Name: In-vitro-Markierung von humanen embryonalen Stammzellen für Magnetic Resonance Imaging (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-03T14:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 41 s
Description: Erfahren Sie die Markierung humaner embryonaler Stammzellen mit Mangan(II)-chlorid für die Magnetresonanztomografie. Diese Methode ermöglicht die verlässliche Darstellung lebensfähiger Zellen über Kalziumkanäle.

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Mangan Kennzeichnung von humanen embryonalen Stammzellen <ol><li> Trypsinize der humanen embryonalen stammt, die in Feeder-freien Bedingungen für 5 Minuten wurden kultiviert. Neutralisieren des Trypsins durch Zugabe von Nährmedien. </li><li> Spin down die Zellen durch Zentrifugation bei 800 rpm für 5 Minuten bei 20 ° Celsius. Nach Resuspendieren des Zellpellets, zählen die Anzahl der Zellen durch Trypanblau-Färbung. Basierend auf der Zellzahl erhalten, teilen sich die Zellen in vier Aliquots von 3 Millionen Zellen in konische Rohre. Pellet die Zellen wieder abzentrifugiert. </li><li> Kurz vor dem Start der Mangan-Kennzeichnung, lösen sich frische Manganchlorid mit 0,9% Natriumchlorid-Lösung, um eine 0,1 Millimeter Manganchloridlösung machen. </li><li> Um Calcium-Kanal-Aktivität zu beobachten, wurden vier Proben hergestellt. Die erste Probe wird unserer Kontrolle, welche Zellen in 0,9% Natriumchlorid allein inkubiert enthält. Die zweite Probe enthält Zellen in 0,1 mM MnCl 2 inkubiert. Beispiel 3 und 4 enthalten Zellen in 0,1 mM MnCl 2 entweder mit 5 uM der Ca 2 +-Kanal-Agonisten inkubiert (S )-(-)- Bay K8644 oder 250 uM der Ca 2 +-Kanal-Antagonisten, Verapamil. Inkubieren Sie die vier Proben bei 37 ° Celsius mit 5% CO 2 für 30 Minuten. </li><li> Nach 30 Minuten Spin-Down die Zellen bei 800 rpm für 5 Minuten bei 20 ° Celsius. Dann saugen Sie den Überstand und waschen Sie die markierten Zellen zweimal mit PBS. Nach dem Waschen wieder auszusetzen jedes Pellet mit 200 ul PBS und Überführung in PCR-Röhrchen. Diese Pellets werden in der Regel weiß. </li></ol> Eisen Kennzeichnung von humanen embryonalen Stammzellen <ol><li> Mix klinisch-grade Protaminsulfat mit destilliertem Wasser zu einer 1 mg / ml Stammlösung erhalten. </li><li> In ein Röhrchen mit menschlichen embryonalen Stammzellen Kulturmedien, fügen ferumoxides bei 100 ug / ml durch Zugabe von 12 ug / ml Protaminsulfat gefolgt. Mischen Sie die Lösung kräftig für fünf Minuten. </li><li> Add gemischte Lösung, die gleiche Menge des Zellkulturmedien zu einer Endkonzentration von 50 ug / ml ferumoxides und 6 pg / mL der Protaminsulfat zu beschriften Zellen zu erreichen. Inkubieren Zellen in dieser Lösung für 12 Stunden. </li><li> Waschen Sie die Zellen zweimal mit PBS, mit dem letzten Waschschritt mit 10U/ml Heparin an die extrazelluläre ferumoxides-Protaminsulfat komplexen aufzulösen. Nach dem Waschen trypsinize Zellen zu einer einzigen Zelle Suspension zu erhalten. </li><li> Zählen Sie die Zellen und Aliquot in die erforderliche Anzahl von Proben. Nach dem Waschen wieder auszusetzen jedes Pellet mit 200 ul PBS und Überführung in PCR-Röhrchen. Diese Pellets sollten dunkel orange-braun in Farbe sein. </li></ol> Performing Cellular Magnetic Resonance Imaging <ol><li> Machen Sie ein Phantom, um die Röhrchen mit den Zellpellets zu stabilisieren und auch Artefakte aus der Umgebungsluft während des Scanvorgangs zu vermeiden. Dazu mischen 0,8% Agar und 1% Kupfersulfat in destilliertem Wasser und bringen es zum Kochen von microwaving für 5-7 Minuten. Coole diese Mischung für mindestens 1 Stunde vor der Abtastung zu einem Gel zu erreichen. </li><li> Das Röhrchen mit dem markierten Zellpellets werden in dem Phantom für das Scannen platziert. In-vitro-Zell-MRT ist bei Signa HDx 3T-MRT (GE Medical Systems) mit klinischen Kniespule durchgeführt. </li><li> Scan der Mangan-markierten Zellen für jede der drei Proben mit einem Spin-Echo-Sequenz: TR; Wiederholung Zeit = 800 ms. TE; Echo Zeit = Minimum, FOV; Sichtfeld = 12 x 12 cm; matrix = 256x256, NEX 1. </li><li> Scan der Eisen-markierten Zellen mit Hilfe eines Gradienten-Echo-Sequenz. Wir verwenden die folgenden Einstellungsmöglichkeiten für den Imaging: TR = 100 ms; TE = 10 ms, FA; Flipwinkel = 30 °; FOV = 12 x 12 cm; Matrix = 256 x 256, NEX 1. </li></ol> Die Analyse der MRT-Ergebnisse <ol><li> Analysieren Sie Bilder von MRT-Untersuchung von 4 verschiedenen Proben von Mangan-markierten Zellen: <ul><li> Probe Nr. 1 ist unsere steuern, welche Zellen in 0,9% Natriumchlorid allein inkubiert enthält. </li><li> Probe Nr. 2 enthält Zellen in 0,1 mM MnCl 2 inkubiert. </li><li> Probe Nr. 3 enthält Zellen in 0,1 mM MnCl 2 mit 5 uM der Ca 2 +-Kanal-Agonisten (S )-(-)- Bay K8644 inkubiert. </li><li> Probe Nr. 4 enthält Zellen in 0,1 mM MnCl 2 mit 250 uM der Ca 2 +-Kanal-Antagonisten, Verapamil inkubiert. </li></ul></li><li> Wie vorhergesagt, sind die Unterschiede in Signalintensitäten aus Mangan markierten Zellen sichtbar. Im Vergleich zu den Zellen rein mit Mangan gekennzeichnet, die Signalintensität deutlich erhöht in Anwesenheit des Calcium-Kanal-Agonist und nimmt in der Anwesenheit von Calcium-Kanal-Antagonisten. Der Bereich, in dem Signalintensität für Mangan markierten Zellen erhöht hat, sind mit Image J (NIH, Bethesda, MD, USA) gemessen. Die gleiche Software ist für die Analyse im Bereich der dunklen off-resonance-Signal aus der Eisen-markierten Zellen verwendet. Die Größe der dunklen Signal aus der Eisen-markierten Zellen hängt von der Anzahl der Zellen oder die Anzahl der Eisenteilchen durch Zellen enthalten. In diesem Fall, Eine Million Zellen zeigt eine kleinere Fläche des dunklen Signal im Vergleich zum Signal von den drei Millionen Zellen. </li></ol>

<ol><li>Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manganese-calcium+interactions+with+contrast+media+for+cardiac+magnetic+resonance+imaging%3A+a+study+of+manganese+chloride+supplemented+with+calcium+gluconate+in+isolated+Guinea+pig+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Radiol%22%5BJournal%5D)">Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts.</a> Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).</li>
<li>Aoki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+for+magnetic+resonance+imaging+with+the+T1+agent+manganese+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride.</a> NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).</li>
<li>Arbab, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+cell+labeling+with+protamine+sulfate+complexed+to+ferumoxides+for+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI.</a> Blood. 104, 1217-1223 (2004).</li>
<li>Arbab, A. S., Frank, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+MRI+and+its+role+in+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular MRI and its role in stem cell therapy.</a> Regen Med. 3, 199-215 (2008).</li>
</ol>

Diese Ergebnisse zeigen, dass Mangan nicht über den spannungsabhängigen Calcium-Kanal-und Mangan können als Kontrastmittel eingesetzt werden, die auch zeigen können, die die Lebensfähigkeit der Zellen geben. Daher empfehlen wir, dass Mangan-geführten MRT kann hilfreich sein, um die Lebensfähigkeit der Zellen nach der Transplantation von menschlichen embryonalen Stammzellen in den Herzmuskel zu überwachen.

<table><tbody><tr><td>Mangan(II)-chlorid-Tetrahydrat</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8054</td><td></td></tr><tr><td>(S)-(–)-Bay K8644</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B133</td><td></td></tr><tr><td>(+)-Verapamilhydrochlorid, mindestens 99,0 % Titration</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4629</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchlorid 0,85–0,90 % Gew./Vol.</td><td>Reagenz</td><td>VWR international</td><td>VW 3257-1</td><td></td></tr><tr><td>Feridex I.V.</td><td>Reagenz</td><td>Berlex Laboratories</td><td>NDC 59338-7035-5</td><td>eisenhaltige injizierbare Lösung, 11,2 mg Eisen/mL</td></tr><tr><td>Protaminsulfat</td><td>Reagenz</td><td>American Pharmaceutical Partners</td><td>NDC 63323-229-05</td><td>50 mg (10 mg/mL)</td></tr><tr><td>Knockout SR (Serumersatz für ES-Zellen)</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>10828</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>11330</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercap&amp;#8211;toethanol 98+ %</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 3148</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM 100x</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin 10.000 Einheiten/ml</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>MEM Nichtessentielle Aminosäuren 100x-Lösung</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>Signa HDx 3T MRT</td><td>Werkzeug</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>klinische Knie-Spule</td><td>Werkzeug</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>14190</td><td></td></tr></tbody></table>

in-vitro-markierung von humanen embryonalen stammzellen für magnetic resonance imaging

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

Humane embryonale Stammzellen (hES) haben die Möglichkeit, den verletzten Herzmuskel wieder unter Beweis gestellt. Magnetic Resonance Imaging (MRI) hat als eines der vorherrschenden bildgebenden Verfahren entstanden, um die Wiederherstellung der verletzten Herzmuskel zu beurteilen. Darüber hinaus haben ex-vivo-Markierung Mittel, wie Eisenoxid-Nanopartikel, eingesetzt worden, um zu verfolgen und lokalisieren die transplantierten Stammzellen. Allerdings funktioniert diese Methode nicht überwachen eine grundlegende zellbiologische Eigentums in Bezug auf die Lebensfähigkeit der transplantierten Zellen. Es ist bekannt, dass Manganchlorid (MnCl 2) die Zellen über spannungsgesteuerte Calcium (Ca 2 +)-Kanäle, wenn die Zellen biologisch aktiv sind betritt, und reichert sich intrazellulär zu T 1 Verkürzung Effekt zu erzeugen. Daher empfehlen wir, dass Mangan-geführten MRT kann hilfreich sein, um die Lebensfähigkeit der Zellen nach der Transplantation von embryonalen Stammzellen in den Herzmuskel zu überwachen. In diesem Video zeigen wir, wie man hESC mit MnCl 2 und wie diese Zellen deutlich mit MRI in vitro beobachtet werden label. Zur gleichen Zeit, die biologische Aktivität von Ca 2 +-Kanäle moduliert werden unter Verwendung von sowohl Ca 2 +-Kanal-Agonist und Antagonist zur gleichzeitigen Signalwechsel zu bewerten.

In diesem Video zeigen wir, wie man menschliche embryonale Stammzellen (hES) mit Manganchlorid (MnCl Label<sub&gt; 2</sub&gt;), Die Zellen über spannungsabhängige Kalziumkanäle geben, wenn die Zellen biologisch aktiv sind. Darüber hinaus zeigen wir die Verwendung von MnCl<sub&gt; 2</sub&gt; Als zelluläre MRT-Kontrastmittel zur Bestimmung der in vitro Lebensfähigkeit von humanen embryonalen Stammzellen.

In-vitro-Markierung von humanen embryonalen Stammzellen für Magnetic Resonance Imaging

Humane embryonale Stammzellen (hESC) haben die Fähigkeit gezeigt, das geschädigte Myokard zu regenerieren. Die Magnetresonanztomographie (MRT) hat sich als eine der ...

Die Magnetresonanztomographie oder MRT hat sich als vorherrschende Bildgebungsmodalität zur Lokalisierung transplantierten Stammzellen und zur besseren Aufklärung der Regenerationsmechanismen etabliert. Diese MRT-Studien verwenden typischerweise Eisenoxid-Nanopartikel als Kontrastmittel für die Bildgebung. Eisenpartikel können jedoch im Gewebe verbleiben, nachdem die Stammzellen abgestorben sind, und von Makrophagen aufgenommen werden, was suboptimale Bedingungen für die Verfolgung lebensfähiger transplantierten Zellen bewirkt.Dieses Video zeigt, dass Manganchlorid eine wirksame Alternative darstellt. Die Markierung mit Manganchlorid als Kontrastmittel bietet mehrere Vorteile gegenüber der Markierung mit Eisenoxid. Zum Beispiel erzeugt Mangan ein positives Signal, während Eisenpartikel ein negatives Signal erzeugen.Außerdem ist bekannt, dass Manganionen über spannungsabhängige Kalziumkanäle in Zellen eindringen. Daher weist ihr Auftreten in der MRT auf lebensfähige, biologisch aktive Zellen hin. Hallo, ich bin Uni Mother aus dem Labor von Philip Yang in der Abteilung für Kardiologische Medizin an der Stanford University.Heute zeige ich Ihnen, wie man humane embryonale Stammzellen mit Mangan für die Magnetresonanztomographie markiert. Dieses Verfahren umfasst die folgenden Schritte: Markierung humaner embryonaler Stammzellen mit Kontrastmitteln, Durchführung der zellulären Magnetresonanztomographie in vitro und Analyse der MRT-Ergebnisse. Beginnen wir also.Der erste Schritt im Markierungsverfahren besteht darin, humane embryonale Stammzellen vorzubereiten, die unter fetalfreien Bedingungen kultiviert wurden. Dazu werden die Zellen fünf Minuten lang mit Trypsin behandelt und anschließend das Trypsin durch Zugabe von Kulturmedium neutralisiert. Danach werden die Zellen durch Zentrifugation bei 800 RRP M fünf Minuten lang bei 20 Grad Celsius abzentrifugiert. Nachdem die Zellen in PBS resuspendiert wurden, zählen Sie die Zellanzahl mithilfe der Trypanblau-Färbung; basierend auf dem ermittelten Zellzählwert teilen Sie die Zellen in die erforderliche Anzahl von Aliquots auf konische Röhrchen auf. In diesem Fall teile ich die Zellen in vier Aliquots mit jeweils 3 Millionen Zellen auf. Zentrifugieren Sie die Zellen erneut unmittelbar vor Beginn der Manganmarkierung. Lösen Sie frisches Manganchlorid in 0,9 %iger Natriumchloridlösung, um eine 0,1 millimolare Manganchloridlösung herzustellen.Um die Aktivität von Kalziumkanälen zu beobachten, bereiteten wir Proben vor. Die erste Probe ist unsere Kontrolle, die Zellen enthält, die allein in 0,9 % Natriumchlorid inkubiert wurden. Die zweite Probe enthält Zellen, die in 0,1 Millimolar Manganchlorid inkubiert wurden; die Proben drei und vier enthalten Zellen, die in 0,1 Millimolar Manganchlorid mit entweder fünf Mikromolar des Kalziumkanalagonisten AK 8 6 44 oder 250 Mikromolar des Kalziumkanalantagonisten inkubiert wurden.Als nächstes inkubieren Sie die vier Proben 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius mit 5 % CO2. Nach 30 Minuten zentrifugieren Sie die Zellen fünf Minuten bei 20 Grad Celsius mit 800 U/min. Anschließend aspirationsen Sie das Überstandsmittel und waschen die markierten Zellen zweimal mit PBS. Nach dem Waschen suspendieren Sie jedes Pellet in 200 Mikroliter PBS und überführen es in PCR-Röhrchen.Diese Plättchen sind gewöhnlich weiß. Gut, wir haben die mit Mangan markierten Zellen für Vergleichszwecke vorbereitet. Wir werden außerdem Zellen mit den etablierteren Methoden der Eisenmarkierung vorbereiten, um die Eisenmarkierung zu beginnen.Vermischen Sie Nick's klinisch reines Protaminsulfat mit destilliertem Wasser, um eine Stammlösung mit einer Konzentration von einem Milligramm pro Milliliter herzustellen. Geben Sie anschließend in das Röhrchen mit dem Kulturmedium für humane embryonale Stammzellen Filmoxid in einer Konzentration von hundert Mikrogramm pro Milliliter zusammen mit Protaminsulfat in einer Konzentration von zwölf Mikrogramm pro Milliliter. Anschließend mischen Sie die Lösung fünf Minuten lang.Nach dem Mischen der Lösung fügen Sie diese unter Verwendung eines gleichen Volumens der gemischten Lösung und des Zellkulturmediums zu Ihren Zellen hinzu, um eine Endkonzentration von 50 Mikrogramm pro Milliliter Oxid und sechs Mikrogramm pro Milliliter Protamin Sulfat zu erreichen. Inkubieren Sie die Zellen 12 Stunden lang; danach waschen Sie die Zellen zweimal mit PBS, wobei der letzte Waschschritt 10 Einheiten pro Milliliter Heparin enthält, um den extrazellulären Oxid-Protein-Sulfat-Komplex aufzulösen. Nach dem Waschen werden die Zellen mit Trypsin behandelt, um eine Einzelzell-Suspension zu erhalten, anschließend zählen Sie die Zellen und verteilen sie auf die erforderliche Anzahl an Proben.In diesem Fall bereite ich eine Probe mit einer Million Zellen und eine andere mit drei Millionen Zellen vor. Als Nächstes sollten diese Pellets orangebraun in der Farbe sein. Schließlich resuspendieren wir jedes Pellet in 200 µL PBS und überführen es in PCR-Röhrchen.Okay, wir haben die Zellen markiert. Fahren wir nun mit der zellulären MR-Bildgebung fort. Um die Bildgebung zu beginnen, stellen wir zunächst einen Phantom her, um die Röhrchen mit den Zellproben zu stabilisieren und Artefakte durch die umgebende Luft während des Scans zu vermeiden.Mischen Sie hierzu 1 % Kupfersulfat und 0,8 % Agar in destilliertem Wasser und erhitzen Sie die Lösung im Mikrowellenofen fünf bis sieben Minuten lang zum Kochen. Anschließend wird das Gemisch mindestens eine Stunde lang abgekühlt, um ein Gel zu erhalten. Danach werden die Röhrchen mit den markierten Zellpellets zur Abtastung in den Phantom gegeben.Die zelluläre MRT in vitro wird mit einem 3,0-T-Gerät unter Verwendung einer klinischen Knie-Spule durchgeführt. Wir verwenden das von GE Medical Systems hergestellte Signa, um die mit Mangan markierten Zellen für jede der vier Proben mittels einer Spin-Echo-Sequenz zu scannen. Die Parameter für die Sequenz wurden anhand zuvor untersuchter T1-Mapping-Daten der markierten Zellen ermittelt.Wir verwenden eine Echozeit bei minimaler Wiederholungszeit von 800 Millisekunden, ein Bildfeld von 12 mal 12 Zentimeter und eine Matrix von 256 mal 256. Als Nächstes scannen Sie die mit Eisen markierten Zellen mithilfe einer Gradientenecho-Sequenz.Für diese Bildgebung verwenden wir folgende Parameter: Eine Echozeit von 10 Millisekunden, eine Wiederholungszeit von hundert Millisekunden, einen Kippwinkel von 30 Grad, ein Bildfeld von 12 mal 12 Zentimeter, eine Matrix von 256 mal 256 und den nächsten Schritt.Okay, wir sind mit der Bildgebung fertig. Schauen wir uns nun die Ergebnisse an. Hier sind die MRT-Scannergebnisse für vier verschiedene Proben von mit Mangan markierten Zellen.Die Probe Nummer eins ist unsere Kontrolle, die Zellen enthält, die allein in 0,9 % Natriumchlorid inkubiert wurden. Probe Nummer zwei enthält Zellen, die in 0,1 Millimolar Manganchlorid inkubiert wurden. Probe Nummer drei enthält Zellen, die in 0,1 Millimolar Manganchlorid mit fünf Mikro des Kalziumkanal-Agonisten Vacay 8 6 4 4 inkubiert wurden.Die Probe Nummer vier enthält Zellen, die in 0,1 Millionen MO Manganchlorid mit 250 Mikromolar des Kalziumkanalantagonisten Veil inkubiert wurden. Im Vergleich zu den mit Mangan allein markierten Zellen steigt die Signalintensität in Gegenwart des Kalziumkanalagonisten und nimmt in Gegenwart des Kalziumkanalantagonisten ab. Der Bereich der Signalzunahme für manganmarkierte Zellen wird mithilfe von ImageJ gemessen. Diese Ergebnisse zeigen, dass Mangan über spannungsabhängige Kalziumkanäle eindringt.Vergleichen wir nun diese Ergebnisse mit den Ergebnissen der eisenmarkierten Zellen. Achten Sie auf den Unterschied zwischen dem hellen positiven Signal der manganmarkierten Zellen und dem dunklen negativen Signal der eisenmarkierten Zellen. Wir haben Ihnen soeben gezeigt, wie man humane embryonale Stammzellen für die zelluläre Magnetresonanztomographie in vitro mit Mangan markiert.Dieses Verfahren ist eine effektive Methode zur Verfolgung von Stammzellen, da ein Manganion leicht über eine einfache 30-minütige Inkubation in Zellen eingeführt werden kann. Zweitens liefern mit Mangan markierte Zellen klare Bilder mit einem positiven Signal, und drittens gelangt Mangan über den spannungsabhängigen Kalziumkanal in die Zellen, wie durch den Einsatz von Kalziumkanal-Agonisten und -Antagonisten gezeigt wurde, und tritt somit nur in lebensfähige Zellen ein. Daher glauben wir, dass die Markierung menschlicher embryonaler Stammzellen mit Mangan ein großes Potenzial für eine präzise zelluläre MRT in vivo bietet, um die Wirkung transplantierten menschlichen embryonalen Stammzellen in ischämisch geschädigten Bereichen zu verfolgen.Das war's. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

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