Artículo de método

Channelrhodopsin2 estimulación mediada de los potenciales sinápticos en Drosophila Las uniones neuromusculares

DOI:

10.3791/1133

⸱

16 de marzo de 2009

 ,  , 
1Department of Biology, Brandeis

En este artículo

Resumen

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Este procedimiento utiliza una luz azul activa el canal de las algas y las células específicas de las herramientas de la expresión genética para evocar los potenciales sinápticos con pulsos de luz en la unión neuromuscular (UNM), en Drosophila Larvas. Esta técnica es un barato y fácil de usar alternativas a la estimulación de electrodos de aspiración para los estudios de la fisiología sináptica en laboratorios de investigación y enseñanza.

Protocolo

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Parte 1: cuidado de los animales y cruces genéticos

  1. Mantener la UAS-ChR2 y OK371-GAL4 líneas de mosca en botellas separadas con los medios de comunicación estándar de mosca 8.
  2. Recoger las vírgenes de las líneas de vuelo OK371-GAL4 y los hombres de UAS-ChR2 líneas.
  3. Poner a hombres y mujeres en un frasco que contiene los medios de comunicación estándar de mosca se mezcló con 1 mM de todo-trans retinal (ATR). ATR alimentos debe ser hecha por los primeros medios de fusión vuelo regular en el microondas durante ~ 1 minuto. Una vez fundido, dejar enfriar durante unos 30 segundos a un minuto y añadir 100 m....

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Discusión

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Los pasos críticos incluyen tanto la disección inicial y la entrada de las células musculares. Si los nervios se cortan o músculo dañado durante la disección inicial es difícil continuar con el resto del experimento. Durante la disección, se debe tener mucho cuidado con el ángulo de la disección de las tijeras hacia arriba tanto como sea posible durante la incisión dorsal. Durante el paso crucial en segundo lugar, entrar en una célula muscular, se debe vigilar a una hiperpolarización últimos ~ 30 mV. Valores por encima .......

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Divulgaciones

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No tenemos ningún conflicto de intereses a revelar.

Agradecimientos

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Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud subvenciones RO1GM MH-33205 y 067284-LC a Griffith y por una beca de la Universidad de Brandeis de investigación de verano para universitarios NJ Hornstein. Los experimentos preliminares de esta técnica se realizaron en el Laboratorio de Biología Marina, como parte de los 2.008 sistemas neurales y por supuesto el comportamiento de verano (NIMH subvención: R25 MH059472) en Woods Hole, MA.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
SylgardEllsworth Adhesivos4019862www.ellsworth.com
Minutens PinsFine Science Tools26002-10www.finescience.com
Plato de disecciónFisher Scientificwww.fishersci.com
Neuroprobe Intracell Amplifier and Head StageA-M Systems680100www.a-msystems.com
Sistema de adquisición de datos Powerlab 4/30figure-materials-1 ADInstrumentswww.adinstruments.com
Estimulador de céspedGrass Technologies www.grasstechnologies.com
Ordenador de sobremesaDellwww.dell.com
>Alcance de disecciónLeica Microsystemswww.leica-microsystems.com
Fuente de luzDolan-Jenner Industries41446-062www.dolan-jenner.com
Fly Media
All-Trans-RetinalSigma-Aldrich116-31-4www.sigmaaldrich.com
OK-371 Gal4 MoscasBloomington Stock center
UAS-ChR2 MoscasFiala lab, Griffith lab
Circuito de controlador LEDConstruido en Griffith labhttp://www.ledsupply.com
http:// www.futureelectronics.com
Compuesto por:
1. 200 mA Buck Puck
2. LED azul
3. Cable aislado
4. Placa de pan de circuito
LED Disipador de calorThorlabs Inc.http://www.thorlabs.com/
Air TableTMChttp://www.techmfg.com/products/accessories/intro3.html
Jaula de Faradayconstruida en el laboratorio
Leica Micromanipulador Leitz MLeica MicrosystemsACS01www.leica-microsystems.com
PortaelectrodosAxon Instrumentswww.axon.com
Vidrio de borosilicatoFHC, Inc.www.fh-co.com/p14-15.pdf
Extractor de electrodosSutter Instrument Co.www.sutter.com
HL 3.1 Solución salina con 0.8mM Ca2+Contenido (mM):
NaCl:70 KCl:5 CaCl2: 0.8
MgCl2:4Sacarosa:115
NaHCO3: 10 Trehalosa: 5
Herramientas de Micro-DisecciónHerramientas de Ciencia Finawww.finescience.com
Griffith HEPES

Referencias

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  1. Keshishian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545(1996).
  2. Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Dros....

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Etiquetas

Channelrhodopsin2Drosophila Neuromuscular JunctionSynaptic PotentialsGAL4 UAS SystemBlue Light StimulationElectrophysiology RigMuscle RecordingLarval DissectionExcitatory Junctional PotentialAll Trans Retinol

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