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<table><tbody><tr><td>0,45-Mikron-Filter</td><td>Sigma</td><td>S2HVU02RE</td><td></td></tr><tr><td>12k oder 92k Oligo Chip</td><td>Customarray Inc. (Genscript)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 cm Zellkulturplatten</td><td>Corning</td><td>CLS353004</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td></td></tr><tr><td>293NT</td><td>Systems Biosciences</td><td>LV900A-1</td><td></td></tr><tr><td>Alkaline Phosphatase</td><td>NEB</td><td>M0290L</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1760-25</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>9804S</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>P0756S</td><td></td></tr><tr><td>Cutsmart-Puffer</td><td>NEB</td><td>B6004S</td><td></td></tr><tr><td>Deep Sequencing (Next-Seq oder Hi-Seq)</td><td>Illumina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNAesy Blood and Tissue DNA Extraktionskit</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s modifiziertes Eagle-Medium</td><td>Wisent</td><td>319-015-CL</td><td></td></tr><tr><td>Endura Elektrokompetente Zellen</td><td>Lucigen</td><td>60242-1</td><td></td></tr><tr><td>EpiCult-B Mouse Medium Kit</td><td>Stemcell Technologies</td><td>05610</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I</td><td>NEB</td><td>R0734L</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Wisent</td><td>090-150</td><td></td></tr><tr><td>Gel DNA-Cleanup-Kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4008</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulser/MicroPulser Elektroporationsküvetten</td><td>BioRad</td><td>1652089</td><td></td></tr><tr><td>Gentle Collagenase/Hyaluronidase</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7919</td><td></td></tr><tr><td>H11-Cas9</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#028239</td><td></td></tr><tr><td>Hochgeschwindigkeitszentrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>MLS-50</td><td></td></tr><tr><td>Kim-wipe</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>LB-Agar</td><td>Wisent Technologies</td><td>800-011-LG</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetten-Zieher</td><td>Sutter Instrument</td><td>P97</td><td></td></tr><tr><td>Mini-Prep-Plasmid-Kit</td><td>Frogga Bio</td><td>PDH300</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3.1 (Puffer für BsmBI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Oligo Clean and Concentrator</td><td>Zymo Research</td><td>D4061</td><td></td></tr><tr><td>Oligo Cleanup-Kit</td><td>Zymo Research</td><td>D4060</td><td></td></tr><tr><td>PAGE gereinigter Illumina-Sequenzierungsprimer</td><td>IDT DNA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR-Mikropipetten</td><td>Drummond</td><td>5-000-1001-X10</td><td></td></tr><tr><td>PEI (Polyethylenimin)</td><td>Sigma</td><td>408727-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin und Streptinomycin</td><td>Wisent</td><td>450-201-EL</td><td></td></tr><tr><td>pLKO-Cre</td><td>Addgene</td><td>158032</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin</td><td>Sigma</td><td>P2636-100MG</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>pXPR502-PPH-Cre</td><td>Addgene</td><td>256776</td><td></td></tr><tr><td>Q5 Polymerase 2x Master Mix</td><td>NEB</td><td>M0494L</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorometrische Quantifizierung</td><td>Invitrogen</td><td>Q33327</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-Cas9-EGFP</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#024857</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-TdTomato Mäuse</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#007909</td><td></td></tr><tr><td>SapI</td><td>NEB</td><td>R0569L</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>NEB</td><td>M0202L</td><td></td></tr><tr><td>Ultrazentrifugenrohre</td><td>Beckman Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Vakuum-Filter-Einheiten</td><td>Fisher Scientific</td><td>SCHVU02RE</td><td></td></tr></tbody></table>

paralleles in vivo-screening von gen-knockout und -aktivierung in der mammarisdrüse der maus

Parallel In Vivo Screening of Gene Knockout and Activation in the Mouse Mammary Gland

Paralleles In vivo-Screening von Gen-Knockout und -Aktivierung in der Mammarisdrüse der Maus

Forward genetics screens are routinely employed to perturb thousands of genetic elements in a pooled fashion with the goal of producing large-scale ...

parallel-vivo-screening-gene-knockout-activation-mouse-mammary

Research

Forschung

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Diese Methode beschreibt, wie zu sezieren und zu bewerten Brustdrüse Entwicklung und Funktion von Mäusen. Abgeschnittene Milchdrüsen sind für den Grad der Entwicklung mit whole mount beurteilt, während Milchspendereflex wird ausgewertet, wobei Oxytocin-basierte myoepithelialen Zelle Kontraktion Assay.

Evaluation der Brustdrüse Entwicklung und Funktion in Mausmodellen

Zeitraffer-Bildgebung verwendet wird, um das Verhalten von primären präneoplastischen Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen Brustkrebsrisiko abgeleitet, um zu bestimmen, ob es Korrelationen zwischen spezifischen Verhaltensparametern und unterschiedlichen genetischen Läsionen sind beurteilen.

Zeitraffer-Imaging of Primary Präkanzeröse Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen der Breast Cancer Abgeleitet

Ein Protokoll für die nicht-invasive intraductal Lieferung von wässrigen Reagenzien zu der Brustdrüse der Maus beschrieben. Die Methode nutzt lokalisierte Injektion in den Brustwarzen der Brustdrüsen Targeting Milchgänge speziell. Diese Technik ist für eine Vielzahl von Verbindungen, einschließlich siRNA, chemotherapeutischen Mitteln und kleinen Molekülen anpaßbar.

Intraduktale Injection für Lokalisierte Drug Delivery auf die Maus Milchdrüse

Die Aktivierung von latenten Mutationen mit Adenovirus-Cre im duktalen System der Brust führt zu einem klinisch relevanten metastasierten Brustkrebs. Der Einbau eines YFP-Promotors ermöglicht die Verfolgung von distalen metastasierten Tumorzellen. Dieses Modell ist nützlich, um latente Metastasen und Anti-Tumor-Immunität zu untersuchen und neuartige Immuntherapien zur Behandlung von Brustkrebs zu entwickeln.

Initiation Metastasierende Mammakarzinom durch Targeting des duktalen Epithel mit Adenovirus-Cre: Eine neue transgene Maus-Modell der Brustkrebs

Krebs ist eine komplexe Erkrankung, die durch den den Tumor umgebenden Gewebes sowie lokale pro- und anti-inflammatorischen Mediatoren beeinflusst wird. Daher kann orthotrope Pritzer, anstatt subkutanen Modellen nützlich sein, um Krebsprogression in einer Weise, dass eine bessere ahmt menschlichen Pathologie studieren.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Hier beschreiben wir das Standardprotokoll für die Erkennung von β-Galaktosidase Aktivität in frühen ganze Maus-Embryonen und die Methode für die Paraffin-Schnitt und gegenfärbung. Dies ist ein einfaches und schnelles Verfahren, Genexpression während der Entwicklung zu überwachen, auch die Gewebeschnitte, angewendet werden können, Organe oder kultivierten Zellen.

Tracing Genexpression durch Nachweis der Aktivität der β-Galaktosidase in ganze Mausembryonen

Das Ziel dieses Protokolls ist es, einen neuen Ansatz zur Modellierung von Brustkrebs zu beschreiben, der auf der intraduktiven Injektion von Cre-expressing adenovirus in Maus-Mammary-Drüsen basiert. Dieser Ansatz ermöglicht sowohl eine zelltyp- als auch organspezifische Manipulation onkogener Ereignisse in zeitlich kontrollierter Weise.

Modellierung von Brustkrebs über eine intraduktive Injektion des Cre-expressingAvirus in die Maus-Mammary Drüse

Patientenbasierte Xenograft-Modelle (PDX) und transplantierbare gentechnisch veränderte Mausmodelle rekapitulieren menschliche Krankheiten originalgetreu und sind bevorzugte Modelle für die grundlegende und translationale Brustkrebsforschung. Hier wird eine Methode beschrieben, Brusttumorfragmente orthotopisch in das Brustfettpolster zu transplantieren, um die Tumorbiologie zu untersuchen und die Arzneimittelreaktion zu bewerten.

Orthotope Transplantation von Brusttumoren als präklinische Modelle für Brustkrebs

Dieses Protokoll beschreibt ein neuartiges Brustbildfenster mit einem austauschbaren Deckel (R.MIW). Die intravitale Mikroskopie nach Implantation des R.MIW ermöglicht eine Längs- und Mehrtagesbildgebung der gesunden und erkrankten Brustdrüse mit zellulärer Auflösung während der verschiedenen Entwicklungsstadien.

Längsschnittliche intravitale Mikroskopie unter Verwendung eines Brustbildgebungsfensters mit austauschbarem Deckel

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine einfache Technik zur intravitalen Bildgebung der Milchdrüse der laktierenden Maus mittels konfokaler Laserscanning- und Multiphotonenmikroskopie.

Intravitale subzelluläre Mikroskopie der Brustdrüse

Das vorliegende Protokoll beschreibt die intraduktale Injektion von viralen Vektoren über die Zitze, um Gene von Interesse in die Brustepithelzellen einzuschleusen.

Im lebenden Organismus Gentransfer in Brustepithelzellen der Maus durch intraduktale Injektion in der Brust

Mount Sinai Hospital.  Dieses Protokoll beschreibt einen skalierbaren intraduktalen CRISPR-Screening-Ansatz, der parallele in vivo Gen-Knockout- und Aktivierungsstudien in der Mammarydrüse der Maus ermöglicht.

Paralleles In vivo-Screening von Gen-Knockout und -Aktivierung in der Mammarisdrüse der Maus

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