PS, klar, 120/120/17 mm, steril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>688161</td><td>Verwendet beim Zerkleinern der Pflanzenkeimlinge</td></tr><tr><td>pluriStrainer Mini Zellsieb</td><td>pluriSelect</td><td>43-10030-50</td><td>Maschengröße 30 &micro;m, geeignet für 1,5-ml-Eppendorf-Röhrchen</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Einzelband-Emissionsfilter</td><td>Semrock</td><td>FF01-698/70</td><td>Spezifischer Emissionsfilter für AF647-Kanal</td></tr><tr><td>Einzelband-Emissionsfilter</td><td>Chroma</td><td>ET600/50m</td><td>Spezifischer Emissionsfilter für JF549-Kanal</td></tr><tr><td>Natriumchlorid (99,5%)&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>1112-A</td><td></td></tr><tr><td>Star-Frost Objektträger 76 x 26 mm</td><td>Knittel</td><td>&nbsp;VS112711FKB.01</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Spritzenfilter&oslash; 33 mm Porosität 0,2 &micro;m Luer Lock Kegel</td><td>ClearLine</td><td>146560</td><td></td></tr><tr><td>Superauflösungssystem</td><td>Abbelight</td><td>SAFe360</td><td>Olympus IX83 ausgestattet mit 100x NA1.5 Öl-Immersionsobjektiv</td></tr><tr><td>Tri-Natriumcitrat 2H2O Gen-Apex Biomole</td><td>Prolabo</td><td>PRO-33615.268</td><td></td></tr><tr><td>Tris-Base Molekularbiologie-Qualität</td><td>Promega</td><td>H5135</td><td></td></tr><tr><td>Tris(2-carboxyethyl)phosphinhydrochlorid (TCEP)</td><td>Thermo Scientific</td><td>20491</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Euromedex</td><td>2000-B</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Euromedex</td><td>2001-B</td><td></td></tr><tr><td>Twinsil Speed</td><td>Picodent</td><td>13001002</td><td>Silikondichtmittel</td></tr><tr><td>Ultraviolett-Ozonreinigungssystem UVOCS-Ofen</td><td>UVOCS Inc.</td><td>T10X10</td><td>20 min Belichtung zur Reinigung von Deckgläsern&nbsp;</td></tr><tr><td>Vakuumpumpe</td><td>Vacuubrand</td><td>VP 100C</td><td></td></tr><tr><td>Heraeus Megafuge 16R Zentrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Rotor TX-400 75003629. Zentrifugation durchgeführt mit Eppendorf-Röhrchen.</td></tr></tbody></table>

ein stromlinienförmiges protokoll für einzelmolekül-lokalisationsmikroskopie in arabidopsis-kernen

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Wir berichten über eine einfache und vielseitige Methode zur Durchführung von fluoreszierenden live-Imaging von Arabidopsis Thaliana Blätter über einen längeren Zeitraum hinweg. Wir verwenden eine transgene Arabidopsis -Pflanze mit dem Ausdruck einer fluoreszierenden Reporter-gen unter der Kontrolle von einer Immunität im Zusammenhang mit Promoter als Vorbild für die räumlich-zeitliche Verständnis der Pflanze Immunantworten.

Eine vielseitige Methode für die Montage von Arabidopsis verlässt für intravitalen Zeitraffer Aufnahmen

Die 3D-Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie wird verwendet, um die räumlichen Positionen und Bewegungsbahnen fluoreszierend markierter Proteine in lebenden Bakterienzellen zu untersuchen. Das hier beschriebene experimentelle und Datenanalyseprotokoll bestimmt das vorherrschende diffusive Verhalten von zytosolischen Proteinen auf der Grundlage gepoolter Einzelmolekülbahnen.

Single-Molecule Tracking-Mikroskopie - Ein Werkzeug zur Bestimmung der diffusiven Zustände von zytosolischen Molekülen

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Live-Zell-Bildgebung des kortikalen Mikrotubule-Zytoskeletts am triebförmigen Meristem und die Überwachung seiner Reaktion auf Veränderungen der physikalischen Kräfte.

Live Cell Imaging von Microtubule Cytoskeleton und mikromechanische Manipulation der Arabidopsis Schießen apical Meristem

Die Chromosomenbewegung während der meiotischen Prophase ist ein wenig verstandenes Phänomen, das für die Sporenbildung von grundlegender Bedeutung ist. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Erfassung, Analyse und Quantifizierung von Zentromerbewegungen während der meiotischen Prophase in männlichen Meiozyten von Arabidopsis thaliana .

Live-Imaging-Charakterisierung von Zentromerbewegungen während der männlichen meiotischen Prophase in Arabidopsis thaliana

Wir präsentieren ein dreifarbiges Chromatin-Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie-(SMLM)-Färbungs- und Analyseverfahren, das eine reproduzierbare Abbildung von Euchromatin, Heterochromatin und RNAP II für die räumliche Analyse ermöglicht. Dieses Protokoll ermöglicht eine effiziente mehrfarbige Markierung in dichten nuklearen Umgebungen, einschließlich chromatinassoziierter Ziele, und ermöglicht eine zuverlässige gleichzeitige Erkennung.

Ein mehrschichtiges Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopieprotokoll zur Untersuchung von Chromatin in der dichten Kernumgebung

Dieses Immunlokalisationsprotokoll bei männlichen Maismeiozyten erhält während der Meiose die dreidimensionale Integrität der Zellen. Es ermöglicht die dynamische Verfolgung der intrazellulären Lokalisierung von bis zu drei unabhängigen Antikörpern in konserviertem, paraformaldehydfixiertem Material, zusätzlich zu DAPI, das DNA färbt.

Dreidimensionale Immunlokalisation bei Maismeiocyten

Dieser Prozess verwendet die Konfokalmikroskopie in Verbindung mit einer fluoreszenzmarkierten Kern- und Chromatinmarkerlinie bei Arabidopsis thaliana, um gleichzeitig die Kern- und Chromatindynamik in Arabidopsis-Wurzeln aufzuzeichnen und Veränderungen in dieser Dynamik als Reaktion auf Entwicklungs- und Umweltsignale zu untersuchen.

Quantitative lebende Zellbildgebung der Kernform und der Chromatindynamik während der Entwicklung und Umweltstress in der Wurzel Arabidopsis thaliana

Erfahren Sie ein optimiertes Protokoll für Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie in Arabidopsis thaliana-Kernen. Diese Methode ermöglicht nanoskalige Visualisierung von Chromatinarchitektur und epigenetischer Regulation in Pflanzenzellen.

Ein stromlinienförmiges Protokoll für Einzelmolekül-Lokalisationsmikroskopie in Arabidopsis-Kernen

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