Tipos de cromatografía en columna

La filtración en gel, el intercambio iónico y la cromatografía de afinidad son los tipos comunes de cromatografía en columna que se utilizan para extraer compuestos puros de una mezcla, como una suspensión de proteínas.

La cromatografía de filtración en gel utiliza una matriz inerte de perlas de gel poliméricas para crear tamaños de poro específicos.

En el caso de una suspensión de proteínas, las proteínas más grandes que el tamaño de los poros eluyen primero, mientras que las más pequeñas quedan atrapadas en las perlas de gel. Estas proteínas atrapadas pueden ser eluidas con múltiples lavados con disolventes.

Por el contrario, una columna de intercambio iónico está repleta de perlas de matriz recubiertas con ácidos o bases débiles que les dan una carga neta positiva o negativa a un determinado pH.

Esto ayuda a separar las proteínas en función de su carga superficial mediante la formación de enlaces iónicos con las proteínas con carga opuesta.

Por último, la cromatografía de afinidad utiliza una matriz marcada con ligandos, como anticuerpos, para extraer una proteína diana de una mezcla en función de interacciones de unión específicas.

En la cromatografía de afinidad e intercambio iónico, la proteína objetivo se eluye finalmente mediante la adición de un disolvente de elución que debilita las interacciones columna-proteína debido a un cambio en condiciones como el pH, la fuerza iónica o la introducción de una molécula competitiva.