Olfaktorische Behavioral Testing in der adulten Maus

Das olfaktorische System oder Geruchssinn von Rodin hat sich zu einem zunehmend populären Forschungsbereich entwickelt. Um die olfaktorische Empfindlichkeit zu testen, wird einer Maus erlaubt, sich in einem Käfig ohne Einstreu zu akklimatisieren, und anschließend wird sie Filterpapierstücken ausgesetzt, die steigende Konzentrationen eines Duftstoffs enthalten. Anschließend wird die Zeitdauer aufgezeichnet, die die Maus mit der Untersuchung des Filterpapiers verbringt.

Die olfaktorische Präferenzprüfung erfolgt auf exakt die gleiche Weise. Allerdings wird anstelle steigender Duftstoffkonzentrationen die Zeitdauer erfasst, die die Maus mit der Untersuchung unterschiedlicher Duftstoffe verbringt. Hallo, ich bin Rochelle Witt aus dem Labor von Dr. Rosalyn Siegel am Fachbereich Neurobiologie der Harvard Medical School.

Hallo, ich bin Jennifer Deno, ebenfalls aus dem Siegel-Labor. Heute zeigen wir Ihnen zwei Verfahren zur olfaktorischen Testung. Wir verwenden diese Verfahren in unserem Labor, um die olfaktorische Empfindlichkeit und olfaktorische Präferenzen zu untersuchen.

Beginnen wir also. Für die Durchführung der Geruchsempfindlichkeitstestung besorgen Sie vier saubere Käfige, die alle ohne Einstreu sind. Die Käfige sollten acht Zoll hoch, zehn Zoll breit und 18 Zoll lang sein.

Stellen Sie die vier Käfige in einem Sicherheitswerkbank bereit. Danach richten Sie Trennwände zwischen den einzelnen Arenen mit undurchsichtigem Filterpapier ein. Anschließend platzieren Sie ein schwarzes Plakatpapier entlang der letzten Trennwand, sodass es die Seite und den Boden des Käfigs auskleidet.

Lassen Sie Licht in die Versuchsarena gelangen, indem Sie die Oberseite des Käfigs mit einer durchsichtigen Plexiglasscheibe abdecken. Beginnen Sie nun damit, die Versuchstiere an diese Bedingung zu gewöhnen. Stellen Sie das erste Versuchstier in den ersten Käfig.

Nach 15 Minuten bringen Sie das erste Versuchstier in den zweiten Käfig. Reinigen Sie den ersten Käfig mit Quatra side tb. Stellen Sie anschließend das zweite Versuchstier in den ersten, gereinigten Käfig.

Fahren Sie diesen Prozess mit nachfolgenden Versuchstieren vor der Testung fort. Stellen Sie eines der Tiere in den vierten Käfig und gewöhnen Sie es weitere 15 Minuten lang ein. Letztendlich sollte ein Versuchstier in jedem der ersten drei Käfige eingewöhnt werden.

Jetzt sind wir bereit, die Duftproben vorzubereiten. Die Duftproben sollten von einem anderen Forscher vorbereitet werden, der bezüglich des Versuchstiers, der Genotypen und/oder der Bedingungen verblindet ist. Beginnen Sie die Probenherstellung, indem Sie eine geeignete Anzahl von zwei Zoll mal zwei Zoll großen Quadraten aus Filterpapier anfertigen.

Danach entsprechende Verdünnungen des vorab ausgewählten Duftstoffs in kegelförmigen Reagenzgläsern herstellen. Beachten Sie, dass unterschiedliche Mausstämme möglicherweise unterschiedliche Verdünnungen des Duftstoffs für eine effektive Unterscheidung zwischen Kontroll- und Versuchsgruppe erfordern. Aufgrund dieser Beobachtung empfiehlt es sich, vor der experimentellen Untersuchung naiver Mäuse die geeigneten Duftstoffverdünnungen empirisch an Tieren zu ermitteln, die dem Kontrollstamm ähneln. Für hydrophobe Proben wie Erdnussbutter als Lösungsmittel Öl verwenden, für alle anderen Proben hingegen ein anderes Lösungsmittel.

Verwenden Sie destilliertes Wasser und einen Vortex, um sicherzustellen, dass die Verdünnung gründlich gemischt ist. Stellen Sie danach ein digitales Videoaufzeichnungsgerät am hinteren Ende der Abzugshaube so auf, dass das gesamte Käfigende scharf abgebildet ist. Nehmen Sie ein Testvideo auf, um sicherzustellen, dass die Kameraeinstellungen geeignet sind.

Notieren Sie in einem Laborbuch die Reihenfolge, in der die Verdünnungen getestet werden, wobei darauf zu achten ist, dass die Reihenfolge bei jedem Versuch randomisiert wird. Notieren Sie außerdem die Wurf- und Identifikationsnummern des Versuchstiers. Sobald das Tier sich 15 Minuten lang im Versuchsareal akklimatisiert hat, beginnen Sie mit den Vorbereitungen für den ersten Versuchsdurchlauf.

Pipettieren Sie die erste Verdünnung mehrmals auf und ab im kegelförmigen Reagenzglas, bevor Sie sie auf ein Filterpapierquadrat übertragen. Die Oberfläche des Filterpapiers sollte optimalerweise zu etwa 85 % bedeckt sein. Verwenden Sie ein Kim-Tuch, um sicherzustellen, dass das Filterpapier nicht übermäßig gesättigt ist.

Nachdem das parfümierte Filterpapier vorbereitet ist, können wir den ersten Test zur olfaktorischen Empfindlichkeit durchführen. Beginnen Sie den Versuch, indem Sie die Videoaufzeichnung starten. Anschließend platzieren Sie das parfümierte Filterpapier in das Käfigende, das der aktuellen Position des Tieres gegenüberliegt.

Beginnen Sie mit der Zeitnahme. Stoppen Sie nach drei Minuten die Aufnahme und entfernen Sie den Geruch. Starten Sie danach den Timer erneut und bereiten Sie eine zweite Geruchprobe vor.

Nach einer Minute beginnen Sie mit der Videoaufnahme. Wie zuvor platzieren Sie die Duftprobe in dem Käfig am entgegengesetzten Ende der aktuellen Position des Tieres. Wiederholen Sie diesen Vorgang für jede Zentralkonzentrationsverdünnung und für jeden Versuchstier, und denken Sie daran, die Videodateinummer für jeden Versuch aufzuzeichnen.

Nachdem wir Ihnen die Prüfung der olfaktorischen Empfindlichkeit gezeigt haben, fahren Sie mit der Prüfung der olfaktorischen Präferenz fort. Für die Prüfung der olfaktorischen Präferenz wenden Sie das gleiche Verfahren an, das bereits für die Prüfung der olfaktorischen Empfindlichkeit beschrieben wurde, mit zwei geringfügigen Änderungen. Erstens.

Statt mehrerer Verdünnungen eines vorab ausgewählten Duftstoffs herzustellen, bereiten Sie sowohl attraktive als auch aversive Düfte vor. Zweitens notieren Sie nicht die zu testende Verdünnung, sondern die Reihenfolge der zu testenden Varianten, wobei die Reihenfolge in jedem Versuch zufällig festgelegt wird. Alle übrigen Schritte des Verfahrens entsprechen genau denen des olfaktorischen Tests, einschließlich der Gewöhnung der Versuchspersonen, der Verwendung eines verblindeten Forschers, der Applikation des Duftstoffs auf Filterpapier und der zeitlich begrenzten Videoaufzeichnung jedes Versuchs.

Nach Abschluss der olfaktorischen Präferenztests führen Sie die Auswertung der olfaktorischen Tests durch. Nachdem alle Videos zur olfaktorischen Empfindlichkeit und Präferenz vorliegen, ermitteln Sie die Gesamtzeit, die der Proband mit der Erkundung jeder Verdünnung oder Probe zur Beurteilung der Konsistenz verbracht hat. Ein verblindeter Forscher soll die Videos analysieren, um diese Auswertung durchzuführen.

Es ist hilfreich, das Video zunächst vorab anzusehen und Folgendes zu beachten. Wann das Filterpapier in die Versuchsanlage gelegt wird, wann die Maus sich dem Filterpapier nähert, wann die Maus das Filterpapier untersucht und wann drei Minuten seit dem ersten Einlegen des Filterpapiers in die Versuchsanlage verstrichen sind. Wenn bekannt ist, wann das Verhalten der Maus im Fokus stehen soll, ist es einfacher, bei der anschließenden Durchsicht des gesamten Videos die Gesamtzeit der Erkundung genau zu erfassen. Verwenden Sie eine Stoppuhr, um alle Untersuchungen innerhalb von drei Minuten nach dem Einlegen des Filterpapiers in die Versuchsanlage zu zeichnen.

Als Untersuchungszeit wird jede Zeitspanne definiert, während der sich die Nase der Maus weniger als einen Millimeter vom Filterpapier entfernt befindet. Es ist wichtig, jegliche Zeit auszuschließen, in der sich die Maus zwar in unmittelbarer Nähe des Filterpapiers befindet, dieses aber nicht aktiv untersucht. Bei der gesamten explorativen Zeit sind Phasen des Kauens und Leckens des Papiers sowie Phasen, in denen die Maus auf dem Papier sitzt, nicht einzubeziehen. Diese Regeln müssen genau und konsequent eingehalten werden, um das olfaktorische Verhalten korrekt analysieren zu können.

Nach der Überprüfung der Videoaufzeichnung die gesamte Zeit erfassen, die für die Untersuchung des Filterpapiers aufgewendet wurde, und die Analyse für alle Videos wiederholen. Hier sind repräsentative Ergebnisse aus der olfaktorischen Testung. Dieses erste Diagramm zeigt die Ergebnisse einer Sitzung zur olfaktorischen Sensibilitätsausbildung.

Jeder Maus entweder der Versuchsgruppe B oder der Kontrollgruppe A wurde während einer dreiminütigen Sitzung einer von fünf verschiedenen Verdünnungen von Zimtextrakt auf Filterpapier ausgesetzt. Die gesamte Zeit, die die Maus mit der Erforschung des Filterpapiers verbrachte, wurde erfasst, und dieses Diagramm zeigt die Ergebnisse eines Geruchspräferenztests. Jeder Maus wurde jede der verschiedenen Düfte auf Filterpapier während einer dreiminütigen Sitzung präsentiert.

Die gesamte Zeit, die für die Erkundung des Filterpapiers aufgewendet wurde, wurde bewertet. Wir haben Ihnen soeben gezeigt, wie man olfaktorische Fähigkeiten bei erwachsenen Mäusen testet. Bei Verwendung dieser Verfahren ist es wichtig, naive Mäuse einzusetzen, um olfaktorische Fähigkeiten genau zu testen und nicht andere Fähigkeiten wie Lernen und Gedächtnis. Das war's.

Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.