Name: Eine optimierte Methode zur Isolierung des weiblichen Harnröhrenepithels für Einzelzell- und Immunfluoreszenzanalyse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Erfahren Sie eine optimierte Methode zur Isolierung des weiblichen Harnröhrenepithels bei Mäusen für Einzelzell- und Immunfluoreszenzanalyse. Diese Technik ermöglicht Flusszytometrie, Organoidkultur und Einzelzell-RNA-Sequenzierung zur Untersuchung von Abwehrmechanismen.

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<table><tbody><tr><td>#5 fine forceps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% neutral buffered formalin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4641</td><td></td></tr><tr><td>12-well plate</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>30-micron pre-separation filter&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>Adobe</td><td></td><td>Zum Erstellen von Abbildungstafeln</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop</td><td>Adobe</td><td></td><td>Zum Erstellen von Abbildungstafeln</td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic/antimycotic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD326 (EpCAM)</td><td>Invitrogen</td><td>17-5791-82</td><td>1:20 Verdünnung, für Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Anti-CD45</td><td>Tonbo</td><td>35-0451-U100</td><td>1:20 Verdünnung, für Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Anti-CDH1 (Rabbit)</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>3195S</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-F4/80</td><td>Tonbo</td><td>50-4801-U100</td><td>1:20 Verdünnung, für Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Anti-F4/80 (Rat)</td><td>Invitrogen</td><td>14-4801-82</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 13 (Rabbit)</td><td>Abcam</td><td>ab92551</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 4 (Mouse)</td><td>Abcam</td><td>ab9004</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 5 (Chicken)</td><td>Biolegend</td><td>905904</td><td>1:800 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 5 (Rabbit)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>71536</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Anti-p63 (Mouse)</td><td>Biocare medical</td><td>CM163A</td><td>1:200 Verdünnung</td></tr><tr><td>Axioobserver 7</td><td>Zeiss</td><td>431007-9904-000</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Invitrogen</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA), fraction V</td><td>Genetix</td><td>PG-2330</td><td></td></tr><tr><td>CD-1 Mice</td><td>Charles River, USA</td><td>Crl:CD1(ICR)</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex BME</td><td>R&amp;D systems</td><td>3445-005-01</td><td></td></tr><tr><td>DAPI solution&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Qualigens</td><td>Q15405</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Himedia</td><td>MB058</td><td></td></tr><tr><td>di-Sodium Hydrogen Ortophosphate (Na2HPO4)</td><td>Qualigens</td><td>Q15825</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Chicken IgG (H+L) (AF488)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>703-545-155</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) (AF488)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>715-545-151</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>715-585-151</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>711-585-152</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (AF647)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>711-605-152</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) (AF647)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-605-153</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-585-153</td><td>1:500 Verdünnung</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-315-09</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Himedia</td><td>GRM938</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Supelco</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>Eukitt mounting media&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>FGF10</td><td>PeproTech</td><td>450-61</td><td></td></tr><tr><td>Filter cap sorting tubes</td><td>&nbsp;Falcon/Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye&trade; Violet 450</td><td>Tonbo biosciences</td><td>13-0863-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Invitrogen</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol anhydrous</td><td>Merck</td><td>DA1P692899</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Polysciences</td><td>24243</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Kaluza Analysis</td><td>Beckman Coulter</td><td>Kaluza Analysis 2.4</td><td>Analyse von Durchflusszytometriedaten</td></tr><tr><td>Magnesium chloride (MgCl2)</td><td>Qualigens</td><td>Q15535</td><td></td></tr><tr><td>Mouse TruStain FcX (anti-mouse CD16/32 )</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>N-acetyl cysteine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Noggin&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>AF-250-38</td><td></td></tr><tr><td>n-Propyl gallate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin wax&nbsp;</td><td>Qualigens</td><td>Q19215</td><td></td></tr><tr><td>Potassium chloride (KCl)</td><td>Qualigens</td><td>Q13305</td><td></td></tr><tr><td>Potassium dihydrogen orthophosphate (KH2PO4)</td><td>Qualigens</td><td>19465</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>ant-pm-05</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer (10X)</td><td>Tonbo biosciences</td><td>TNB-4300-L100</td><td></td></tr><tr><td>Retinoic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Rocki&nbsp; (Y-27632)</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>13624S</td><td></td></tr><tr><td>R-spondin 1</td><td>PeproTech</td><td>315-32

eine optimierte methode zur isolierung des weiblichen harnröhrenepithels für einzelzell- und immunfluoreszenzanalyse

An Optimized Method To Isolate Female Mouse Urethral Epithelium For Single-Cell And Immunofluorescence Analysis

Eine optimierte Methode zur Isolierung des weiblichen Harnröhrenepithels für Einzelzell- und Immunfluoreszenzanalyse

The urethra, lined by epithelial cells, serves as the conduit for urine outflow from the body. The epithelial lining of the urethra comprises distinct ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video demonstriert Methoden zur transurethral induzieren Maus Harnwegsinfektionen und zu quantifizieren, das Ausmaß der daraus resultierenden Infektionen.

Transurethrale Induktion von Maus Harnwegsinfekt

Ein hoher Durchsatz In situ Hybridisierung Methode zur mRNA Expression Patterns in der Fetal-Maus unteren Urogenitaltrakts Charakterisieren

Ein effizienter Weg, um Lymphozyten, die aus Maus Genitaltrakt isolieren beschrieben. Diese Methode nutzt Enzym Verdauung und Percoll Gradienten Trennung effiziente Isolierung ermöglichen. Diese Technik ist auch anpassbar für die Verwendung in anderen...

Isolierung von Lymphozyten aus Maus Genital Tract Mucosa

Quelle: Yang, E. et al. Isolierung einzelner intrazellulärer bakterieller Gemeinschaften, die aus einem Mausmodell der Harnwegsinfektion erzeugt wurden, für eine nachgelagerte Einzelzellanalyse. J. Vis. Exp. (2019)Dieses Video demonstriert die manuelle Isolierung einzelner Epithelzellen, die intrazelluläre Bakteriengemeinschaften aus infizierten Mausblasen enthalten, mittels Mund-Mikropipettierung und ermöglicht so eine nachgeschaltete Einzelzellanalyse lebensfähiger, wirtsassozoziierter...

Isolierung von Mausblasenepithelzellen mit intrazellulären Bakteriengemeinschaften

In diesem Video beschreiben wir das Verfahren zur Dissektion des Urogenitalsystems oder UGS an einem männlichen Mausmodell. Dieses UGS wird ex vivo weiter präpariert, um die Prostata zu isolieren und ihre Rolle bei der Entstehung von Prostatakrebs zu untersuchen.

Extraktion der Prostata aus dem Urogenitalsystem der Maus: Eine Technik zur Trennung der Prostata von anderen Organen des Harn- und Genitalsystems bei männlichen Mäusen

Das etablierte Modell der transurethrale Katheterisierung von Mäusen ermöglicht die Untersuchung von Erkrankungen der Blase, einschließlich urinausscheidende Fläche Infektion, aber kann nur bei Frauen durchgeführt werden. Ein neues Modell der männlichen transurethrale Instillation, das hier vorgestellte wird Forschung in einem Gebiet, geprägt von starken klinischen und epidemiologischen Unterschiede zwischen den Geschlechtern zu ermöglichen.

Urinausscheidende Fläche Infektion in eine kleine Tiermodell: transurethrale Katheterisierung von männlichen und weiblichen Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt eine einfache Methode zur Isolierung von einzelner, infizierte Blase Epithelzellen aus einem Mausmodell der urinausscheidende Fläche Infektion.

Isolierung der einzelnen intrazelluläre bakterielle Gemeinschaften erzeugt aus einem Mausmodell der urinausscheidende Fläche Infektion nachgelagerten Einzeller Analysezwecken

Dieses Protokoll beschreibt die transilluminationsunterstützte Mikrodissektion von Segmenten von erwachsenen Mausseminiferous Tubuli, die bestimmte Stadien des seminiferen Epithelzyklus darstellen, und Zelltypen darin und anschließende Immunostainierung von Squashpräparaten und intakten Tubulisegmenten.

Transillumination-Assisted Dissection of Specific Stages of the Mouse Seminiferous Epithelial Cycle for Downstream Immunostaining Analyses

Eine Methode zur Mikrodissektion des Eileiters der Maus, die die Sammlung der einzelnen Segmente unter Beibehaltung der RNA-Integrität ermöglicht, wird vorgestellt. Darüber hinaus wird ein nicht-enzymatisches oviduktales Zelldissoziationsverfahren beschrieben. Die Methoden eignen sich für die anschließende Gen- und Proteinanalyse der funktionell unterschiedlichen Eileitersegmente und dissoziierten Eileiterzellen.

Mikrodissektion und Dissoziation des Murinen Eileiters: Identifizierung einzelner Segmente und Einzelzellisolierung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Etablierung von Endometrium-Epithel-Organoiden der Maus für die Genexpression und histologische Analysen.

Etablierung von 3D-Endometrium-Organoiden aus der Gebärmutter der Maus

Dieses Protokoll beschreibt eine eintägige Methode zur Isolierung von humanen Eileiterepithelzellen. Isolierte Epithelzellen können in 2-dimensionalen (2D) Kulturen plattiert oder in Einzelzellsuspensionen dissoziiert und in nachgelagerten Experimenten, einschließlich Durchflusszytometrie und Einzelzell-RNA-Sequenzierung, verwendet werden.

Eine effiziente Methode zur Extraktion von Epithelien aus menschlichen Eileitern für Einzelzellanalysen

Erfahren Sie eine optimierte Methode zur Isolierung des weiblichen Harnröhrenepithels bei Mäusen für Einzelzell- und Immunfluoreszenzanalyse. Diese Technik ermöglicht Flusszytometrie, Organoidkultur und Einzelzell-RNA-Sequenzierung zur Untersuchung von Abwehrmechanismen.

Eine optimierte Methode zur Isolierung des weiblichen Harnröhrenepithels für Einzelzell- und Immunfluoreszenzanalyse

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