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Dinámica de proteínas en células vivas
La dinámica celular de las proteínas marcadas con fluorescencia se puede estudiar utilizando técnicas microscópicas avanzadas como FRAP, SPT y FRET.
En la recuperación de fluorescencia después del fotoblanqueo o FRAP, una pequeña región que contiene proteínas de interés se irradia con un rayo láser enfocado para fotoblanquear los fluoróforos.
A medida que las proteínas marcadas se difunden en el área blanqueada, la región vuelve a ser fluorescente. La tasa de recuperación de fluorescencia determina la velocidad de difusión de las proteínas.
El seguimiento de una sola partícula o SPT involucra proteínas marcadas con anticuerpos unidos a fluoróforos. El movimiento individual de las proteínas se rastrea utilizando un microscopio de video mejorado por computadora.
La transferencia de energía por resonancia de Forster o FRET mide la proximidad de dos proteínas marcadas con fluoróforos. Cuando la distancia es superior a diez nanómetros, no se produce fluorescencia. Si las proteínas se acercan, la excitación del fluoróforo donante conduce a la transferencia de energía al fluoróforo aceptor.
La transferencia de energía reduce la fluorescencia del donante a la vez que aumenta la emisión del
Se utilizan diferentes técnicas basadas en fluorescencia para estudiar la dinámica de las proteínas en células vivas. Estas técnicas incluyen FRAP, FR…
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