Name: Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Mausskelettmuskulatur und Knochenmark mittels Größenausschlusschromatographie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-23T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Mausskelettmuskulatur und Knochenmark mittels Größenausschlusschromatographie. Diese Methode ermöglicht hochreine sEV-Gewinnung aus minimalen Gewebeproben für molekulare Analysen.

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	<li>Whitham, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+provide+a+means+for+tissue+crosstalk+during+exercise.">Extracellular vesicles provide a means for tissue crosstalk during exercise.</a> Cell Metab. 27 (1), 237-251.e4 (2018).</li><li>Kumar, M. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+tools+and+targets+in+therapy+for+diseases.">Extracellular vesicles as tools and targets in therapy for diseases.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 27 (2024).</li><li>Fonseka, P., Mathivanan, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+biogenesis,+cargo+sorting+and+implications+in+disease+conditions.">Extracellular vesicles biogenesis, cargo sorting and implications in disease conditions.</a> Cells. 12 (2), (2023).</li><li>Taraboletti, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioavailability+of+VEGF+in+tumor-shed+vesicles+depends+on+vesicle+burst+induced+by+acidic+pH.">Bioavailability of VEGF in tumor-shed vesicles depends on vesicle burst induced by acidic pH.</a> Neoplasia. 8 (2), 96-103 (2006).</li><li>Dakup, P. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+state-of-the-art+proteomics+analysis+for+biomarker+development+from+plasma+extracellular+vesicles.">Challenges and opportunities in state-of-the-art proteomics analysis for biomarker development from plasma extracellular vesicles.</a> Proteomics. , (2025).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EV-origin:+Enumerating+the+tissue-cellular+origin+of+circulating+extracellular+vesicles+using+exLR+profile.">EV-origin: Enumerating the tissue-cellular origin of circulating extracellular vesicles using exLR profile.</a> Comput Struct Biotechnol J. 18, 2851-2859 (2020).</li><li>Shero, J. A., Lindholm, M. E., Sandri, M., Stanford, K. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+as+a+mediator+of+interorgan+crosstalk+during+exercise:+Implications+for+aging+and+obesity.">Skeletal muscle as a mediator of interorgan crosstalk during exercise: Implications for aging and obesity.</a> Circ Res. 136 (11), 1407-1432 (2025).</li><li>Vanhie, J. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+exercise-+and+high-fat+diet-induced+bone+marrow+extracellular+vesicles+in+stress+hematopoiesis.">The role of exercise- and high-fat diet-induced bone marrow extracellular vesicles in stress hematopoiesis.</a> Front Physiol. 13, 1054463 (2022).</li><li>Pinto, A. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+therapeutic+potential+of+contracting+skeletal+muscle-released+extracellular+vesicles+in+cancer:+Current+insights+and+future+directions.">Exploiting the therapeutic potential of contracting skeletal muscle-released extracellular vesicles in cancer: Current insights and future directions.</a> J Mol Med (Berl). 102 (5), 617-628 (2024).</li><li>Welsh, J. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+(MISEV2023):+From+basic+to+advanced+approaches.">Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches.</a> J Extracell Vesicles. 13 (2), e12404 (2024).</li><li>De Sousa, K. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicles+and+future+directions+in+diagnosis+and+therapy.">Isolation and characterization of extracellular vesicles and future directions in diagnosis and therapy.</a> Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 15 (1), e1835 (2023).</li><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+simplified+dichotomic+size-exclusion+chromatography+for+isolating+extracellular+vesicles+toward+clinical+applications.">Establishment of a simplified dichotomic size-exclusion chromatography for isolating extracellular vesicles toward clinical applications.</a> J Extracell Vesicles. 10 (11), e12145 (2021).</li><li>Ahmadian, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+storage+and+freezing+protocols+for+extracellular+vesicles:+A+systematic+review.">Different storage and freezing protocols for extracellular vesicles: A systematic review.</a> Stem Cell Res Ther. 15 (1), 453 (2024).</li><li>Watanabe, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+releases+extracellular+vesicles+with+distinct+protein+and+microRNA+signatures+that+function+in+the+muscle+microenvironment.">Skeletal muscle releases extracellular vesicles with distinct protein and microRNA signatures that function in the muscle microenvironment.</a> PNAS Nexus. 1 (4), pgac173 (2022).</li><li>Magalhaes-Gama, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+cell-derived+extracellular+vesicles+in+peripheral+blood+and+bone+marrow+of+B-cell+acute+lymphoblastic+leukemia+pediatric+patients:+Proof-of-concept+study.">Exploring cell-derived extracellular vesicles in peripheral blood and bone marrow of B-cell acute lymphoblastic leukemia pediatric patients: Proof-of-concept study.</a> Front Immunol. 15, 1421036 (2024).</li><li>Potter, D. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+extracellular+vesicles+attenuate+pulmonary+vascular+permeability+and+lung+injury+induced+by+hemorrhagic+shock+and+trauma.">Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles attenuate pulmonary vascular permeability and lung injury induced by hemorrhagic shock and trauma.</a> J Trauma Acute Care Surg. 84 (2), 245-256 (2018).</li><li>Osteikoetxea, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+detergent+sensitivity+of+extracellular+vesicle+subpopulations.">Differential detergent sensitivity of extracellular vesicle subpopulations.</a> Org Biomol Chem. 13 (38), 9775-9782 (2015).</li><li>Kim, T., Hong, J. W., Lee, L. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+methods+of+isolation+and+purification+of+extracellular+vesicles.">Efficient methods of isolation and purification of extracellular vesicles.</a> Nano Converg. 12 (1), 45 (2025).</li><li>Bracht, J. W. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choice+of+size-exclusion+chromatography+column+affects+recovery,+purity,+and+miRNA+cargo+analysis+of+extracellular+vesicles+from+human+plasma.">Choice of size-exclusion chromatography column affects recovery, purity, and miRNA cargo analysis of extracellular vesicles from human plasma.</a> Extracell Vesicles Circ Nucl Acids. 5 (3), 497-508 (2024).</li><li>Mo, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle-mediated+bidirectional+communication+between+the+liver+and+other+organs:+Mechanistic+exploration+and+prospects+for+clinical+applications.">Extracellular vesicle-mediated bidirectional communication between the liver and other organs: Mechanistic exploration and prospects for clinical applications.</a> J Nanobiotechnology. 23 (1), 190 (2025).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 mL Zentrifugenrohr</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>Allgemeines Mikrozentrifugenrohr, das im gesamten Protokoll verwendet wird</td></tr><tr><td>1,5 mL Röhrchen mit geringer Proteinbindung</td><td>Sarstedt</td><td>72.706.600</td><td>Verwendet für die Handhabung von EV, die Sammlung von SEC-Fraktionen und die Lagerung</td></tr><tr><td>0,2 mL PCR-Röhrchen</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-222-262</td><td>Verwendet für die Einrichtung der Knochenmarkextraktion mit dem angestochenen Röhrchen</td></tr><tr><td>16 G Nadel</td><td>BD</td><td>305197</td><td>Verwendet zum Durchstechen des 0,2 mL PCR-Röhrchens</td></tr><tr><td>30 &micro;m Zellsieb</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-098-458</td><td>Verwendet für die Filtration von Skelettmuskelproben</td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.11727</td><td>Verwendet zur Sterilisation von Pinzetten</td></tr><tr><td>Biosicherheitsschrank</td><td>N.A.</td><td>N.A.</td><td>Verwendet für die sterile Handhabung von Gewebe</td></tr><tr><td>Knochenschneidinstrument</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-001-976</td><td>Verwendet zum Trennen von Femur und Tibia und zur Freilegung des Knochenmarks</td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA)</td><td>BioShop</td><td>ALB001</td><td>Verwendet für Western Blot Blocking und Antikörperverdünnung</td></tr><tr><td>Calciumchloriddihydrat (CaCl2&middot;2H2O)</td><td>BioShop</td><td>CCL302</td><td>Verwendet für die Zubereitung des HEPES-Puffers</td></tr><tr><td>Kohlenstoffbeschichtetes Kupfergitter, 200-Mesh</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>930342</td><td>Verwendet für die TEM-Stichprobenvorbereitung</td></tr><tr><td>Zentrifugales Filter, 100 kDa MWCO</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC810096</td><td>Verwendet für die EV-Konzentration</td></tr><tr><td>Collagenase D</td><td>Roche</td><td>11088858001</td><td>Verwendet für die enzymatische Verdauung von Skelettmuskel</td></tr><tr><td>Cryovial</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>Verwendet zur Lagerung von Gewebe und Knochen</td></tr><tr><td>Deionisiertes Wasser (ultrarein)</td><td>N.A.</td><td>N.A.</td><td>Verwendet für die Pufferzubereitung und TEM-Waschschritte</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>11284932001</td><td>Verwendet für die enzymatische Verdauung von Skelettmuskel</td></tr><tr><td>Trockeneis</td><td>N.A.</td><td>N.A.</td><td>Verwendet zum Abkühlen und Transport von Proben</td></tr><tr><td>Enhanced Chemiluminescence-Substrat</td><td>Biorad</td><td>1705061</td><td>Verwendet für die Western Blot-Detektion</td></tr><tr><td>Filtereinheit, 0,22 &micro;m</td><td>Sarstedt</td><td>83.3941.501</td><td>Verwendet zum Filtern von PBS, wo anwendbar</td></tr><tr><td>Pinzette / Pinzette</td><td>MilliporeSigma</td><td>F3892</td><td>Verwendet für die Gewebehandhabung</td></tr><tr><td>Glutaraldehyd</td><td>N.A.</td><td>N.A.</td><td>Verwendet für die TEM-Fixierung</td></tr><tr><td>Glycin</td><td>N.A.</td><td>N.A.</td><td>Verwendet in TEM-Gitterwaschschritten</td></tr><tr><td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14175-095</td><td>Verwendet für die DNase I-Stammlösungszubereitung</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>BioShop</td><td>HEP001.500</td><td>Verwendet für die Zubereitung von HEPES-NaOH-Puffer</td></tr><tr><td>Streptavidin, konjugiert mit Horseradish-Peroxidase</td><td>Thermo Fisher</td><td>S911</td><td>Verwendet für die Western Blot-Detektion</td></tr><tr><td>Imagingsystem für Chemilumineszenz</td><td>Biorad</td><td>12003153</td><td>Verwendet zum Abbilden von Western Blot-Membranen</td></tr><tr><td>KCl</td><td>BioShop</td><td>POC308</td><td>Verwendet für die Zubereitung von HEPES-Puffer</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid (MgCl2)</td><td>BioShop</td><td>MAG510.500</td><td>Verwendet für die Zubereitung von HEPES-Puffer</td></tr><tr><td>2-Methylbutan</td><td>Thermo Fisher</td><td>78-78-4</td><td>Verwendet für das Schnappfrieren von Skelettmuskel</td></tr><tr><td>Milligrammwaage</td><td>MilliporeSigma</td><td>Z741359</td><td>Verwendet zum Wiegen von Gewebe und Knochenmark</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>BioShop</td><td>SOD004.1</td><td>Verwendet für die Zubereitung von HEPES-Puffer</td></tr><tr><td>Nanopartikel-Tracking-Analyseinstrument</td><td>Malvern Panalytical</td><td>NanoSight NS300</td><td>NanoSight NS300 wird für die Partikelgrößenbestimmung und Zählung verwendet</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>BioShop</td><td>SHY500.500</td><td>Verwendet zur pH-Wert-Einstellung</td></tr><tr><td>Nitrocellulosemembran</td><td>BioRad</td><td>1704271</td><td>Verwendet für die Western Blot Übertragung</td></tr><tr><td>Nutatingmixer</td><td>Labnet</td><td>&nbsp;S0500</td><td>Verwendet während der enzymatischen Verdauung</td></tr><tr><td>P1000 Pipette</td><td>MilliporeSigma</td><td>FA10006M-1EA</td><td>Verwendet für Gewebetransfer</td></tr><tr><td>Pipettenspitze, 1 mL</td><td>Sarstedt</td><td>70.3050.275</td><td>Die Spitze wird beschnitten, um die Öffnung für den Transfer von Gewebefragmenten zu vergrößern</td></tr><tr><td>Phosphat-gepufferte Salzlösung (PBS)</td><td>Wisent</td><td>INC 811.012-FL</td><td>Wird im gesamten Protokoll verwendet; auch verwendet für SEC-Gleichgewichtung und Elution</td></tr><tr><td>Phosphatase-Inhibitor</td><td>MilliporeSigma</td><td>4906845001</td><td>Verwendet für die Western Blot Lysatzubereitung</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>MilliporeSigma</td><td>CLS351146</td><td>Verwendet für die Knochenmarkvorbereitung</td></tr><tr><td>Polyacrylamidgel, 4&ndash;20% Gradienten-Stain-Free</td><td>BioRad</td><td>4561094</td><td>Verwendet für die Western Blot-Trennung</td></tr><tr><td>Protease-Inhibitor</td><td>MilliporeSigma</td><td>11697498001</td><td>Verwendet für die Western Blot Lysatzubereitung</td></tr><tr><td>RPMI-1640 Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7388-500ML</td><td>Unangereichert; kein FBS oder Antibiotika</td></tr><tr><td>RIPA-Puffer, 10&times;</td><td>Merck</td><td>20-188</td><td>Verwendet für die Proteinextraktion für Western Blotting</td></tr><tr><td>Skalpell, steril, einweg</td><td>Ultident Paragon</td><td>02-90000-10</td><td>Verwendet zum Zerkleinern von Skelettmuskelgewebe</td></tr><tr><td>SEC-Säule, ursprünglich 70 nm</td><td>IZON</td><td>ICO70P</td><td>Verwendet für SEC von Skelettmuskel</td></tr><tr><td>SEC-Säule, einzel 70 nm</td><td>IZON</td><td>ICS70P</td><td>Verwendet für SEC von Knochenmark</td></tr><tr><td>Natriumazid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S200

isolierung kleiner extrazellulärer vesikel aus mausskelettmuskulatur und knochenmark mittels größenausschlusschromatographie

Isolation of Small Extracellular Vesicles from Murine Skeletal Muscle and Bone Marrow by Size-Exclusion Chromatography

Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Mausskelettmuskulatur und Knochenmark mittels Größenausschlusschromatographie

Small extracellular vesicles (sEVs) are nanosized, lipid-bound particles that mediate intercellular communication through the transfer of proteins, ...

isolation-small-extracellular-vesicles-from-murine-skeletal-muscle

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Quelle: Watson, D. C., et al. Skalierbare Isolierung und Reinigung von extrazellulären Vesikeln aus Escherichia coli und anderen Bakterien. J. Vis. Exp. (2021)Dieses Video zeigt die Verwendung der Größenausschlusschromatographie mit porösen Harzkügelchen zur Isolierung bakterieller extrazellulärer Vesikel (EVs) aus einem Bakterienkulturfiltrat. Größere EVs eluieren früh, indem sie die Harzporen umgehen, während kleinere Proteine in die Poren eindringen und später eluieren.

Isolierung bakterieller extrazellulärer Vesikel mittels Größenausschlusschromatographie 

In diesem Video demonstrieren wir eine Technik – Größenausschlusschromatographie – um eine heterogene Population von äußeren Membranvesikeln oder OMVs zu trennen, die von Bakterien abstammen. Diese Vesikel sind kugelförmige Strukturen in Nanogröße und werden durch Size Exclusion Chromatography in große und kleine Subpopulationen unterteilt, die auf ihrer Größe basieren.

Größenausschlusschromatographie-basierte Trennung bakterieller extrazellulärer Vesikel: Eine Technik zur Trennung heterogener Populationen gramnegativer bakterieller Vesikel der äußeren Membran anhand ihrer Größe

Dieses Video zeigt die Größenausschlusschromatographie (SEC) Technik zur Reinigung bakterieller extrazellulärer Vesikel (EVs) aus dem Kulturfiltrat von Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Bei der Technik wird eine poröse, mit Harz gefüllte Säule verwendet, um gereinigte Fraktionen von EVs zu erhalten. Die porösen Partikel lassen selektiv kleinere Proteine in die Poren eindringen, was zu einer langsameren Elution führt. Gleichzeitig werden EVs aufgrund ihrer größeren Größe vom Eindringen in die...

Eine Größenausschlusschromatographie-Technik zur Reinigung mykobakterieller extrazellulärer Vesikel

Dieses Protokoll veranschaulicht 1) die Isolierung und Kultivierung von primären Fibroblasten aus dem adulten Musculus gastrocnemius der Maus sowie 2) die Aufreinigung und Charakterisierung von Exosomen unter Verwendung einer differentiellen Ultrazentrifugationsmethode in Kombination mit Saccharosedichtegradienten gefolgt von Western-Blot-Analysen.

Isolierung und Charakterisierung von Exosomen aus Skelettmuskelfibroblasten

Bakterielle Vesikel spielen eine wichtige Rolle bei der Pathogenese und haben vielversprechende biotechnologische Anwendungen. Die Heterogenität der Vesikel erschwert die Analyse und Verwendung; Daher ist eine einfache, reproduzierbare Methode zur Trennung unterschiedlicher Größen von Vesikeln erforderlich. Hier demonstrieren wir die Verwendung der Größenausschlusschromatographie zur Trennung heterogener Vesikel, die von Aggregatibacter actinomycetemcomitansproduziert werden.

Größenausschlusschromatographie zur Analyse der Heterogenität bakterieller äußerer Membranvesikel

Das Protokoll zeigt hier, dass extrazelluläre Vesikel mittels Größenausschlusschromatographie adäquat von konditionierten Zellkulturmedien getrennt werden können.

Größenausschlusschromatographie zur Trennung extrazellulärer Vesikel aus konditionierten Zellkulturmedien

Dieses Protokoll demonstriert, wie die kleinen extrazellulären Vesikel (hUC-MSC-sEVs) von humanen Nabelschnurstammzellen (hUC-MSC-sEVs) mit einer einfachen Laborumgebung isoliert werden können. Die Größenverteilung, Proteinkonzentration, sEVs-Marker und Morphologie isolierter hUC-MSC-sEVs werden durch Nanopartikel-Tracking-Analyse, BCA-Protein-Assay, Western Blot bzw. Transmissionselektronenmikroskop charakterisiert.

Eine einfache Tischfiltrationsmethode zur Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus humanen mesenchymalen Stammzellen

Dieses Protokoll bietet eine schnelle und größenspezifische Isolationsmethode für kleine extrazelluläre Vesikel, indem die Größe der Luftsprühdüse, der Mantelflüssigkeitsdruck, der Probenflussdruck, die Spannung, die Verstärkung und die Auslöseschwellenparameter optimiert werden.

Optimierung der durchflusszytometrischen Sortierparameter für die Hochdurchsatzisolierung und Aufreinigung kleiner extrazellulärer Vesikel

Extrazelluläre Vesikel sind für biomedizinische Anwendungen sehr vielversprechend, aber die derzeitigen Isolierungsmethoden sind zeitaufwändig und für den klinischen Einsatz unpraktisch. In dieser Studie stellen wir ein mikrofluidisches Gerät vor, das die direkte Isolierung extrazellulärer Vesikel aus großen Mengen von Bioflüssigkeiten in einer kontinuierlichen Weise mit minimalen Schritten ermöglicht.

Einstufige Isolierung extrazellulärer Vesikel aus großvolumigen Proben mit einem gegabelten mikrofluidischen A4F-Gerät

Dieses Protokoll zielt darauf ab, interstitielle extrazelluläre Vesikel (SkM-EVs) der Skelettmuskulatur aus Muskelgewebe von Nagetieren durch mechanische Ablösung, enzymatische Dissoziation, Filtration und differentielle Ultrazentrifugation zu isolieren und zu reinigen. Es zeugt von Beständigkeit und Zuverlässigkeit. Die isolierten SkM-EVs liefern Einblicke in die Muskelhomöostase und -krankheiten, mit potenziellen Anwendungen als diagnostische Biomarker oder therapeutische Vehikel.

Enzymatische Isolierung von interstitiellen extrazellulären Vesikeln der Skelettmuskulatur

Erfahren Sie die Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Mausskelettmuskulatur und Knochenmark mittels Größenausschlusschromatographie. Diese Methode ermöglicht hochreine sEV-Gewinnung aus minimalen Gewebeproben für molekulare Analysen.

Isolierung kleiner extrazellulärer Vesikel aus Mausskelettmuskulatur und Knochenmark mittels Größenausschlusschromatographie

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