Inmunoprecipitación

La inmunoprecipitación se utiliza para aislar una sola proteína de una mezcla compleja, como un extracto celular.

Emplea anticuerpos específicos contra la proteína diana. Estos anticuerpos se inmovilizan en perlas magnéticas o de agarosa mediante unión covalente directa o mediante proteínas bacterianas recombinantes de unión a anticuerpos, como la proteína A o G.

Cuando se incuban con la muestra de proteína, las perlas prerrecubiertas permiten que los anticuerpos formen un complejo con las proteínas objetivo.

A continuación, la muestra se somete a una centrifugación a baja velocidad para precipitar el complejo anticuerpo-proteína.

A continuación, el pellet se resuspende en un tampón suave con condiciones de pH bajo o alta salinidad. Esto rompe los enlaces proteína-anticuerpo y libera la proteína objetivo en la solución.

Finalmente, la suspensión se centrifuga de nuevo a baja velocidad para obtener la proteína objetivo en el sobrenadante.

Al igual que la inmunoprecipitación, la coinmunoprecipitación utiliza el mismo principio para estudiar las interacciones proteína-proteína.

En este caso, una proteína miembro de un complejo proteico se utiliza como cebo para separar a sus otros socios de unión.