Name: Eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung der Dynamik von Lipidtröpfchen und Organellen während der Mitose in Hepatomzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Erfahren Sie eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung von Lipidtröpfchen-Dynamik während der Mitose in Hepatomzellen. Dieses Protokoll ermöglicht reproduzierbare Untersuchungen zur Organellenbiologie und Krebszellphysiologie.

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<ol><li>Wang, G., Jiang, Q., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitotic+kinases+in+coupling+the+centrosome+cycle+with+the+assembly+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of mitotic kinases in coupling the centrosome cycle with the assembly of the mitotic spindle.</a> J Cell Sci. 127 (Pt 19), 4111-4122 (2014).</li>
<li>Asteriti, I. A., De Mattia, F., Guarguaglini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+AURKA+and+PLK1+in+mitotic+entry+and+spindle+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between AURKA and PLK1 in mitotic entry and spindle assembly.</a> Front Oncol. 5, 283(2015).</li>
<li>Gavet, O., Pines, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+activation+of+Cyclin+B1-CDK1+coordinates+entry+to+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Progressive activation of Cyclin B1-CDK1 coordinates entry to mitosis.</a> Dev Cell. 18 (4), 533-543 (2010).</li>
<li>Mardin, B. R., Agircan, F. G., Lange, C., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plk1+controls+the+NEK2A-PP1%CE%B3+antagonism+in+centrosome+disjunction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Plk1 controls the NEK2A-PP1γ antagonism in centrosome disjunction.</a> Curr Biol. 21 (13), 1145-1151 (2011).</li>
<li>Taguchi, N., Ishihara, N., Jofuku, A., Oka, T., Mihara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+phosphorylation+of+dynamin-related+GTPase+DRP1+participates+in+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitotic phosphorylation of dynamin-related GTPase DRP1 participates in mitochondrial fission.</a> J Biol Chem. 282 (15), 11521-11529 (2007).</li>
<li>Mitra, K., Wunder, C., Roysam, B., Lin, G., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hyperfused+mitochondrial+state+achieved+at+G1-S+regulates+cyclin+E+buildup+and+entry+into+S+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A hyperfused mitochondrial state achieved at G1-S regulates cyclin E buildup and entry into S phase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (29), 11960-11965 (2009).</li>
<li>Makiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trafficking+of+acetyl-C16-ceramide-NBD+with+long-term+stability+and+no+cytotoxicity+into+the+Golgi+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Traffic%22%5BJournal%5D)">Trafficking of acetyl-C16-ceramide-NBD with long-term stability and no cytotoxicity into the Golgi complex.</a> Traffic. 16 (5), 476-492 (2015).</li>
<li>Tang, D., Yuan, H., Vielemeyer, O., Perez, F., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+phosphorylation+of+GRASP65+during+mitotic+Golgi+disassembly%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Sequential phosphorylation of GRASP65 during mitotic Golgi disassembly.</a> Biol Open. 1 (12), 1204-1214 (2012).</li>
<li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+ste20-type+kinase+TAOK1+confers+protection+against+hepatocellular+lipotoxicity+through+metabolic+rewiring%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">Silencing of ste20-type kinase TAOK1 confers protection against hepatocellular lipotoxicity through metabolic rewiring.</a> Hepatol Commun. 7 (4), e0037(2023).</li>
<li>Makishima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translation+inhibitors+induce+formation+of+cholesterol+ester-rich+lipid+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Translation inhibitors induce formation of cholesterol ester-rich lipid droplets.</a> PLoS ONE. 7 (8), e42379(2012).</li>
<li>Krahmer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+correlation+profiles+identify+lipid+droplet+proteins+with+high+confidence%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Protein correlation profiles identify lipid droplet proteins with high confidence.</a> Mol Cell Proteomics. 12 (5), 1115-1126 (2013).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon+regulates+intracellular+distribution+of+adipose+differentiation-related+protein+during+triacylglycerol+accumulation+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Glucagon regulates intracellular distribution of adipose differentiation-related protein during triacylglycerol accumulation in the liver.</a> J Lipid Res. 51 (9), 2571-2580 (2010).</li>
<li>Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perilipins%3A+A+diversity+of+intracellular+lipid+droplet+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins.</a> Lipids Health Dis. 16 (1), 83(2017).</li>
<li>Herker, E., Vieyres, G., Beller, M., Krahmer, N., Bohnert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+contact+sites+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet contact sites in health and disease.</a> Trends Cell Biol. 31 (5), 345-358 (2021).</li>
<li>Krahmer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organellar+proteomics+and+phospho-proteomics+reveal+subcellular+reorganization+in+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Organellar proteomics and phospho-proteomics reveal subcellular reorganization in diet-induced hepatic steatosis.</a> Dev Cell. 47 (2), 205-221.e7 (2018).</li>
<li>Ramosaj, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+availability+affects+neural+stem%2Fprogenitor+cell+metabolism+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet availability affects neural stem/progenitor cell metabolism and proliferation.</a> Nat Commun. 12 (1), 7362(2021).</li>
<li>Cruz, A. L. S., Barreto, E. A., Fazolini, N. P. B., Viola, J. P. B., Bozza, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplets%3A+Platforms+with+multiple+functions+in+cancer+hallmarks%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lipid droplets: Platforms with multiple functions in cancer hallmarks.</a> Cell Death Dis. 11 (2), 105(2020).</li>
<li>Mashek, D. G., Khan, S. A., Sathyanarayan, A., Ploeger, J. M., Franklin, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+lipid+droplet+biology%3A+Getting+to+the+root+of+fatty+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Hepatic lipid droplet biology: Getting to the root of fatty liver.</a> Hepatology. 62 (3), 964-967 (2015).</li>
<li>Minami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+lipophagy+ameliorates+nonalcoholic+steatohepatitis+through+extracellular+lipid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Liver lipophagy ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through extracellular lipid secretion.</a> Nat Commun. 14 (1), 4084(2023).</li>
<li>Makiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+of+intracellular+lipid+droplets+during+cell+division+in+Huh7+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Behavior of intracellular lipid droplets during cell division in Huh7 hepatoma cells.</a> Exp Cell Res. 433 (2), 113855(2023).</li>
<li>Makiyama, T., Higashi, S., Sakane, H., Nogami, S., Shirataki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B3-taxilin+temporally+regulates+centrosome+disjunction+in+a+NEK2A-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">γ-taxilin temporally regulates centrosome disjunction in a NEK2A-dependent manner.</a> Exp Cell Res. 362 (2), 412-423 (2018).</li>
<li>Aizawa, R., Ibayashi, M., Mitsui, J., Tsukamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+formation+is+spatiotemporally+regulated+in+oocytes+during+follicular+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice.</a> J Reprod Dev. 70 (1), 18-24 (2024).</li>
<li>Ohsaki, Y., Maeda, T., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+and+permeabilization+protocol+is+critical+for+the+immunolabeling+of+lipid+droplet+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fixation and permeabilization protocol is critical for the immunolabeling of lipid droplet proteins.</a> Histochem Cell Biol. 124 (5), 445-452 (2005).</li>
<li>Helps, N., Luo, X., Barker, H., Cohen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nima-related+kinase+2+%28NEK2%29%2C+a+cell-cycle-regulated+protein+kinase+localized+to+centrosomes%2C+is+complexed+to+protein+phosphatase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Nima-related kinase 2 (NEK2), a cell-cycle-regulated protein kinase localized to centrosomes, is complexed to protein phosphatase 1.</a> Biochem J. 349 (Pt 2), 509-518 (2000).</li>
<li>O'Regan, L., Blot, J., Fry, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+regulation+by+nima-related+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Div%22%5BJournal%5D)">Mitotic regulation by nima-related kinases.</a> Cell Div. 2, 25(2007).</li>
<li>Xie, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MDT-28%2FPLIN-1+mediates+lipid+droplet-microtubule+interaction+via+DLC-1+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">MDT-28/PLIN-1 mediates lipid droplet-microtubule interaction via DLC-1 in Caenorhabditis elegans.</a> Sci Rep. 9 (1), 14902(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25% Trypsin/EDTA</td><td>Wako</td><td>201-16945</td><td>Zelldissoziation</td></tr><tr><td>10 cm Petrischale</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>35 mm Gewebekulturschale</td><td>IWAKI</td><td>3000-035</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>6 cm Gewebekulturschale</td><td>IWAKI</td><td>3010-060</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Anti-PLIN2 (ADRP) Antikörper</td><td>Proteintech</td><td>15294-1-AP</td><td>Lipidtropfenmarker</td></tr><tr><td>Anti-PLIN3 (TIP47) Antikörper</td><td>Proteintech</td><td>10694-1-AP</td><td>Lipidtropfenmarker</td></tr><tr><td>Anti-&amp;alpha;-Tubulin Antikörper</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6199</td><td>Mitosespindelmarker</td></tr><tr><td>BODIPY 493/503</td><td>Invitrogen</td><td>D3922</td><td>Neutrale Lipidfärbung</td></tr><tr><td>Flaschenhalsfilter (0,22 &amp;mu;m)</td><td>NEST</td><td>WNB343001</td><td>Sterile Filtration von OA&ndash;BSA-Lösung</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8022</td><td>Blocking-Reagenz</td></tr><tr><td>Klarlack</td><td>Handelsüblich</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Siegel von Objektträgern</td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Olympus</td><td>FV1200</td><td>Hochauflösende Bildgebung</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>Kernfärbung</td></tr><tr><td>D-PBS (&ndash;)</td><td>Wako</td><td>049-29793</td><td>Zellkultur</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle&rsquo;s Medium (DMEM)</td><td>Wako</td><td>041-30081</td><td>Zellkulturmedium</td></tr><tr><td>Ethanol (99,5%)</td><td>Wako</td><td>057-00456</td><td>Lösungsmittel für Ölsäure</td></tr><tr><td>Fettsäurefreies BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td>Trägerprotein für Ölsäure</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Mediumzusatz</td></tr><tr><td>Fluoreszierende Sekundärantikörper (Alexa Fluor&ndash;konjugiert)</td><td>Handelsüblich</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Artenspezifische Sekundärantikörper für Immunfluoreszenz</td></tr><tr><td>FV10-ASW Software</td><td>Olympus</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Bilderfassung und -verarbeitung</td></tr><tr><td>Glasobjektträger (&phi;15 mm)</td><td>Matsunami</td><td>2-176-03</td><td>Zellbefüllung für Mikroskopie</td></tr><tr><td>Glasmikroskop-Objektträger</td><td>Matsunami</td><td>SFF-001</td><td>Glasscheiben zum Montieren von Objektträgern</td></tr><tr><td>Glutaraldehyd (25% ige Lösung)</td><td>Wako</td><td>073-00536</td><td>Alternative Fixierung für PLIN3</td></tr><tr><td>HuH7-Zellen</td><td>JCRB Cell Bank</td><td>JCRB0403</td><td>Menschliche Hepatozelllinie</td></tr><tr><td>LipidTOX Red Neutral Lipid Stain</td><td>Invitrogen</td><td>H34476</td><td>Alternative Lipidtropfenfärbung</td></tr><tr><td>Stickstoffgas (N2)</td><td>Handelsüblich</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Verdampfung von Ethanol</td></tr><tr><td>Ölsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1383</td><td>Zur Herstellung von Ölsäure&ndash;BSA-Konjugaten</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd, 4% in PBS</td><td>Nacalai Tesque</td><td>09154-85</td><td>Fixierung</td></tr><tr><td>Penicillin&ndash;Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Antibiotika</td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (&times;10)</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Kann durch jeden Anbieter ersetzt werden</td></tr><tr><td>RO-3306</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0569</td><td>CDK1-Inhibitor für G2/M-Synchronisation</td></tr><tr><td>SlowFade Diamond Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>S36963</td><td>Einbettungsmittel</td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td>Herstellung von 150 mM NaCl</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid (NaOH)</td><td>Wako</td><td>080-01061</td><td>Verwendet für die Verseifung von Ölsäure</td></tr><tr><td>Tali Cellular Analysis Slides</td><td>Thermo</td><td>T10794</td><td>Verwendet für die Zellzyklusanalyse</td></tr><tr><td>Tali Image-based Cytometer</td><td>Thermo</td><td>Nicht zutreffend</td><td>Verwendet für die Zellzyklusanalyse</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Zellpermeabilisierung</td></tr><tr><td>Weitfeld-Fluoreszenzmikroskop</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Schnelle Untersuchung von mitotischen Zellen</td></tr></tbody></table>

eine fluoreszenzbasierte methode zur visualisierung der dynamik von lipidtröpfchen und organellen während der mitose in hepatomzellen

A Fluorescence-Based Method To Visualize Lipid Droplet And Organelle Dynamics During Mitosis in Hepatoma Cells

Synchronisation von Hepatomzellen an der G2/M-Grenze mit RO-3306
Um die Dynamik intrazellulärer Organellen während der Mitose zu untersuchen, wurde RO-3306, ein selektiver CDK1-Inhibitor, verwendet, um die Zellen an der G2/M-Grenze20,21 zu synchronisieren. Wenn Zellen 20 Stunden lang mit dem CDK1-Inhibitor behandelt wurden, gefolgt von weiteren 1 Stunde in einem frischen Medium, waren über 50 % der Zellen an der G2/M-G...

Eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung der Dynamik von Lipidtröpfchen und Organellen während der Mitose in Hepatomzellen

Intracellular lipid droplets (LDs) are ubiquitous in several cell types. LDs store neutral lipids such as triacylglycerol and cholesteryl ester and play ...

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Biology

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Hier präsentieren wir Ihnen ein detailliertes Protokoll für die Anwendung von Rhodamin 123 zu identifizieren das mitochondriale Membranpotential (MMP) und CLIC4 Zuschlag-induzierte HN4 Zelle Apoptosis in-vitro-Studie. Unter gemeinsamen Fluoreszenzmikroskop und konfokale Laser scanning Fluoreszenzmikroskop war die Änderung des Echtzeit-die MMP aufgezeichnet.

Erkennung von Mitochondrien-Membran-Potential, CLIC4 Knockdown-induzierte HN4 Zelle Apoptosis In-vitro- Studie

Efferocytosis, die phagocytic Entfernung der Apoptotic Zellen ist erforderlich, um die Homöostase und wird erleichtert durch die Rezeptoren und Signalwege, die für die Anerkennung, Engulfment und Internalisierung der Apoptotic Zellen ermöglichen. Hier präsentieren wir ein Fluoreszenz-Mikroskopie-Protokoll für die Quantifizierung des Efferocytosis und die Aktivität der Efferocytic Signalwege.

Quantifizierung der Efferocytosis durch einzellige Fluoreszenz-Mikroskopie

Dieses Protokoll beschreibt einen Test für die Charakterisierung der Lipidtröpfchenbildung (LD) bei menschlichen Darmorganoiden bei Stimulation mit Fettsäuren. Wir diskutieren, wie dieser Assay für die Quantifizierung der LD-Bildung verwendet wird, und wie er für ein Hochdurchsatz-Screening für Medikamente verwendet werden kann, die die LD-Bildung beeinflussen.

Ein fluoreszenzbasierter Assay zur Charakterisierung und Quantifizierung der Lipidtropfenbildung bei menschlichen Darmorganoiden

Mitophagie ist der primäre Mechanismus der mitochondrialen Qualitätskontrolle. Die Bewertung der Mitophagie in vivo wird jedoch durch das Fehlen zuverlässiger quantitativer Assays behindert. Hier wird ein Protokoll zur Beobachtung der Mitophagie in lebenden Zellen unter Verwendung eines zellpermierten grün-fluoreszierenden Mitochondrienfarbstoffs und eines rot fluoreszierenden Lysosomenfarbstoffs vorgestellt.

Visualisierung der Mitophagie mit Fluoreszenzfarbstoffen für Mitochondrien und Lysosomen

In dieser Arbeit demonstrieren wir ein optimiertes BODIPY 493/503 Fluoreszenz-basiertes Protokoll zur Charakterisierung von Lipidtröpfchen in Lebergewebe. Durch die Verwendung von orthogonalen Projektionen und 3D-Rekonstruktionen ermöglicht der Fluorophor eine erfolgreiche Unterscheidung zwischen mikrovesikulärer und makrovesikulärer Steatose und kann einen komplementären Ansatz zu den klassischen histologischen Protokollen zur Beurteilung der hepatischen Steatose darstellen.

Analyse fluoreszenzgefärbter Lipidtröpfchen mit 3D-Rekonstruktion zur Beurteilung der Lebersteatose

Das vorliegende Protokoll beschreibt, wie man ölrotes O verwendet, um Lipidtröpfchen (LDs) zu färben, die Größe und Anzahl von LDs in einem Fettsäure-induzierten Fetthepatozytenmodell zu berechnen und BODIPY 493/503 zu verwenden, um den Prozess der Verschmelzung kleiner LDs zu großen LDs durch Lebendzellbildgebung zu beobachten.

Evaluierung der Lipidtröpfchengröße und -fusion in bovinen Leberzellen

Diese Technik beschreibt einen effektiven Arbeitsablauf zur Visualisierung und quantitativen Messung des mitochondrialen Membranpotentials und des Superoxidspiegels in HeLa-Zellen mittels fluoreszenzbasierter Live-Bildgebung.

Fluoreszenzbasierte Quantifizierung des mitochondrialen Membranpotentials und des Superoxidspiegels mittels Live-Bildgebung in HeLa-Zellen

Lipophagie ist eine selektive Form der Autophagie, bei der Lipidtröpfchen abgebaut werden. Funktionsstörungen in diesem Prozess werden mit der Entstehung von Krebs in Verbindung gebracht. Die genauen Mechanismen sind jedoch noch nicht vollständig verstanden. Dieses Protokoll beschreibt quantitative Bildgebungsansätze, um das Zusammenspiel zwischen Autophagie, Fettstoffwechsel und Krebsprogression besser zu verstehen.

Erforschung der Regulation des Lipidtröpfchen-Katabolismus durch Lipophagie

GFP-Fusionsproteine ​​sind weit verbreitet, um Organellen durch konfokale Mikroskopie sichtbar zu machen. Allerdings Screening auf Mutationen, die die Morphologie der Organellen beeinflussen erfordert in der Regel individuelle Mutagenese und zeitaufwändig ist. Hier zeigen wir eine Methode, um gleichzeitig aufzunehmen Organellen-GFP-Marker in fast 5.000 Nicht-essentielle Gene in Hefe.

Ein High-Throughput-Verfahren zur global Studie der Organellen-Morphologie in S. cerevisiae

Die Hallo-C-Methode ermöglicht unvoreingenommene, genomweite Identifizierung von Chromatin-Wechselwirkungen (1). Hallo-C Paare Ligationssysteme und massiv parallele Sequenzierung. Die resultierenden Daten können verwendet werden, um genomische Architektur auf mehreren Skalen zu studieren: die ersten Ergebnisse identifizierten Features wie Chromosom Gebiete, Segregation von offenen und geschlossenen Chromatin und Chromatin-Struktur an der Megabasen.

Hallo-C: eine Methode, um die dreidimensionale Architektur des Genoms Study.

Erfahren Sie eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung von Lipidtröpfchen-Dynamik während der Mitose in Hepatomzellen. Dieses Protokoll ermöglicht reproduzierbare Untersuchungen zur Organellenbiologie und Krebszellphysiologie.

Eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung der Dynamik von Lipidtröpfchen und Organellen während der Mitose in Hepatomzellen (Video) | JoVE Journal

Eine fluoreszenzbasierte Methode zur Visualisierung der Dynamik von Lipidtröpfchen und Organellen während der Mitose in Hepatomzellen

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