Name: Integriertes Protokoll zur Beurteilung der meningealen Lymphatik: Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung, meningeale Dissektion und Ganz-Mount-Färbung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T14:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Lernen Sie ein integriertes Protokoll zur Beurteilung meningealer Lymphgefäße in Mäusen mittels Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung und Ganz-Mount-Färbung. Diese Methode ermöglicht funktionelle und morphologische Analysen.

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	<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels.">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523, 337-341 (2015).</li><li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules.">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J Exp Med. 212, 991-999 (2015).</li><li>Sandrone, S., Moreno-Zambrano, D., Kipnis, J., Van Gijn, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+(delayed)+history+of+the+brain+lymphatic+system.">A (delayed) history of the brain lymphatic system.</a> Nat Med. 25, 538-540 (2019).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+alzheimer's+disease.">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and alzheimer's disease.</a> Nature. 560, 185-191 (2018).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+regulate+brain+tumor+drainage+and+immunity.">Meningeal lymphatic vessels regulate brain tumor drainage and immunity.</a> Cell Res. 30, 229-243 (2020).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+mediate+neurotropic+viral+drainage+from+the+central+nervous+system.">Meningeal lymphatic vessels mediate neurotropic viral drainage from the central nervous system.</a> Nat Neurosci. 25, 577-587 (2022).</li><li>Rustenhoven, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+alterations+in+meningeal+immunity+drive+impaired+cns+lymphatic+drainage.">Age-related alterations in meningeal immunity drive impaired cns lymphatic drainage.</a> J Exp Med. 220, (2023).</li><li>Kodama, T., Hatakeyama, Y., Kato, S., Mori, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+fluid+drainage+pathways+in+lymphatic+vessels+and+lymph+nodes+using+a+mouse+model+to+test+a+lymphatic+drug+delivery+system.">Visualization of fluid drainage pathways in lymphatic vessels and lymph nodes using a mouse model to test a lymphatic drug delivery system.</a> Biomed Opt Express. 6, 124-134 (2015).</li><li>Banerjee, R., Knauer, L. A., Yang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+in+vivo+and+in+vitro+study+of+lymphatic+valve+formation+driven+by+shear+stress+signaling+pathway.">Protocol for in vivo and in vitro study of lymphatic valve formation driven by shear stress signaling pathway.</a> STAR Protoc. 4, 102141 (2023).</li><li>Akwii, R. G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+dermal+lymphatic+endothelial+cell+isolation.">Murine dermal lymphatic endothelial cell isolation.</a> J Vis Exp. (197), e65393 (2023).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> J Vis Exp. (135), e57378 (2018).</li><li>Hsieh, Y. T., Chen, S. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+analysis+of+neuromuscular+junctions+using+immunofluorescence.">Visualization and analysis of neuromuscular junctions using immunofluorescence.</a> Bio Protoc. 14, e5076 (2024).</li><li>Banerji, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyve-1,+a+new+homologue+of+the+cd44+glycoprotein,+is+a+lymph-specific+receptor+for+hyaluronan.">Lyve-1, a new homologue of the cd44 glycoprotein, is a lymph-specific receptor for hyaluronan.</a> J Cell Biol. 144, 789-801 (1999).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatics+affect+microglia+responses+and+anti-abeta+immunotherapy.">Meningeal lymphatics affect microglia responses and anti-abeta immunotherapy.</a> Nature. 593, 255-260 (2021).</li><li>Betsholtz, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+controversies+in+meningeal+biology.">Advances and controversies in meningeal biology.</a> Nat Neurosci. 27, 2056-2072 (2024).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathol. 137, 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+eeg+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high eeg delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Sci Adv. 5, eaav5447 (2019).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+posture+on+brain+glymphatic+transport.">The effect of body posture on brain glymphatic transport.</a> J Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>ACSF (Artificial Cerebrospinal Fluid)</td><td>Tocris&nbsp;&nbsp;</td><td>Cat# 3525</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Esel anti-Ratte IgG (1:1000 Verdünnung)</td><td>Invitrogen</td><td>Cat# A-21208</td><td></td></tr><tr><td>Antifade-Montagemedium</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0126</td><td></td></tr><tr><td>Gummetaktzange</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F12011-10</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST023</td><td></td></tr><tr><td>Deckgläser</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Gebogene scharfe Zange</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F11003-11</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# D9542</td><td></td></tr><tr><td>Enthaarungscreme</td><td>Veet</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale-10 cm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# 150464</td><td></td></tr><tr><td>Einmal-Intravenöse (IV) Infusionsnadel</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol-75%</td><td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td><td>Cat# 80176961</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum</td><td>Excell</td><td>Cat# FSD500</td><td></td></tr><tr><td>Filter-0,22 &micro;m</td><td>Merck Millipore&nbsp;</td><td>Cat# SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Glasobjektträger</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Isoamylalkohol</td><td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td><td>Cat# 10003218</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>PerkinElmer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozange</td><td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td><td>Cat# ZD372RB&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Mikroschere</td><td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td><td>Cat# ZO13056R</td><td></td></tr><tr><td>Mikroinjektionsnadel (25 &micro;L)</td><td>Shanghai Gaoge Industry &amp; Trade&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mikroinjektionspumpe</td><td>Voyage Power</td><td>Cat# QHZS-001A</td><td></td></tr><tr><td>Maus: C57BL/6 Wildtyp, 8 Wochen alt, männlich&nbsp;</td><td>Cavens</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Nadel-30G</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Normale Kochsalzlösung</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST341</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin, Alexa Fluor&trade; 647 Konjugat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# O34784</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd-Fixierlösung-4%</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0099</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 Schlauch</td><td>Shanghai Qiujing Biochemical Reagent and Instrument</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Phosphat-gepufferte Salzlösung (1x PBS)</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST447</td><td></td></tr><tr><td>Ratte anti-LYVE-1 (1:200 Verdünnung)</td><td>Santa Cruz</td><td>Cat# sc-65647</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Jonec</td><td>Cat# JSZ6</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktischer Rahmen</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# 68030</td><td></td></tr><tr><td>Gerade Schere</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# S12007-10</td><td></td></tr><tr><td>Spritze-1-mL&nbsp;</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Gewebekleber I</td><td>3M Vetbond</td><td>Cat# 1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# T48402</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>Cat# T8787</td><td></td></tr><tr><td>VS120 Hochdurchsatz-Fluoreszenz-Imaging-System</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

integriertes protokoll zur beurteilung der meningealen lymphatik: cisterna-magna-injektion, lymphknotenbildgebung, meningeale dissektion und ganz-mount-färbung

Integrated Protocol for Assessing Meningeal Lymphatics: Cisterna Magna Injection, Lymph Node Imaging, Meningeal Dissection, and Whole-Mount Staining

Integriertes Protokoll zur Beurteilung der meningealen Lymphatik: Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung, meningeale Dissektion und Ganz-Mount-Färbung

Meningeal lymphatic vessels (MLVs) have emerged as critical regulators of central nervous system (CNS) homeostasis, and MLVs dysfunction has been ...

integrated-protocol-for-assessing-meningeal-lymphatics-cisterna-magna

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Durchführung der Cisterna Magna Kanülierung (CMc), minimalinvasiv, Tracer, Substrate und Signalmoleküle in den Liquor cerebrospinalis (CSF) zu liefern. In Kombination mit verschiedenen Bildgebungsverfahren ermöglicht CMc Glymphatic System sowie CSF Dynamik Bewertung und Gehirn-weite Lieferung verschiedener Verbindungen.

Kanüle Implantation in die Cisterna Magna von Nagetieren

Dieses Protokoll beschreibt eine Technik, um verschiedene Zellpopulationen in entwässernden Lymphknoten ohne Veränderungen in der Organstruktur abzubilden.

Visualisierung der Lymphknotenstruktur und Zelllokalisierung mittels Ex-Vivo Konfokalmikroskopie

Wir beschreiben eine intrazisternale Injektion, die eine an der Spitze gebogene Nadel verwendet, die zum Schädel stabilisiert werden kann, wodurch das Risiko einer Schädigung des darunter liegenden Parenchyms beseitigt wird. Der Ansatz kann für die genetische Schicksalskartierung und Manipulation von Leptomeningealzellen und für die Verfolgung der Bewegung von Zerebrospinalflüssigkeit verwendet werden.

Induktion von Leptomeningealzellen Modifikation über intrazisternale Injektion

Ein Protokoll wird vorgestellt, das gewebeclearing mit Derobogenfluoreszenzmikroskopie (LSFM) kombiniert, um dreidimensionale und zelluläre Auflösungsbilder der Lymphgefäße und Lymphknoten (LNs) zu erhalten, die die Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) und die spinale Epiduralanflüssigkeit sammeln.

Dreidimensionale Bildgebung der wirbelförmigen lymphatischen Vaskulatur und Drainage mit iDISCO+ und Lichtbogenfluoreszenzmikroskopie

In dieser Arbeit werden zwei optimierte Protokolle für die Untersuchung von residenten und peripher abgeleiteten Immunzellen innerhalb des zentralen Nervensystems, einschließlich des Gehirns, des Rückenmarks und der Hirnhäute, vorgestellt. Jedes dieser Protokolle trägt dazu bei, die Funktion und Zusammensetzung der Zellen zu bestimmen, die diese Kompartimente unter stationären und entzündlichen Bedingungen besetzen.

Isolierung von Geweben des Zentralnervensystems und zugehörigen Hirnhäuten für die nachgeschaltete Analyse von Immunzellen

Um die Regulierung des zerebralen Blutflusses in vivo zu untersuchen, sind traditionelle pharmakologische Methoden invasiv und schädigen oft den Schädel, die Dura und die Leptomeninge. In dieser Arbeit haben wir eine minimal-invasive Technik entwickelt, die die Nanoinjektor-gesteuerte intrazisternale Magna (ICM) Injektion mit Laser-Speckle-Kontrastbildgebung kombiniert, um die Integrität des Schädels und der Leptomeninge zu erhalten.

Gepaarter Cisterna Magna Nanoinjektions- und Laser-Speckle-Kontrastbildgebungs-Assay zur Untersuchung der Regulierung des zerebralen Blutflusses in vivo

Das Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Injektion von Tumorzellen über den perkutanen Punktionsweg in die Cisterna magna, das bei Mäusen eine robuste leptomeningeale Metastasierung induziert und so das Trauma und die extrakranielle Tumorlast reduziert.

Minimalinvasives Cisterna magna-Injektionsmodell für Studien zur leptomeningealen Metastasierung bei Mäusen

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um die Schritte zur Anastomosierung entweder des tiefen zervikalen Lymphknotens oder seines afferenten Lymphgefäßes mit der hinteren Gesichtsvene bei der Ratte klar zu definieren, den Einfluss anderer Variablen zu minimieren und die Durchführung chirurgischer Forschung zu standardisieren.

Chirurgische Protokolle für die tiefe zervikale lymphovenöse Anastomose im Rattenmodell: Lymphknoten- und Lymphgefäßanastomosen

Dieses experimentelle Protokoll demonstriert ein tiefes zervikales Lymphkanal-Rattenmodell, das eine direkte und quantitative Beurteilung des lymphatischen Abflusses aus dem Kopfbereich ermöglicht. Das Modell erleichtert eine detaillierte Analyse von aus dem zentralen Nervensystem (ZNS) abgeleiteten gelösten Stoffen, Immunzellpopulationen sowie der Verteilung und Clearance von ZNS-gezielten Therapeutika.

Zervikales Lymphkanal-Rattenmodell zur Bestimmung des lymphatischen Transports vom Kopf und Gehirn

Dieses Protokoll bewertet den lymphatischen Abfluss nach einer Fraktur, indem es die Nahinfrarotbildgebung von Indocyanin Green(ICG) mit Ultraschall kombiniert, um die Entfernung des plantaren ICG und die Vergrößerung des poplitealen Lymphknotens bei Mäusen zu quantifizieren.

Die Beurteilung des lymphatischen Abflusses mittels ICG-Nahinfrarotbildgebung und Ultraschall nach einem Bruch

Lernen Sie ein integriertes Protokoll zur Beurteilung meningealer Lymphgefäße in Mäusen mittels Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung und Ganz-Mount-Färbung. Diese Methode ermöglicht funktionelle und morphologische Analysen.

Integriertes Protokoll zur Beurteilung der meningealen Lymphatik: Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung, meningeale Dissektion und Ganz-Mount-Färbung (Video) | JoVE Journal

Integriertes Protokoll zur Beurteilung der meningealen Lymphatik: Cisterna-Magna-Injektion, Lymphknotenbildgebung, meningeale Dissektion und Ganz-Mount-Färbung

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