Hipótesis: La hipótesis experimental es que en las rodajas de las puntas de las raíces que han sido tratadas con nocodazol, un químico que interfiere con la polimerización microtubular, todas las células se detendrán en la misma etapa del ciclo celular y que en las rodajas de punta de cebolla sin tratar se visualizarán todas las diferentes etapas del ciclo celular. La hipótesis nula es que no habrá diferencias en la mitosis entre los dos grupos y que se visualizarán diferentes etapas del ciclo celular.
Para prepararse para este experimento, utilizará una cebolla que se ha colocado en agua durante varios días hasta que hayan comenzado a brotar nuevas puntas de raíz blancas. Usa una cuchilla de afeitar para cortar un trozo de 1 cm desde el extremo de una de las puntas de las raíces.
Coloque la rodaja de cebolla en un tubo de microcentrífuga marcado con "N" para la condición de nocodosazol.
Luego, corte un segundo trozo de 1 cm de punta de raíz de cebolla y colóquelo en un tubo de microcentrífuga etiquetado como "C" para la condición de control.
Agregue 2 μL de los 5 mg/mL de nocodazol a 1 mL de agua en el tubo de microcentrífuga marcado con N y 1 mL de agua solo al tubo marcado con C.
Deje incubar los tubos que contienen las puntas de las raíces durante 12 horas y limpie el espacio de trabajo con etanol al 70%.
Cuando se complete la incubación, ajuste un bloque de calor a 60 ºC.
Lave las puntas tratadas con nocodazol con agua y luego aspire el líquido.
Repita este lavado dos veces más, para un total de tres lavados.
Llene ambos tubos con 1 mL de un ácido clorhídrico normal. Incubar los tubos en un bloque térmico a 60 ºC durante 12 - 15 min, luego desechar el ácido en un matraz de desechos.
Ahora, agregue 1 mL de agua destilada gota a gota a los tubos al menos tres veces para enjuagar las muestras.
Ahora agregue un microlitro de tinción DAPI a 10 mL de solución salina tamponada con fosfato (PBS).
Luego coloque 50 μL de esta tinción diluida de DAPI en cada tubo, y déjelos a temperatura ambiente para incubar durante 12 min.
Después de esto, realice tres lavados con agua destilada como en el paso 10.
Etiquete un portaobjetos de microscopio como 'Control' y otro como 'Nocodazol'.
Transfiera las raíces teñidas a sus respectivos portaobjetos de microscopio y añada una gota de agua al portaobjetos de control y una gota de nocodazol al portaobjetos de nocodazol.
Utilice la cuchilla de afeitar para eliminar las partes no manchadas de cada punta de la raíz y coloque una cubierta de vidrio sobre cada muestra.
Presione cuidadosamente cada cubreobjetos con la yema de un dedo enguantado, y luego deje reposar los portaobjetos durante 10 min.
Finalmente, vea los portaobjetos bajo el objetivo 40X de un microscopio de fluorescencia y capture imágenes de sus preparaciones de células de punta de raíz.
