33.7
Dinámica de proteínas en células vivas
La dinámica celular de las proteínas marcadas con fluorescencia se puede estudiar utilizando técnicas microscópicas avanzadas como FRAP, SPT y FRET.
En la recuperación de fluorescencia después del fotoblanqueo o FRAP, una pequeña región que contiene proteínas de interés se irradia con un rayo láser enfocado para fotoblanquear los fluoróforos.
A medida que las proteínas marcadas se difunden en el área blanqueada, la región vuelve a ser fluorescente. La tasa de recuperación de fluorescencia determina la velocidad de difusión de las proteínas.
El seguimiento de una sola partícula o SPT involucra proteínas marcadas con anticuerpos unidos a fluoróforos. El movimiento individual de las proteínas se rastrea utilizando un microscopio de video mejorado por computadora.
La transferencia de energía por resonancia de Forster o FRET mide la proximidad de dos proteínas marcadas con fluoróforos. Cuando la distancia es superior a diez nanómetros, no se produce fluorescencia. Si las proteínas se acercan, la excitación del fluoróforo donante conduce a la transferencia de energía al fluoróforo aceptor.
La transferencia de energía reduce la fluorescencia del donante a la vez que aumenta la emisión del aceptor, permitiendo su visualización.
Se utilizan diferentes técnicas basadas en fluorescencia para estudiar la dinámica de las proteínas en células vivas. Estas técnicas incluyen FRAP, FR…
Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos los derechos reservados.