Este sentido, demuestran la fabricación de estructuras a base de colágeno del tejido, con mioblastos esqueléticos. Estas construcciones de ingeniería 3-D se puede utilizar para sustituir o reparar los tejidos In vivo. Para nuestros propósitos, hemos diseñado estos como un canal atrioventricular eléctricos para la reparación de un bloqueo cardíaco completo [1].
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Artículo de método
Fabricación de construcciones de ingeniería tisular miogénica
En este artículo
Resumen
Resumen
A pesar de que los marcapasos electrónicos para salvar vidas los dispositivos médicos, su rendimiento a largo plazo en pacientes pediátricos puede ser problemática debido a las restricciones impuestas por el tamaño pequeño de un niño y su crecimiento inevitable. En consecuencia, hay una verdadera necesidad de terapias innovadoras diseñadas específicamente para los pacientes pediátricos con trastornos del ritmo cardíaco. Proponemos que una alternativa conductor biológica que consiste en una matriz a base de colágeno que contiene autologously células derivadas de una mejor podrían adaptarse al crecimiento, reducir la necesidad de cirugías recurrente, y en gran medida a mejorar la calidad de vida de estos pacientes. En el presente estudio, se describe un procedimiento para la incorporación de cultivos primarios de células con mioblastos esqueléticos dentro de una matriz de hidrogel para diseñar una construcción de tejido quirúrgicamente implantable que servirá como un conducto eléctrico entre las cámaras superior e inferior del corazón. En última instancia, esperamos con este tipo de ingeniería tisular para restablecer la conducción eléctrica auriculoventricular en los niños con bloqueo cardíaco completo. En vista de ello, aislamos los mioblastos de músculo esquelético de ratas Lewis neonatal y la placa que en laminina recubierto platos de cultivo de tejidos utilizando una versión modificada de los protocolos establecidos
Protocolo
Parte 1: Montar la construcción de moldes de fundición
- Use una hoja de afeitar para reducir a la mitad el tubo de silicona (VWR) y cortarlo en tres pedazos cm de largo.
- Coloque una gota de RTV adhesivo implantes de silicona de calidad (Rhodia) en el interior de cada extremo de la tubería.
- Rápidamente coloque un pedazo pequeño (1 cm x 1 cm) de malla de poliéster (McMaster-Carr) sobre la caída de adhesivo de silicona y alinearla con el extremo de la tubería. Esto proporcionará una superficie ligeramente elevada y plana para la conexión construir. Repita para el otro extremo.
- Deje que el molde para secar a temperatura ambiente du....
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Discusión
Los moldes en los que será la construcción de tejido reparto se puede hacer en cualquier forma y tamaño, sin embargo, es necesario que haya al menos dos puntos de fijación. De lo contrario, la matriz y las células forman una estructura esférica y las células mueren. En el presente Protocolo, se describe el uso de una malla de poliéster para este propósito, sin embargo, también hemos utilizado con éxito una malla de acero inoxidable. Obviamente, los moldes más grandes requieren más células, y un mayor volumen de los demá.......
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Divulgaciones
Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el Cuidado de Animales institucional y el empleo en el Hospital de Niños de Boston.
Agradecimientos
Este trabajo es apoyado por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (HL068915; HL088206), un Premio al Investigador Nuevo en el Fondo de Investigación Thrasher, y las contribuciones al Fondo de conducción cardiaca en el Hospital de Niños de Boston.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo de silicona | VWR international | 60985-724 | |
| Adhesivo de silicona | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | |
| Malla de poliéster | McMaster-Carr | 93185T17 | |
| Laminina | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| Mezcla nutriente F-10 HAM | Sigma-Aldrich | N6908 | |
| Suero bovino fetal | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| Penicilina/estreptomicina | Invitrogen | 15140 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | |
| Dispasa-2 | Roche Group | 10295825001 | |
| Colagenasa 2 | Worthington Biochemical | 46H8863 | |
| Factor de crecimiento de fibroblastos básico | Promega Corp. | G5071 | |
| Placas de cultivo celular de 150 mm | BD Biosciences | 353025 | |
| Tripsina-EDTA al 0,05 % (1X) | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| Solución salina equilibrada de Hanks 1X | Invitrogen | 14170-112 | |
| NaHCO3 al 7,5 % | GIBCO, by Life Technologies | 25080-094 | |
| Filtro celular de 70 μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Placas de 6 pocillos | BD Biosciences | 353046 | |
| Vial cónico de 50 mL | BD Biosciences | 352098 | |
| Vial cónico de 15 mL | BD Biosciences | 352099 | |
| Filtro de 0,2 μm | Nalge Nunc international | 194-2520 |
Referencias
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125
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Reimpresiones y permisos
