Monitoreo hormonas vegetales en las respuestas de estrés

Resumen

Un método simple es a condición de que permite la rápida extracción y análisis de hormonas de plantas múltiples de pequeñas muestras de tejido. El procedimiento utiliza la extracción en fase vapor de la etapa de purificación solemne. Las muestras se analizaron por GC / MS con ionización química que produce principalmente (M +1) + iones.

Resumen

Hormonas de las plantas y los compuestos relacionados con la señalización desempeñan un papel importante en la regulación de la respuesta de las plantas a diversos estímulos ambientales y las tensiones. Entre las tensiones más graves son la herbivoría de insectos, la infección por patógenos, y la sequía. Para cada una de estas tensiones de un conjunto específico de las hormonas y / o combinaciones de ellos son conocidos para afinar las respuestas, asegurando así la supervivencia de la planta. Las principales hormonas implicadas en la regulación de estas respuestas son el ácido jasmónico (JA), el ácido salicílico (SA), y el ácido abscísico (ABA). Para comprender mejor el papel de las hormonas individuales, así como su potencial interacción durante estas respuestas es necesario monitorear los cambios en su abundancia en un temporal, así como de una manera espacial. Para la cuantificación sencilla, sensible y reproducible de estos y otros compuestos de señalización se desarrolló un método basado en la extracción en fase de vapor y la cromatografía de gases / espectrometría de masas (GC / MS) análisis (1, 2, 3, 4). Después de la extracción de estos compuestos en el tejido de la planta por acuosa ácida 1-propanol se mezcla con el diclorometano que contiene ácido carboxílico compuestos metilados, se volatiliza con el calor, y se recogen en un polímero absorbente. Tras la elución a un vial de los analitos se separan por cromatografía de gases y espectrometría de masas detectadas por ionización química. El uso apropiado de las normas internas se permite la cuantificación sencilla, relacionando las áreas de pico de analito estándar e internos.

Protocolo

1. En primer lugar tenemos que preparar a los 2 ml con tapa de rosca viales para la extracción: Agregar 400ul de tampón de extracción (1-propanol: H2O: HCl concentrado 2:1:0.002 vol / vol / vol) y 10 l de la norma interna respectiva (10ng/μl ) a un vial. Congelar en nitrógeno líquido y luego agregar las cuentas de cerámica.
2. Añadir el material vegetal (entre 50 y 200 mg), mientras que los viales siguen siendo colocado en el nitrógeno líquido. Tenga en cuenta que el peso del material vegetal añadido tiene que ser estimado antes de proseguir para permitir que más tarde para la cuantificación exacta, que se basa en el peso fresco.
3. Asegúrese de que todo el nitrógeno líqu....

Discusión

El método que aquí se presenta se ha demostrado que funciona de forma fiable para una amplia gama de compuestos de señalización de las plantas, siempre que el tamaño y la naturaleza química del compuesto no impedir que se extrae, desnaturalizado, y se vaporiza. Además, el procedimiento de metilación como se describe en este documento no es la única forma de derivación. Silyllation y la acetilación de métodos alternativos y los protocolos se pueden encontrar fácilmente en línea.

Si el espectr.......