RT-PCR en tiempo real

La reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa en tiempo real, o RT-PCR en tiempo real, puede cuantificar un ARN de interés a medida que avanza la reacción.

Para empezar, la transcriptasa inversa copia el ARN en complementario, o ADNc. La ARNasa H digiere el ARN original, dejando pequeños cebadores unidos al ADNc.

A continuación, la ADN polimerasa sintetiza una hebra complementaria.

A continuación, se puede llevar a cabo una amplificación dirigida mediante PCR para crear copias exponenciales de segmentos específicos. Las dos hebras se separan al comienzo de cada ciclo a altas temperaturas. Los cebadores de oligonucleótidos complementarios se recocen a cada cadena de ADNc y son extendidos por la ADN polimerasa.

El ADN se puede cuantificar utilizando uno de dos métodos diferentes de detección basados en fluorescencia. Un método utiliza tintes que solo emiten fluorescencia cuando se unen a ADN bicatenario.

El tinte se une al ADN, donde la hebra original se empareja con una hebra complementaria recién sintetizada. Al final de cada ciclo de PCR, una longitud de onda de luz adecuada excita el colorante unido.

El otro método utiliza sondas de oligonucleótidos complementa