Name: Principles of ortsspezifische Rekombinase (SSR)-Technologie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:11:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Erfahren Sie die Mechanismen der ortsspezifischen Rekombinase-Technologie für bedingte Mutagenese mit dem Cre/lox-System. Diese Methode ermöglicht präzise genetische Manipulationen in vivo.

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principles of ortsspezifische rekombinase (ssr)-technologie

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Ortsspezifische Rekombinase (SSR)-Technologie ermöglicht die Manipulation der Genstruktur die Genfunktion zu erkunden und hat sich zu einem unverzichtbaren Werkzeug der Molekularbiologie. Site-spezifische Rekombinasen sind Proteine, die an bestimmte DNA-Zielsequenzen binden. Das Cre / lox-System wurde zum ersten Mal in Bakteriophagen in den 1980er Jahren beschrieben. Cre-Rekombinase ist ein Typ-I-Topoisomerase, die ortsspezifische Rekombination von DNA katalysiert zwischen zwei loxP (Ort der X-over P1) Seiten. Das Cre / lox-System benötigt keine Kofaktoren. LoxP-Sequenzen enthalten verschiedene Bindungsstellen für Cre-Rekombinase, die eine gerichtete Kernsequenz wo Rekombination und Umlagerung erfolgt umgeben. Wenn Zellen loxP-Seiten enthalten und drücken die Cre-Rekombinase, kommt es zu einer Rekombination Veranstaltung. Doppelsträngige DNA ist an beiden loxP-Stellen durch die Rekombinase Cre geschnitten, neu geordnet und ligiert (&quot;Schere und Kleber&quot;). Die Produkte der Rekombination Veranstaltung auf die relative Orientierung der asymmetrischen Sequenzen ab. SSR-Technologie wird häufig als ein Werkzeug, um Genfunktionen erforschen. Hier das Gen von Interesse ist mit Cre Zielstellen loxP (&quot;floxed&quot;) flankiert. Die Tiere werden dann mit den Tieren zum Ausdruck der Cre Rekombinase unter der Kontrolle eines gewebespezifischen Promotors gekreuzt. In Geweben, die die Rekombinase Cre ausdrücken, bindet es an Zielsequenzen und schneidet das floxed Gen. Kontrollierte Gendeletion ermöglicht die Untersuchung von Genfunktionen in bestimmten Geweben und zu unterschiedlichen Zeitpunkten. Die Analyse der Genfunktion beschäftigt SSR-Technologie --- bedingte Mutagenese - hat erhebliche Vorteile gegenüber herkömmlichen knock-outs, wo Gendeletion ist häufig tödlich.

Das Aufkommen der ortsspezifische Rekombinase (SSR)-Technologie und des Cre / lox-System hat zu zahlreichen Fortschritte in der Molekularbiologie geführt, und hat sich als ein wertvolles Instrument für die Beurteilung der Funktion von Genen in transgenen Tieren. Dieses Interview beschreibt den Mechanismus der ortsspezifischen Rekombination durch Cyclisierung Rekombinase (Cre) und wie der Einsatz dieses Enzyms hat zur Entwicklung des bedingten Mutagenese, die erhebliche Vorteile gegenüber herkömmlichen knock out-Strategien geführt hat.

Principles of ortsspezifische Rekombinase (SSR)-Technologie

Die ortsspezifische Rekombinase-Technologie (SSR) ermöglicht die Manipulation der Genstruktur zur Untersuchung der Genfunktion und ist zu einem unverzichtbaren Werkzeug der molekularen ...

Hallo, mein Name ist Frank Buchholz. Ich bin Gruppenleiter am Max-Planck-Institut für molekulare Zellbiologie und Genetik. Und unsere Arbeit wird aufrechterhalten.Unsere Arbeit umfasst zwei Aspekte. Der eine bezieht sich auf das RNA-I-Screening. Der andere bezieht sich auf die Entwicklung ortsspezifischer Rekombinasen für die fortgeschrittene Genom-Editierung.Mein Hintergrund ist der eines Biologen, eines Molekularbiologen, und ich habe Biologie studiert. Anschließend absolvierte ich meine Promotion am Europäischen Laboratorium für Molekularbiologie in Heidelberg und machte danach mein Postdoc-Stipendium in San Francisco an der UCSF mit Mike Bishop, wo wir an Tiermodellen für Leukämie forschten. Das Max-Puncture-Institut hier in Dresden versucht, sozusagen mindestens zwei verschiedene Aspekte zu verbinden, nämlich Entwicklungsbiologie und Zellbiologie, mit dem grundlegenden Ziel, wie man sagen könnte, zu verstehen, wie Zellen Gewebe bilden.Das ist im Grunde das übergeordnete Ziel des Instituts hier in Ston. Wir arbeiten also im Wesentlichen in zwei Bereichen. Ein Bereich betrifft RNAi-Tests, bei denen versucht wird, neue Funktionen bisher nicht charakterisierter Gene in biologische

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Forschung

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Biology

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Aktuelle HIV-1-Strategien handeln, um den viralen Lebenszyklus zu unterdrücken, aber nicht effektiv beseitigen Infektion. Hier zeigen wir, dass ein technisch Rekombinase effizient Verbrauchsteuern integrierte HIV-1 Provirus-DNA aus dem Genom der infizierten Zellen.

Interview: HIV-1 Provirus-DNA Excision Mit einem Evolved Rekombinase

Die Hefe-Mitochondrien nucleoid Protein, Mgm101, ist ein Rad52-Typ Rekombinationsprotein die große oligomere Ringe bildet. Ein Protokoll wird beschrieben, dass lösliches rekombinantes Mgm101 vorzubereiten mit dem Maltose Binding Protein (MBP)-Tagging-Strategie mit Kationenaustausch und Größenausschlusschromatographie gekoppelt.

Vorbereitung des Mgm101 Rekombinationsprotein von MBP-based Tagging-Strategie

Gen-Targeting-Methoden können verwendet werden, um transgene Mäuse mit Knockout-, Knock-in- und getaggten Allelen zu erzeugen.  Hier beschreiben wir eine verbesserte Methode der Rekombination in E. coli, die wir als "Subklonierung plus Insertion" bezeichnen und die zur schnellen Generierung benutzerdefinierter Gen-Targeting-Vektoren verwendet werden kann.

Subklonierung Plus-Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Verfahren zur schnellen Bau der Gene Targeting Vektoren

Der linear kovalent geschlossene (LCC) DNA-Minivektor (DNA-Ministring) ist ein nicht-viraler Gentransfervektor mit hoher Transfektionseffizienz und ist für jede DNA-Verabreichungsanwendung relevant. Das Produktionssystem ist einfach, schnell und in vivo skalierbar. Das folgende Protokoll enthält eine visuelle Schritt-für-Schritt-Anleitung für die Herstellung von DNA-Ministrings.

Die Produktion von Doppelstrang-DNA-Ministrings

Hier berichten wir eine schnelle und effiziente Gen Editierverfahren basierend auf RMCE im AAVS1 Locus der menschlichen pluripotenten Stammzellen (hPSCs), die auf die zuvor beschriebenen Systeme verbessert. Mit dieser Technik können isogene Linien schnell und zuverlässig für die richtige Vergleichsstudien erzeugt, erleichtert Transgenität vermittelte Forschung mit hPSCs.

Eine schnelle und effiziente Erzeugung von rekombinanten humanen pluripotenten Stammzellen durch Rekombinase-vermittelten Kassettenaustausch in der<em&gt; AAVS1</em&gt; Locus

Hier präsentieren wir Ihnen ein detailliertes Protokoll zur Identifizierung von homologen Rekombinationsereignisse in embryonalen Stammzellen der Maus mit Southern blotting und/oder PCR. Diese Methode ist durch die Generierung von Nonmuscle Myosin II genetische Ersatz Mausmodellen mit traditionellen embryonalen Stammzell-basierte homologe Rekombination-vermittelten targeting-Technologie veranschaulicht.

Identifikation der homologen Rekombinationsereignisse in embryonalen Stammzellen der Maus mit Southern Blotting und Polymerase-Kettenreaktion

Restriktionsendonukleasen mit neuer Sequenzspezifität können aus Enzymen entwickelt werden, die eine teilweise degenerierte Sequenz erkennen. Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, das wir erfolgreich verwendet haben, um die Sequenzspezifität des NlaIV-Enzyms zu verändern. Wesentliche Bestandteile des Protokolls sind die In-vitro-Kompartimentisierung der Transkriptions-/Übersetzungsreaktion und die Auswahl von Varianten mit neuen Sequenzspezifitäten.

In Vitro gerichtete Evolution einer Restriktionsendonuklease mit strengerer Spezifität

Die AviTag-spezifische standortbeschränkte Beleuchtungsverstärkte Biotinylierung (ALIBi) ist eine neuartige optogenetetisch aktivierte Methode, die zur Markierung und Affinitätsreinigung subzellulärer Populationen von Ribosomen für die nachgelagerte Sequenzierung und proteomische Analyse entwickelt wurde.

Isolierung subzellulärer Ribosom-Subpopulationen basierend auf rekombinanten, peptid-tag-spezifischer, ortsbeschränkter Beleuchtungsverstärkter Biotinylierung

Hier berichten wir über die Generation der Tre-Rekombinase durch gezielte, molekularen Evolution. Tre-Rekombinase erkennt eine vordefinierte Ziel-Sequenz innerhalb der LTR-Sequenzen des HIV-1 Provirus, was in der Exzision und Tilgung des Provirus aus infizierten menschlichen Zellen. Während noch in den Kinderschuhen, wird gerichteten molekularen Evolution erlauben die Erstellung von benutzerdefinierten Enzyme, die als Werkzeuge der molekularen Chirurgie und Molekulare Medizin dienen.

Molekulare Evolution der Tre-Rekombinase

Bevor der Operation sollte ein neuer Chirurg eine Ausbildung in grundlegenden chirurgischen Techniken und Konzepte. Dieser Artikel wird grundlegende chirurgische Überlegungen mit einem Schwerpunkt auf Nagetiere zu präsentieren.

Principles of Surgery Nager für die New Surgeon

Erfahren Sie die Mechanismen der ortsspezifischen Rekombinase-Technologie für bedingte Mutagenese mit dem Cre/lox-System. Diese Methode ermöglicht präzise genetische Manipulationen in vivo.

Principles of ortsspezifische Rekombinase (SSR)-Technologie

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