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	<li>Wood SH et al. Circadian clock mechanism driving mammalian photoperiodism. Nat Commun. 2020;11:4291.</li>
	<li>Wikelski M et al. Avian circannual clocks: adaptive significance and possible involvement of energy turnover in their proximate control. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008;363:411-23.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>90000-786</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Alkoholbrennerflamme</td><td>Wards</td><td>470346-104</td><td>Zum Sterilisieren von Inokulationsschleife</td></tr><tr><td>Ammoniumeisensulfat-Hexahydrat</td><td>Supelco</td><td>FX0245-1</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Ammoniumnitrat (NH4NO3)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT134170-250G</td><td>Für Minimalmedien</td></tr><tr><td>Autoklav</td><td>VWR International</td><td>76683-456</td><td>Zum Sterilisieren von Glaswaren und Medien</td></tr><tr><td>Biologische Sicherheitskabinett</td><td>ThermoFischer Scientific&nbsp;</td><td>1323TS</td><td>Zur Reduzierung der Kontamination der Platten und des Labors.</td></tr><tr><td>Biotin</td><td>VWR</td><td>97061-444</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien</td></tr><tr><td>Borsäure (H3BO3)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>100503-696</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Calciumchlorid (CaCl2)</td><td>AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLC</td><td>JT1311-1</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien</td></tr><tr><td>Calciumchlorid-Dihydrat (CaCl2·2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506-25G</td><td>Für Minimalmedien</td></tr><tr><td>Zitronensäure-Monohydrat (C6H8O7·H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1002440500</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Kupfersulfat-Pentahydrat (CuSO4·5H2O H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT121245-1KG</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>71001-754</td><td>Zum Entfernen von Konidien von der Plattenoberfläche und zum Sterilisieren von Inokulationsschleifen</td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ</td><td>National Institutes of Health (NIH)</td><td>N/A</td><td>Zum Analysieren von Bildern/Zählen</td></tr><tr><td>Handschuhe</td><td>SW Safety Solutions</td><td>76382-944</td><td>Zum Schutz</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Zum Durchführen statistischer Tests und Erstellen von Grafiken</td></tr><tr><td>Wachstumskammer</td><td>Caron Products &amp; Services</td><td>6320 &amp; 6340 Serie</td><td>Programmierbar für Photoperiodenzyklen</td></tr><tr><td>HOBO Datenlogger</td><td>Onset Computer Corporation</td><td>MX2202</td><td>Zum Aufzeichnen von Lichtintensität und Temperatur</td></tr><tr><td>Inokulationsschleife</td><td>VWR International</td><td>10806-354</td><td>Zum Übertragen von Pilzmaterial auf Petrischalen</td></tr><tr><td>Magnesiumsulfat-Heptahydrat (MgSO4·7H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT145380-1KG</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Mangansulfat-Monohydrat (MnSO4·H2O H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1059410250</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Mikroskop (Leica S6 D Greenough Stereomikroskop)</td><td>Leica Microsystems</td><td>10446297</td><td>Zum Abbilden</td></tr><tr><td>Neurospora crassa FGSC 2489</td><td>Fungal Genetics Stock Center</td><td>74-OR23-1VA, JCM19069</td><td>Pilzstamm</td></tr><tr><td>Papierhandtücher</td><td>Kimberly-Clark Professional, Scott und Kleenex</td><td>6666114</td><td>Zum Gießen von Medien</td></tr><tr><td>Permanent Marker</td><td>Sharpie</td><td>30072</td><td>Zum Beschriften von Platten</td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>VWR International</td><td>25384-164</td><td>Zum Ausgießen von synthetischen Kreuzungsmedien</td></tr><tr><td>Pipetten</td><td>VWR International</td><td>75816-090</td><td>Zum Gießen von Medien</td></tr><tr><td>Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT225070-500G</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Kaliumnitrat (KNO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221295-100G</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien</td></tr><tr><td>Kleine Einweg-Glas-Teströhrchen</td><td>VWR International</td><td>470211-698</td><td>Für anfängliches Pilzstammwachstum</td></tr><tr><td>Natriumchlorid (NaCl)</td><td>VWR International</td><td>BDH9286-500G</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien</td></tr><tr><td>Natriumcitrat-Dihydrat (Na3C6H5O7·2H2O)</td><td>VWR</td><td>97061-008</td><td>Für Minimalmedien</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid (NaOH)</td><td>AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLC</td><td>JT5635-2</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien</td></tr><tr><td>Natriummolybdat-Dihydrat (Na2MoO4·2H2O)</td><td>Supelco</td><td>1.06524.1000</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>VWR International</td><td>BDH9308-500G</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr><tr><td>Zinksulfat-Heptahydrat (ZnSO4·7H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT122545-500G</td><td>Für synthetische Kreuzungsmedien/Minimalmedien</td></tr></tbody></table>

plattenbasierte bildgebungsanalyse zur quantifizierung photoperiodischer reaktionen in neurospora crassa mittels protoperithecia-entwicklung

Plate-Based Imaging Assay for Quantifying Photoperiodic Responses in Neurospora crassa Using Protoperithecia Development

Nach der Impfung mit dem Wildtyp-Stamm bedeckten Konidien innerhalb von 36–48 Stunden die SC-Oberfläche. Nach 7 Tagen Photoperiod-Exposition bildete sich eine dichte konidiale Schicht, die mit einem mit 70 % Ethanol getränkten Papiertuch entfernt wurde (Abbildung 1). Dieser Schritt legte die zugrundeliegende Protoperithezie frei, ohne deren Struktur zu stören. Unter der Mikroskopie erschienen Protoperithecien als dunkle, kreisförmige Strukturen, die über die Plattenoberfläche verteilt sind. ...

Plattenbasierte Bildgebungsanalyse zur Quantifizierung photoperiodischer Reaktionen in Neurospora crassa mittels Protoperithecia-Entwicklung

Neurospora crassa is a well-established model organism for studying biological timing and light-regulated development. The Protoperithecia Assay (PPA) is ...

plate-based-imaging-assay-for-quantifying-photoperiodic-responses

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier präsentieren wir eine neuartige Ca 2+ -Imaging Ansatz unter Verwendung eines Biolumineszenz Reporter. Dieser Ansatz verwendet einen fusionierten Konstrukts GFP-Aequorin, das Ca 2+ bindet und emittiert Licht, wodurch die Notwendigkeit für Lichtanregung. Deutlich Dieses Verfahren ermöglicht lange kontinuierliche Bildgebung, Zugang zu tiefen Hirnstrukturen und hoher zeitlicher Auflösung.

In Vivo Functional Brain Imaging Ansatz, der auf Bioluminescent Calciumindikator GFP-Aequorin

Die innere Uhr reguliert etwa ein Drittel der Arabidopsis Transkriptom, aber der Prozentsatz der Gene, die zurück in die Zeitnahme ernähren bleibt unbekannt. Hier visualisieren wir eine Methode, um schnell circadian Phänotypen in jeder Mutantenlinie von Arabidopsis beurteilen mit lumineszenten Bildgebung eines zirkadianen Reporter vorübergehend in Protoplasten ausgedrückt.

Schnelle Analyse von Circadian Phänotypen in Arabidopsis Protoplasten Transfizierte mit einem lumineszenten Clock Reporter

Die Verwendung eines angepassten "olfaktorischen Chips" für die effiziente Kalzium Imaging von C. Elegans Männchen ist hier beschrieben. Studien über männliche Einwirkung von Glycerin und ein Pheromon werden ebenfalls angezeigt.

Verwenden einen angepasste mikrofluidischen olfaktorische Chip für die Bildgebung neuronaler Aktivität als Reaktion auf Pheromone in männlichen C. Elegans Kopf Neuronen

Hier stellen wir einen kombinatorischen Ansatz vor, bei dem hochauflösende Mikroskopie, Rechenwerkzeuge und Einzellen-Beschriftungen in lebenden C. eleganischen Embryonen verwendet werden, um die Einzelzellendynamik während der Neuroentwicklung zu verstehen.

Isotrope Licht-Sheet-Mikroskopie und automatisierte Zelllineage-Analysen zu Katalog-Caenorhabditis elegans Embryogenese mit subzellulärer Auflösung

Vitale Fluoreszenzfarbstoffe sind wesentliche Werkzeuge für livezellbildende Analysen in der modernen Pilzzellbiologie. Dieses Papier beschreibt die Anwendung etablierter und weniger bekannter Fluoreszenzfarbstoffe zur Verfolgung der Plasmamembrandynamik, Endo-/Exozytose und Zellwandmorphogenese in fadenförmigen Pilzen.

Anwendung von Membran- und Zellwandselektiven Fluoreszenzfarbstoffen für die Live-Zell-Bildgebung von filamentösen Pilzen

Hier stellen wir eine nicht-radioaktive und nichtinvasive Methode zur Bewertung der de novo Proteinsynthese in vivo vor und beschreiben sie unter Verwendung des Nematoden Caenorhabditis elegans und der Fluoreszenzrückgewinnung nach dem Photobleichen (FRAP). Diese Methode kann mit genetischen und/oder pharmakologischen Screens kombiniert werden, um neuartige Modulatoren der Proteinsynthese zu identifizieren.

Bewertung der de novo Proteinsyntheseraten bei Caenorhabditis elegans

Ein Protokoll zur Abbildung der dynamischen Mikrotubuli in vivo unter Verwendung fluoreszierend markierten Endbindungsproteins wurde vorgestellt. Wir beschrieben die Methoden zur Markierung, Abbildung und Analyse der dynamischen Mikrotubuli im neuron posterioren lateralen Mikrotubuli (PLM) von C. elegans.

Im lebenden Organismus Beurteilung der Dynamik und Orientierung von Mikrotubuli in Caenorhabditis elegans Neuronen

Wir präsentieren ein markierungsfreies Live-Imaging-Protokoll mit Durchlichtmikroskopie-Techniken, um Bilder zu erfassen, die Wachstumskinetik des filamentösen Pilzes A. nidulans sowohl in Unterwasserkulturen als auch in festen Medien zu analysieren und zu quantifizieren. Dieses Protokoll kann in Verbindung mit der Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden.

Quantitative Analyse der Wachstumsrate von Aspergillus nidulans mittels Live-Mikroskopie und Open-Source-Software

Wir präsentieren ein Protokoll zur elektrophysiologischen Charakterisierung bistabiler Photopigmente: (i) Ausnutzung der Ladungsverschiebungen innerhalb der Photopigmentmoleküle nach Photonenabsorption und ihrer riesigen Menge in den Photorezeptoren und (ii) Ausnutzung der Absorptionsspektrenunterschiede von Rhodopsin- und Metarhodopsin-Photopigmentzuständen. Diese Protokolle sind nützlich, um nach Mutationen zu suchen, die bistabile Photopigmentsysteme betreffen.

Elektrophysiologische Methoden zur Messung des Photopigmentgehalts in Drosophila-Photorezeptoren

Die meisten schwimmenden photoautotrophen Organismen zeigen photoinduzierte Verhaltensänderungen (Photobehavior). Das vorliegende Protokoll beobachtet das besagte Photoverhalten im Modellorganismus Chlamydomonas reinhardtii.

Beobachtung des Photoverhaltens bei Chlamydomonas reinhardtii

Hier beschreiben wir ein fortschrittliches Werkzeug zur Überwachung der Chlorophyllbiosynthese in den frühen Stadien der Arabidopsis-Keimlingsentetiolierung.   Die neuartige Methodik ermöglicht eine nicht-invasive Echtzeit-Chlorophyll-Fluoreszenz-Bildgebung mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung.

Nicht-invasiver Assay zur Bestimmung der Chlorophyll-Biosynthese-Kinetik in frühen Stadien der Arabidopsis-De-etiolation

The State University of New Jersey.  Der Protoperithecia-Assay quantifiziert photoperiodische Reaktionen in Neurospora crassa, indem er die Bildung der Protoperithecia unter definierten Hell-Dunkel-Zyklen misst. Diese plattenbasierte Methode bietet einen einfachen und skalierbaren Ansatz zum Vergleich photoperiodabhängiger Entwicklungsreaktionen über experimentelle Bedingungen hinweg.

Plattenbasierte Bildgebungsanalyse zur Quantifizierung photoperiodischer Reaktionen in Neurospora crassa mittels Protoperithecia-Entwicklung

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