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	<li>Almansour, N. M. Triple-negative breast cancer: brief review about epidemiology, risk factors, signaling pathways, treatment and role of artificial intelligence. Front Mol Biosci. 9, 836417 (2022).</li>
	<li>Nedeljkovic, M., Damjanovic, A. Mechanisms of chemotherapy resistance in triple-negative breast cancer-how we can rise to the challenge. Cells. 8 (9), 957 (2019).</li>
	<li>Bianchini, G., Balko, J. M., Mayer, I. A., Sanders, M. E., Gianni, L. Triple-negative breast cancer: challenges and opportunities of a heterogeneous disease. Nat Rev Clin Oncol. 13 (11), 674&#8211;690 (2016).</li>
	<li>Holohan, C., Van Schaeybroeck, S., Longley, D. B., Johnston, P. G. Cancer drug resistance: an evolving paradigm. Nat Rev Cancer. 13 (10), 714&#8211;726 (2013).</li>
	<li>Flavahan, W. A., Gaskell, E., Bernstein, B. E. Epigenetic plasticity and the hallmarks of cancer. Science. 357 (6348), eaal2380 (2017).</li>
	<li>Beretta, G. L. et al. Novel insights into taxane pharmacology: update on drug resistance mechanisms, immunomodulation and drug delivery strategies. Drug Resist Updat. 81, 101223 (2025).</li>
	<li>Sajid, A., Rahman, H., Ambudkar, S. V. Advances in the structure, mechanism and targeting of chemoresistance-linked ABC transporters. Nat Rev Cancer. 23 (11), 762&#8211;779 (2023).</li>
	<li>Szakacs, G., Paterson, J. K., Ludwig, J. A., Booth-Genthe, C., Gottesman, M. M. Targeting multidrug resistance in cancer. Nat Rev Drug Discov. 5 (3), 219&#8211;234 (2006).</li>
	<li>Robey, R. W. et al. Revisiting the role of ABC transporters in multidrug-resistant cancer. Nat Rev Cancer. 18 (7), 452&#8211;464 (2018).</li>
	<li>Chen, Z. et al. Mammalian drug efflux transporters of the ATP binding cassette (ABC) family in multidrug resistance: review of the past decade. Cancer Lett. 370 (1), 153&#8211;164 (2016).</li>
	<li>You, D., Richardson, J. R., Aleksunes, L. M. Epigenetic regulation of multidrug resistance protein 1 and breast cancer resistance protein transporters by histone deacetylase inhibition. Drug Metab Dispos. 48 (6), 459&#8211;480 (2020).</li>
	<li>Shalem, O., Sanjana, N. E., Zhang, F. High-throughput functional genomics using CRISPR-Cas9. Nat Rev Genet. 16 (5), 299&#8211;311 (2015).</li>
	<li>Doench, J. G. Am I ready for CRISPR? User&#39;s guide to genetic screens. Nat Rev Genet. 19 (2), 67&#8211;80 (2018).</li>
	<li>Yedier-Bayram, O. et al. EPIKOL, chromatin-focused CRISPR/Cas9-based screening platform, to identify cancer-specific epigenetic vulnerabilities. Cell Death Dis. 13 (8), 710 (2022).</li>
	<li>Gottesman, M. M., Lavi, O., Hall, M. D., Gillet, J. P. Toward better understanding of the complexity of cancer drug resistance. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 56, 85&#8211;102 (2016).</li>
	<li>Theile, D., Staffen, B., Weiss, J. ATP-binding cassette transporters as pitfalls in selection of transgenic cells. Anal Biochem. 399 (2), 246&#8211;250 (2010).</li>
	<li>Yedier-Bayram, O. et al. Chromatin-focused genetic and chemical screens identify BRPF1 as a targetable vulnerability in Taxol-resistant triple-negative breast cancer. Exp Mol Med. 57 (6), 1294&#8211;1307 (2025).</li>
	<li>Gokbayrak, B. et al. Identification of selective SWI/SNF dependencies in enzalutamide-resistant prostate cancer. Commun Biol. 8 (1), 169 (2025).</li>
	<li>Kala, E. Y. et al. Functional genomic screens reveal RBBP4 as key regulator of cell cycle progression in TMZ-resistant glioblastoma. bioRxiv. doi:10.1101/2025.05.09.653010 (2025).</li>
	<li>Chan, K., Tong, A. H. Y., Brown, K. R., Mero, P., Moffat, J. Pooled CRISPR-based genetic screens in mammalian cells. J Vis Exp. 151, e59780 (2019).</li>
	<li>Yuan, Y. et al. Genome-wide CRISPR screen for unveiling radiosensitive and radioresistant genes. J Vis Exp. 219, e67982 (2025).</li>
	<li>Stewart, C., Manriquez Roman, C., Kenderian, S. S. Performing an in vitro genome-wide CRISPR knockout screen in chimeric antigen receptor T cells. J Vis Exp. 215, e67338 (2025).</li>
	<li>Joung, J. et al. Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening. Nat Protoc. 12 (4), 828&#8211;863 (2017).</li>
	<li>Li, W. et al. MAGeCK enables robust identification of essential genes from genome-scale CRISPR/Cas9 knockout screens. Genome Biol. 15 (12), 554 (2014).</li>
	<li>McDermott, M. et al. In vitro development of chemotherapy and targeted therapy drug-resistant cancer cell lines: practical guide with case studies. Front Oncol. 4, 40 (2014).</li>
	<li>Hart, T. et al. High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities. Cell. 163 (6), 1515&#8211;1526 (2015).</li>
	<li>Meyers, R. M. et al. Computational correction of copy number effect improves specificity of CRISPR-Cas9 essentiality screens in cancer cells. Nat Genet. 49 (12), 1779&#8211;1784 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 mm Platte</td><td>Corning</td><td>353003</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>45 &micro;m Filter&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLHVM33RS</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>6-Well-Platte</td><td>Corning</td><td>3506</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>96-Well schwarze Platten mit klarem Boden</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS356259</td><td>Für CellTiter-Glo Lumineszierende Zelllebensfähigkeitsanalyse</td></tr><tr><td>Blasticidin</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1113903</td><td>Für Selektion</td></tr><tr><td>CellTiter-Glo Lumineszenz-Zelllebensfähigkeitsanalyse</td><td>CellTiter-Glo, Promega</td><td>G7570</td><td>Für CellTiter-Glo Lumineszierende Zelllebensfähigkeitsanalyse</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td></td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>PanReac AppliChem</td><td>A3672,0050</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Ham&rsquo;s F12 Nährstoffgemisch</td><td>Gibco</td><td>11765054</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>HEK293T-Zellen</td><td></td><td></td><td>Freundliche Geschenke von Robert Weinberg (MIT, Boston, USA).</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Thermo Fisher</td><td>15630080</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4001-1G</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>LentiCas9-blast</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#52962</td><td>Für die Erzeugung einer Cas9-stabilen Zelllinie</td></tr><tr><td>LentiGuide-Puro&nbsp;</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#52963</td><td>Backbone für gRNA-Klonierung&nbsp;</td></tr><tr><td>MN NucleoSpin Gewebe-Kit</td><td>Macherey-Nagel</td><td>740952.5</td><td>Für die genomische DNA-Extraktion</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>10010023</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>pLentiCRISPR v2&nbsp;</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#52961</td><td>Backbone für gRNA-Klonierung&nbsp;</td></tr><tr><td>Polyethylenglykol (PEG)-8000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2139-500G</td><td>Für die Konzentration von Lentiviren</td></tr><tr><td>Polyethylenimin, linear (PEI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>765090-1G</td><td>Für die Lentivirenproduktion</td></tr><tr><td>Protaminsulfat (PS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4380-25G</td><td>Für die Lentivireninfektion</td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene&nbsp;</td><td># 12260</td><td>Für die Lentivirenproduktion</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1113803</td><td>Für Selektion</td></tr><tr><td>SUM159PT adhärente Zellen</td><td></td><td></td><td>Freundliche Geschenke von Robert Weinberg (MIT, Boston, USA).</td></tr><tr><td>Taxol</td><td>Paclitaxel, Sigma</td><td>PHR1803-200MG</td><td>Für die Erzeugung und Aufrechterhaltung von RES-Zellen</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,05%)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>25300054</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Verapamil</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S4202</td><td>Für Selektion</td></tr><tr><td>VSV-G</td><td>Addgene&nbsp;</td><td># 8454</td><td>Für die Lentivirenproduktion</td></tr></tbody></table>

epigenomweite crispr-cas9-basierte knockout-screens an chemoresistenten zellen

Epigenome-Wide CRISPR-Cas9-Based Knockout Screens on Chemoresistant Cells

Epigenomweite CRISPR-Cas9-basierte Knockout-Screens an chemoresistenten Zellen

Chemotherapy resistance remains a major challenge in cancer treatment, driven by cancer cells&#39; ability to acquire adaptive properties, rewire ...

Wir untersuchen epigenetische Mechanismen, die bei triple-negativem Brustkrebs zur Chemoresistenz führen, mithilfe von CRISPR-basierten Screening-Methoden. Zunächst werden etwa 159 PT-Adhärenzzellen auf 2 mal 10 hoch 3 Zellen pro Vertiefung in 96-Loch-Schwarz-Klarsicht-Bodenplatten mit Ham's F-12 Nährstoffmischung, ergänzt um die angegebenen Komponenten, eingestellt. Die Zellen werden 16 Stunden lang in einem Zellkulturinkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid inkubiert.Bereiten Sie als Nächstes einen Taxol-Grundstoff vor, der in Dimethylsulfoxid oder DMSO gelöst ist. Zum Behandeln der Zellen stellen Sie serielle Verdünnungen von Taxol in Kulturmedium her, die von 0,3 Nanomolar bis 10 Mikromolar reichen, und verwenden Sie reines DMSO als Fahrzeugkontrolle. Behandeln Sie die Zellen in dreifacher Ausführung mit jeweils 200 Mikrolitern steigender Taxol-Dosen.Das Plate 72 Stunden lang bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid in einem Zellkulturinkubator belassen. Nach 72 Stunden Behandlung mit dem Wirkstoff die Zellviabilität mittels eines lumineszenzbasierten ATP-Quantifizierungsassays bestimmen. Die Lumineszenz mit einem Mikroplattenreader messen und die Ergebnisse auf die DMSO-Kontrollwerte normalisieren.Als Nächstes berechnen Sie die 10 %- und 50 %-Hemmungskonzentrationswerte mithilfe einer nichtlinearen Regression mit einem vierparametrigen logistischen Dosis-Wirkungs-Modell in geeigneter statistischer Software. Um chemoresistente Zellen zu erzeugen, säen Sie 2 × 10⁵ SKOV-3-PT-Zellen pro Vertiefung in 6-Loch-Platten aus und inkubieren sie über Nacht bei 37 °C mit 5 % Kohlendioxid.Am nächsten Tag die Zellen mit 10 % oder 50 % hemmenden Konzentrationen von Taxol in zwei Milliliter Kulturmedium für 72 Stunden behandeln. Wenn die Zellen die derzeitige Wirkstoffkonzentration vertragen, sie in zwei Vertiefungen aufteilen. Eine als Backup-Kontrolle mit frischem Medium belassen und die Taxolkonzentration in der anderen Vertiefung verdoppeln.Während der Erzeugung resistenter Zellen passagieren Sie die ursprünglichen Zellen in Medium, das DMSO als Kontrolle enthält, und passen Sie das DMSO-Volumen so an, dass es der Menge entspricht, die in der entsprechenden Behandlung mit Taxol vorhanden ist. Messen Sie die Zellviabilität alle drei bis vier Wochen, bis ein signifikanter Unterschied in den Werten der 50 %igen Hemmkonzentration zwischen den ursprünglichen und den resistenten Zelllinien beobachtet wird. Kultivieren Sie die stabil resistenten Zellen weiterhin in der endgültigen Taxol-Konzentration, die während der Dosiserhöhung verwendet wurde.Zur Charakterisierung resistenter Zellen führen Sie eine RNA-Sequenzierung, eine Western-Blot-Analyse, eine qPCR und Zellviabilitätsassays in Anwesenheit des Wirkstoffs durch. Säen Sie jeweils 159 PT Taxol-resistente und parentale Zellen in Dreifachbestimmung in 96-Well-Schwarz-Transparent-Bodenplatten mit 2 × 10³ Zellen pro Vertiefung aus. Inkubieren Sie die Zellen über Nacht bei 37 °C mit 5 % Kohlendioxid.Behandeln Sie die Zellen mit Verdünnungsreihen von Verapamil in Zweifelverdünnungsschritten, die von 80 Mikromolar bis 1,25 Mikromolar reichen, wobei eine konstante Taxol-Konzentration in allen Behandlungsbedingungen beibehalten wird. Nach 72-stündiger Behandlung wird die Zellviabilität mittels eines lumineszenzbasierten ATP-Quantifizierungsassays bestimmt. Ermitteln Sie die Verapamil-Konzentration, die die Zellviabilität erhält und gleichzeitig die Empfindlichkeit in resistenten Zellen wiederherstellt.Um die in Kombination mit Verapamil zu verwendende Puromycin-Konzentration zu bestimmen, säen Sie etwa 159 PT Taxol-resistente Zellen in eine 96-Well-Platte mit 2 × 10³ Zellen pro Well. Inkubieren Sie die Platte 16 Stunden bei 37 °C und 5 % Kohlendioxid. Bereiten Sie zweifache serielle Verdünnungen von Puromycin im Bereich von 40 bis 0,625 µg/mL in Medium vor, das die zuvor bestimmte Verapamil-Konzentration enthält.Behandeln Sie die Zellen entsprechend 72 Stunden lang mit den Puromycin-Dilutionen. Nach dem Vitalitätsassay ermitteln Sie die niedrigste Puromycin-Konzentration, die die Vitalität in Gegenwart von Verapamil auf 5 % oder weniger reduziert. Verwenden Sie anschließend einige 159 PT Taxol-resistente Zellen, um die virale Titerbestimmung und die Multiplizität der Infektion zu berechnen.Geben Sie das berechnete Volumen des Cas9-Lentivirus, basierend auf der gewünschten Multiplizität der Infektion, direkt zu den Zellen in Kulturmedium mit acht Mikrogramm pro Milliliter Protaminsulfat hinzu. Ersetzen Sie das virale Medium 16 Stunden nach der Infektion durch frisches Medium. Am nächsten Tag wenden Sie die Blasticidin-Selektion an, indem Sie das Kulturmedium durch Medium mit der zuvor bestimmten Konzentration an Blasticidin ersetzen.Setzen Sie die Selektion fort, bis nicht infizierte Zellen eliminiert sind. Validieren Sie die Cas9-Aktivität mit Kontroll-einzelnen Leit-RNAs für essentielle Gene oder verwenden Sie GFP als Reporter, um die Knockout-Effizienz zu bewerten. Berechnen Sie die Anzahl der erfolgreich infizierten Zellen, die erforderlich ist, um die gewünschte Bibliotheksabdeckung zu erreichen, mithilfe der angegebenen Gleichung.Bereiten Sie unabhängige Infektionsgemische für jede biologische Wiederholung vor. Nach dem Ansäen der zuvor berechneten Zellen infizieren Sie diese mit einem bestimmten Virenvolumen in acht Millilitern vollständigem Kulturmedium, das acht Mikrogramm pro Milliliter Protaminsulfat enthält. Ersetzen Sie nach 16 Stunden das virale Medium durch frisches Medium und inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid.Wenden Sie eine Puromycin-Selektion in Gegenwart von Verapamil in den zuvor bestimmten Konzentrationen an, um sg-RNA-infizierte Zellen in etwa 159 PT Taxol-resistenten Zellen anzureichern. Setzen Sie die Selektion fort, bis alle Zellen in der nicht infizierten Kontrollkultur eliminiert sind. In der Regel dauert dies etwa drei Tage.Nach Abschluss der Puromycin- und Verapamil-Selektion die Zellen abspalten und einen initialen Zeitpunkt, das Zeit-Null-Zellpellet, aus jedem biologischen Replikat entsprechend dem während der Transduktion festgelegten Abdeckungsgrad sammeln. Die Zellen in experimentelle Ansätze aufteilen, wobei die Abdeckung beibehalten wird. Ein Ansatz dient als Kontrolle mit DMSO.Und die andere als Behandlung mit Taxol. Kultivieren Sie die Zellen für 14 bis 16 Teilungszyklen. Berechnen Sie die Anzahl der Teilungszyklen anhand der angegebenen Formel.Überwachen Sie bei jedem Passagieren die Zellviabilität und das Wachstumskinetik. Halten Sie eine ausreichende Zellanzahl aufrecht, um Engpässe zu vermeiden. Sobald der gewünschte Grad an Bevölkerungsverdopplung erreicht ist, sammeln Sie die Endpunktpellets für jede Wiederholung und Bedingung, wobei die Bibliotheksabdeckung pro Pellet erhalten bleibt.Lagern Sie die Pellets bei 80 Grad Celsius, bis die genomische DNA-Extraktion in nachgeschalteten Schritten erfolgt. Resistente Zellen proliferierten weiterhin, trotz Behandlung mit Taxol, während die ursprünglichen Zellen unter denselben Bedingungen nicht überlebten. Die RNA-Sequenzierung identifizierte ABCB1 als eines der am stärksten hochregulierten Gene in resistenten Zellen, gefolgt von anderen ABC-Transportern, einschließlich ABCB4 und ABCA5.Die Hochregulation der ABCB1-Expression in resistenten Zellen wurde mittels quantitativer PCR bestätigt. Taxol-resistente Zellen zeigten ein Multidrug-Resistenz-Phänotyp sowie Resistenz gegenüber Doxorubicin und Vincristin. Die Puromycin-Selektion könnte in resistenten Zellen ineffizient sein, da Puromycin über einen ABCB1-vermittelten Arzneimittelausfluss ausgeschleust werden kann.Verapamil allein hatte keinen Einfluss auf die Zellviabilität. In Kombination mit chemotherapeutischen Wirkstoffen stellte Verapamil jedoch die Empfindlichkeit gegenüber diesen Mitteln wieder her. Nicht-toxische Dosen von Verapamil stellten außerdem die Empfindlichkeit gegenüber Puromycin in Taxol-resistenten Zellen wieder her.Wenn die Proben der letzten Zeitpunkte aus den mit DMSO oder Taxol behandelten Bedingungen mit dem Anfangszeitpunkt verglichen wurden, waren nahezu alle essentiellen Gene nach dem Knockout verarmt, was die Qualität des Screenings bestätigt. Im Gegensatz dazu zeigte der Vergleich der Endpunktproben aus den mit DMSO und Taxol behandelten Gruppen keine Verminderung der essentiellen Gene, da diese Gene in beiden Gruppen weiterhin essentiell bleiben. Stattdessen macht dieser Vergleich epigenetische Modifikatoren sichtbar, die die Empfindlichkeit gegenüber Taxol erhöhen.Mehrere positive Kontrollgene und epigenetische Modifikatoren waren in der EPIKOL-Analyse, die in Taxol-resistenten Zellen durchgeführt wurde, signifikant verarmt. Auf ABCB1 abzielende einzelsträngige Leit-RNAs waren spezifisch in der mit Taxol behandelten Gruppe verarmt, was ABCB1 als positive Kontrolle für die Taxol-Sensitivität im Screening bestätigt. Dieses Protokoll ermöglicht es Forschern, die Therapieresistenz in Krebsmodellen zu untersuchen und epigenetische Regulatoren der Chemotherapie-Resistenz mittels CRISPR-Screening-Plattformen zu identifizieren.Die wichtigste Überlegung beim Screening von chemoresistenten Zellen ist die Aufrechterhaltung der Bibliotheksdarstellung und die Optimierung der Transduktions- und Selektionsbedingungen. Zukünftige Arbeiten werden therapeutische Anfälligkeiten von multiresistenten Krebszellen identifizieren und neuartige kombinatorische Ansätze zur Überwindung der Chemoresistenz entwickeln.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

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