Principios de la cromatografía en columna

La cromatografía en columna es una técnica bioquímica utilizada para separar compuestos en función de sus propiedades físicas y químicas.

Tiene dos componentes principales: la fase sólida estacionaria o la matriz y la fase móvil líquida o el solvente.

La columna empaquetada en matriz se carga con una muestra, como una mezcla de proteínas. A continuación, se utiliza el disolvente para transportar la muestra a través de la columna.

Dentro de la columna, la matriz actúa como una malla molecular que filtra las proteínas en función de su tamaño o interacción con la matriz. Las proteínas más grandes tienden a viajar más rápido que las proteínas más pequeñas, lo que resulta en una separación basada en el tamaño.

Además, las proteínas de una muestra pueden interactuar con la matriz. Las interacciones débiles permiten que las proteínas pasen rápidamente, mientras que las interacciones fuertes retienen las proteínas dentro de la columna.

Un cambio gradual en el pH o la fuerza iónica del solvente altera las interacciones de las proteínas con la matriz y ayuda a eluir las proteínas en fracciones separadas.