Microscopía de fluorescencia confocal

Un microscopio de barrido láser confocal o CLSM utiliza un láser y una serie de orificios para seccionar una muestra en finas rodajas ópticas. Estos cortes se pueden compilar para reconstruir una imagen nítida y detallada.

A diferencia de los microscopios de fluorescencia tradicionales, en los que se ilumina todo el campo, el CLSM utiliza un rayo láser para restringir la excitación de los fluoróforos a un solo punto en un momento dado en una sección delgada de la muestra. Esto da como resultado una pérdida más lenta de fluorescencia por fotoblanqueo.

Un orificio de iluminación enfoca la luz, y un orificio de emisión permite que solo la luz del plano focal enfocado pase al detector, lo que reduce la fluorescencia de fondo y la borrosidad de las imágenes.

El láser escanea toda la muestra repetidamente en diferentes planos focales a lo largo del eje Z, capturando las imágenes para generar una serie de secciones ópticas.

Estas secciones ópticas se pueden usar como una imagen bidimensional o compilarse juntas como una pila Z utilizando software de procesamiento de imágenes para reconstruir una imagen tridimensional de alta resolución.