Name: Eine definierte hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Erfahren Sie die hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren. Dieses System ermöglicht mechanistische Studien zur Brustgewebeentwicklung und frühen Karzinogenese.

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<table><tbody><tr><td>15 mL Konustuben</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Sterile Röhrchen für Gewebeverarbeitung und Zentrifugation</td></tr><tr><td>40 µm Zellsieb</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Filtrationsvorrichtung für die Herstellung von Einzelzellsuspensionen</td></tr><tr><td>40 µm Zellsieb für geringe Volumina</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Filtrationsvorrichtung für die Herstellung von Einzelzellsuspensionen</td></tr><tr><td>Automatischer Zellzähler</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Gerät zur Zellzählung und Bestimmung der Lebensfähigkeit</td></tr><tr><td>Rinderhypophysenextrakt</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Ergänzung für Epithelzellmedien</td></tr><tr><td>Zellzählungsschieber</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Doppelkammerschieber zur Zellzählung</td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Tischzentrifugen/en müssen eine Geschwindigkeit von mindestens 500 x g aufweisen und 15 ml- und 1,5 ml-Röhrchen aufnehmen können.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kollagen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Extrazelluläres Matrixprotein zur Hydrogelbildung</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Enzym zur Gewebedissoziation</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Steriler Behälter für die kryogene Lagerung von Proben</td></tr><tr><td>Kulturgefäße (z.B. Kammerschieber, Multiwellplatten)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Plattformen für die Hydrogelablagerung und Organoidkultur.</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Kryoprotektor, der in Gefriermedium verwendet wird</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>Enzym zur sekundären Gewebedissoziation</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Enzym, das während der Zelldissoziation verwendet wird.</td></tr><tr><td>Fötales Kälberserum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Serenergänzung, die in Wasch- und Neutralisationsmedien verwendet wird</td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Komponente der extrazellulären Matrix</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Ergänzung für Epithelzellmedien</td></tr><tr><td>Humaner epidermaler Wachstumsfaktor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Ergänzung für Epithelzellmedien</td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Ergänzung für Epithelzellmedien</td></tr><tr><td>Hyaluronsäure</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Extrazelluläre Matrixkomponente für die Hydrogelformulierung</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Enzym zur Gewebedissoziation</td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Gerät zur Gewebekulturinkubation</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Ergänzung für Epithelzellmedien</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Komponente der extrazellulären Matrix</td></tr><tr><td>Mammaepithelbasmales Medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Wachstumsmedium für Epithelzellen</td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen (1,5 ml)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Röhrchen für Reaktionen mit geringem Volumen</td></tr><tr><td>Orbitalrotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Rotator zur Gewebedispersion während der enzymatischen Dissoziation</td></tr><tr><td>P1000 Pipette</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>Gerät zum Mischen und Übertragen von Volumina bis zu 1.000 µL</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Antibiotische Ergänzung für Epithelzellmedien</td></tr><tr><td>Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Pufferlösung zum Waschen und Spülen</td></tr><tr><td>Präzisionswaage</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Waage zur Gewebewägung</td></tr><tr><td>Serologische Pipette</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Pipette zur Gewinnung nicht adhäsiver Epithelzellen</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Reagenz zur Kollagenneutralisation</td></tr><tr><td>Sterile Skalpelle</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Werkzeuge zur mechanischen Gewebezerkleinerung</td></tr><tr><td>Trypanblaulösung</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Farbstoff zur Beurteilung der Zelllebensfähigkeit</td></tr><tr><td>Trypsin (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Enzymatisches Reagenz zur Zelldissoziation</td></tr><tr><td>Wasserbad (37 °C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Gerät zur kontrollierten Auftauung von Proben</td></tr></tbody></table>

eine definierte hydrogelbasierte methode zur erzeugung dreidimensionaler menschlicher brustorganoide, die die mammarienmorphogenese rekapitulieren

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Eine definierte hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

Unsere Forschung konzentriert sich auf die menschliche Brustentwicklung und Laktation, die Gewebestruktur, Umweltexpositionen sowie genetische Faktoren, die zu biologischen Veränderungen beim Krebs führen. Bestehende Modelle erfassen die Architektur des menschlichen Brustgewebes, den Entwicklungszeitpunkt und die Mikroumgebung ungenau. Dieses Protokoll schließt die Lücke zwischen 2D- und Tierversuchsmodellen in einem menschlichen System.Verwenden Sie eingefrorenes, mindestens 24 Stunden lang kryokonserviertes, verdauten menschliches Brustgewebe. Tauchen Sie das Kryoröhrchen bis zum Verschluss sofort in ein Wasserbad von 37 Grad Celsius und tauen Sie es innerhalb einer Minute schnell auf, um den Zelltod zu minimieren. Sobald das Röhrchen vollständig aufgetaut ist, überführen Sie den Inhalt in ein 15-Milliliter-Konischgefäß, das 10 Milliliter Wachstumsmedium für Brustepithelzellen (Mammary Epithelial Growth Medium, MEGM) enthält, und zentrifugieren Sie fünf Minuten bei 250 × g.Nach dem Verwerfen des Überstandes das Pellet in 500 Mikroliter einer auf 37 Grad Celsius vorgewärmten Dissoziationsenzym-Lösung mit 0,25 % Trypsin resuspendieren. Die Suspension in ein 1,5-Milliliter-Mikrozent

a-defined-hydrogel-based-method-for-generating-three-dimensional

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Wir beschreiben ein 3D-Kulturmodell des menschlichen Brustepithels, das geeignet ist, die Hormonwirkung zu untersuchen.

Ein Hormon ansprechenden 3D-Kultur Modell des menschlichen Brustdrüse Epithel

Diese Handschrift beschreibt eine weiche Lithographie-basierte Technik einheitlichen Arrays von dreidimensionalen (3D) Epithelgewebe definierter Geometrie durch extrazelluläre Matrix umgeben zu konstruieren. Dieses Verfahren ist offen für eine große Vielfalt von Zelltypen und experimentelle Kontexten und ermöglicht Hochdurchsatz-Screening von identischen Replikaten.

Technik Dreidimensionale Epithelgewebe Eingebettet in extrazellulären Matrix

Organoide, die sich aus den Meeressammrissen entwickelten, wurden bestrahlt und charakterisiert, um epitheliale Merkmale und Wechselwirkungen mit Immunzellen zu beurteilen. Bestrahlte Organoide können verwendet werden, um Wechselwirkungen mit Zellen besser zu bewerten, die zu der Rekrutierung von Tumorzellen in bestrahltem normalem Gewebe führen können.

Wachstum und Charakterisierung der bestrahlten Organoide aus den Brustdrüsen

Ein Protokoll zur Erzeugung menschlicher primärer Endometrium-Organoide, die aus epithelialer und stromaler Zellen bestehen und Eigenschaften des nativen Endometriumgewebes beibehalten, wird vorgestellt. Dieses Protokoll beschreibt Methoden von der Erfassung des Gebärmuttergewebes bis zur histologischen Verarbeitung von Endometriumorganoiden.

Generierung von mehrzelligen humanen primären Endometrium-Organoiden

Die Brustdrüse ist eine zweischichtige Struktur, die äußere myoepitheliale und innere luminale Epithelzellen umfasst. Präsentiert ist ein Protokoll zur Vorbereitung von Organoiden mit Differential-Trypsinisierung. Diese effiziente Methode ermöglicht es Forschern, diese beiden Zelltypen getrennt zu manipulieren, um Fragen über ihre Rolle in der Form und Funktion der Brustdrüse zu untersuchen.

Generierung von Mosaik-Mammary-Organoiden durch Differential-Trypsinisierung

Das Ziel dieses Protokolls ist es, Brustepithelzellen als multizelluläre Sphäroide direkt auf vorgeformte endotheliale Netzwerke zu bioprinten, um schnell 3D-Brust-Endothel-Kokulturmodelle zu erstellen, die für Arzneimittelscreening-Studien verwendet werden können.

Direkter Bioprinting von 3D Multizellulären Brustsphäroiden auf Endotheliale Netzwerke

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Entwicklung eines dreidimensionalen (3D) mikrofluidischen Modells von hoch ausgerichtetem menschlichem Herzgewebe zu erklären und zu demonstrieren, das aus Stammzellen gewonnenen Kardiomyozyten besteht, die mit Herzfibroblasten (CFs) in einem biomimetischen, kollagenbasierten Hydrogel in Kokulturiert sind, für Anwendungen in der Kardgewebeentwicklung, im Arzneimittelscreening und in der Krankheitsmodellierung.

Entwicklung von 3D-organisiertem menschlichem Herzgewebe innerhalb einer mikrofluidischen Plattform

In diesem Protokoll wird ein Ansatz zur Erzeugung von Epithelorganoiden aus primärem Normal- und Tumorbrustgewebe durch differentielle Zentrifugation erörtert. Darüber hinaus sind Anleitungen für die dreidimensionale Kultivierung sowie die Immunfluoreszenz-Bildgebung von eingebetteten Organoiden enthalten.

Erzeugung und Bildgebung von Epithelorganoiden von Mäusen und Menschen aus normalem und Tumor-Brustgewebe ohne Passaging

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Bildung von humanen iPSC-abgeleiteten Thymus-Organoiden, die in 3D-Fibrin-Hydrogelen gezüchtet werden, um die Reifung der Thymusepithelzellen (TEC) und deren verlängerte Erhaltung sowie die Thymopoese in vitro zu unterstützen.

Bildung humaner Thymus-Organoide in dreidimensionalen Fibrin-Hydrogelen

Es besteht ein dringender Bedarf an 3D-Krebsmodellen, die heterozelluläre Wechselwirkungen erfassen, um Krebsmetastasen zu untersuchen. Unsere Studie stellt die Erzeugung von heteromultizellulären Stroma-Epithel-Epithelen in einer gerüstfreien und gerüstfreien Umgebung vor, die zur Untersuchung der Invasion und der zellulären räumlichen Verteilungen verwendet werden kann.

Heteromultizelluläre Stromazellen in gerüstfreien 3D-Kulturen von Epithelkarzinomzellen treiben die Invasion voran

Erfahren Sie die hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren. Dieses System ermöglicht mechanistische Studien zur Brustgewebeentwicklung und frühen Karzinogenese.

Eine definierte hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren (Video) | JoVE Journal

Eine definierte hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren

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