Transferencia Western

La Western blot es una técnica analítica utilizada para detectar la proteína de interés a partir de una mezcla de proteínas.

Puede ayudar a identificar isoformas de proteínas y modificaciones de proteínas postraduccionales. Además, puede determinar las proteínas diana después del tratamiento farmacológico.

Este método se basa en el SDS-PAGE que separa las proteínas en función de la relación entre la carga y la masa.

Estas proteínas se transfieren a una membrana de nitrocelulosa, normalmente bajo una corriente eléctrica.

Las proteínas cargadas negativamente se mueven hacia el ánodo y se transfieren a la membrana conservando su posición original.

A continuación, la membrana se incuba con un anticuerpo primario, específico para la proteína de interés. Una incubación previa en un tampón de bloqueo impide la unión de los anticuerpos a la membrana.

A continuación, el anticuerpo secundario se marca con enzimas indicadoras, como la peroxidasa de rábano picante o un fluoróforo, que se une al anticuerpo primario.

Cuando se incuban con un sustrato apropiado, estas enzimas reporteras producen color o luz, o emiten señales fluorescentes que permiten la detección de la proteína específica en la