Name: Funktionelle Charakterisierung einzelner prä- und postsynaptischer Partner im zentralen Nervensystem der Drosophila-Larve mittels CaMPARI (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-16T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Erfahren Sie die funktionale Validierung synaptischer Konnektivität in Drosophila-Larven durch Kombination von Optogenetik und CaMPARI-basierter Calcium-Imaging. Diese Methode ermöglicht die Erfassung aktivitätsabhängiger synaptischer Signalübertragung zwischen identifizierten Neuronen in vivo.

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<table><tbody><tr><td>0,1 M Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td>Chemikalie, die in der Lösung zur Hydratation und Montage von Larven verwendet wird</td></tr><tr><td>All-trans-Retinal (ATR)&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R2500-500mg</td><td>Chemikalie, die dem Futter zugesetzt wird, um optogenetische Werkzeuge zu aktivieren</td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>ZEISS&nbsp;</td><td>LSM900 Konfokal</td><td>Konfokalmikroskop, Objektivlinse (40&times;/1,2 NA), Licht-/Laserquelle (405, 488, 561 nm)</td></tr><tr><td>Deckgläser (18x18mm)</td><td>VWR</td><td>48366-205</td><td>Zum Montieren von Tieren für die Bildgebung verwendet</td></tr><tr><td>Ethanol (95%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7023</td><td>Als Lösungsmittel für ATR-Pulver verwendet</td></tr><tr><td>Fiji (ImageJ)</td><td>Open Source</td><td>RRID:SCR_002285&nbsp;</td><td>Zur Bildanalyse verwendet</td></tr><tr><td>Prism Version 10.4.1</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>RRID:SCR_002798</td><td>Zur statistischen Analyse verwendet</td></tr><tr><td>Mikroskopobjektträger</td><td>VWR</td><td>&nbsp;48300-041</td><td>Zum Montieren von Tieren für die Bildgebung verwendet</td></tr><tr><td>Modelliermasse</td><td>Flinn Scientific</td><td>FB0600</td><td>Zum Halten des Deckglases auf dem Mikroskopobjektträger mit Larven dazwischen</td></tr><tr><td>Pinsel&nbsp;</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-204</td><td>Zum Übertragen von Larven zwischen Orten verwendet</td></tr><tr><td>Standard-Kornmehl-Agar-Medium</td><td>Genesee Scientific</td><td>66-123</td><td>Futter kann auch mit ähnlichen Standardrezepten und Zutaten hergestellt werden</td></tr><tr><td>Standard Drosophila Plastikröhrchen (25mm x 95mm Drosophila schmale Röhrchen)</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-109</td><td>Große Röhrchen oder Flaschen können ebenfalls verwendet werden</td></tr><tr><td>Drei-Wellen-Mikro-Spot-Platte</td><td>Electron Microscopy Sciences&nbsp;</td><td>71561-01</td><td>Platte zur Trennung und Reinigung einzelner Larven</td></tr><tr><td>Drosophila-Stamm (Genotyp: w; Basin4-LexA/CyO-TwGFP; ppk-GAL4/ppk-GAL4)&nbsp;</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center</td><td>RRID:BDSC_54899 &amp; RRID:BDSC_32079</td><td>Erhalten durch Rekombination von RRID:BDSC_54899 und RRID:BDSC_32079</td></tr><tr><td>Drosophila-Stamm (Genotyp: w, UAS-IVS-CsChrimson.mVenus, LexAOp-CaMPARI2; Sp/CyO)</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center</td><td>RRID:BDSC_81085</td><td>Erhalten durch Rekombination von RRID:BDSC_81085 mit Markern des zweiten Chromosoms</td></tr></tbody></table>

funktionelle charakterisierung einzelner prä- und postsynaptischer partner im zentralen nervensystem der drosophila-larve mittels campari

Functional Characterization of Individual Pre- and Postsynaptic Partners In the Drosophila Larval Central Nervous System Using CaMPARI

Funktionelle Charakterisierung einzelner prä- und postsynaptischer Partner im zentralen Nervensystem der Drosophila-Larve mittels CaMPARI

Connectome studies have greatly expanded understanding of synaptic connectivity in the nervous systems of various species. While characterization of ...

functional-characterization-individual-pre-postsynaptic-partners

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Elektrophysiologische Aufzeichnung in der Drosophila Embryo

Dissection und Imaging von aktiven Zonen in der Drosophila Neuromuskulären Synapse

Microarray-Analyse wurde durchgeführt, um genetische Expression Profile in...

Bestimmung genetischer Expressionsprofile in C. elegans Verwenden Microarray-und Real-time PCR

Die dendritischen Verzweigung sensorischen Neuronen...

Morphologische Analyse Drosophila Larven peripheren sensorischen Neuron Dendriten und Axone mit Genetic Mosaike

Dieses Protokoll zeigt, wie Proximity Ligation Assay kann verwendet werden, um in situ Protein-Protein-Wechselwirkungen an der Drosophila Larvenneuromuskulären Verbindung nachzuweisen. Mit dieser Technik werden Discs großen und Hu-li tai Shao gezeigt, um einen Komplex an der postsynaptischen Region, eine Vereinigung die vorher durch Co-Immunpräzipitation identifiziert bilden.

Detektion In-situ- Protein-Protein-Komplexe bei der Drosophila Larven Neuromuskuläre Junction Mit Proximity Ligation Assay

Hier zeigen wir , wie die Anzahl und die räumliche Verteilung der synaptischen aktiven Zonen in Drosophila melanogaster Photorezeptoren zu quantifizieren, markiert mit einem genetisch molekularen Marker codiert und deren Modulation nach längerer Einwirkung von Licht.

Analyse Synaptische Modulation von<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Photorezeptoren nach der Einwirkung von Längerer Licht

Hier stellen wir ein Protokoll für ein Mosaik Markierungstechnik, die die Visualisierung von Neuronen aus einer gemeinsamen Vorläuferzelle in zwei verschiedenen Farben abgeleitet ermöglicht. Dies erleichtert die neuronale Abstammungslinie Analyse mit der Fähigkeit, Geburts Datierung einzelner Neuronen und das Studium der Genfunktion in den gleichen Neuronen verschiedener Individuen.

Zell Lineage Analysen und Genfunktion Studien mit Twin-Spot MARCM

Synaptische Ströme können fokal aus visualisierten synaptischen Boutons bei der Drosophila dritte Instar Larven neuromuskulären Synapse aufgenommen werden. Diese Technik ermöglicht die Überwachung der Tätigkeit von einem einzigen synaptische Bouton.

Fokale Macropatch Aufnahmen der synaptischen Ströme aus der Drosophila larvalen neuromuskulären Synapse

Hier stellen wir ein Protokoll vor, mit dem vor- und/oder postsynaptisches Kalzium im Kontext des Drosophila-Lernens und -Gedächtnisses visualisiert werden kann. In vivo Kalzium-Bildgebung mit synaptisch lokalisierten Kalziumsensoren wird mit einem klassischen olfaktorischen Konditionierungsparadigma kombiniert, so dass die synaptische Plastizität, die dieser Art des assoziativen Lernens zugrunde liegt, bestimmt werden kann.

In Vivo Optische Calcium-Bildgebung der lerninduzierten synaptischen Plastizität bei Drosophila melanogaster

Wir beschreiben eine Methode zur retrograden Rückverfolgung der embryonalen motorischen Neuronen Von Drosophila mit lipophilen Fluoreszenzfarbstoffen.

Retrograde Tracing von Drosophila Embryonal Motor Neuronen mit lipophilen fluoreszierenden Farbstoffen

Wir beschreiben ein Protokoll zur Messung von Kontakten zwischen Zellen in benachbarten Epithelschichten in lebenden Drosophila-Flügel-Imaginalscheiben unter Verwendung eines GFP-rekonstitutionsbasierten Ansatzes.

Ein GFP-komplementäres Dual-Expressionssystem zur Beurteilung des durch Cytoneme vermittelten Zell-Zell-Kontakts in lebenden Drosophila-Flügel-Imaginalscheiben

Erfahren Sie die funktionale Validierung synaptischer Konnektivität in Drosophila-Larven durch Kombination von Optogenetik und CaMPARI-basierter Calcium-Imaging. Diese Methode ermöglicht die Erfassung aktivitätsabhängiger synaptischer Signalübertragung zwischen identifizierten Neuronen in vivo.

Funktionelle Charakterisierung einzelner prä- und postsynaptischer Partner im zentralen Nervensystem der Drosophila-Larve mittels CaMPARI (Video) | JoVE Journal

Funktionelle Charakterisierung einzelner prä- und postsynaptischer Partner im zentralen Nervensystem der Drosophila-Larve mittels CaMPARI

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