El sistema nervioso stomatogastric (STNS) del cangrejo de Jonás ( C. boreal) Se puede utilizar para electrofisiología, inmunohistoquímica y estudios en cultivos celulares. La extracción STNS se realiza en dos partes: la disección fina y gruesa.
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Artículo de método
Cáncer de Borealis Stomatogastric disección del sistema nervioso
En este artículo
Resumen
Resumen
El ganglio stomatogastric (STG) es un excelente modelo para el estudio de las interacciones celulares y la red, ya que contiene un número relativamente pequeño de las células (aproximadamente 25 en C. borealis), que están bien caracterizados. Las células de la STG exhiben una amplia gama de productos y son responsables de las acciones motrices del estómago. El estómago contiene el molino gástrico, que descompone los alimentos con tres dientes internos, y el píloro, que filtra los alimentos antes de llegar al intestino. El STG produce dos salidas para controlar el ritmo del molino gástrico y el píloro conocido como generadores de patrones centrales (GPC). Cada celda de la STG se puede participar en uno o ambos de estos ritmos. Estas GPC permiten el estudio de la neuromodulación, la homeostasis, la variabilidad celular y de redes, desarrollo de redes, y la recuperación de la red.
La disección del sistema nervioso stomatogastric (STNS) del cangrejo de Jonás (cáncer borealis) se realiza en dos partes: la disección fina y gruesa. En la disección bruto de todo el estómago se diseca del cangrejo. Durante la disección fina del STNS se extrae del estómago usando un microscopio de disección y la disección de micro-herramientas (ver figura 1). El STNS incluye la STG, el ganglio esofágico (OG), y los ganglios de la comisura (COG), así como los nervios que inervan los músculos del estómago. Aquí, se muestra cómo realizar una disección completa de los STNS en la preparación de un experimento de electrofisiología en las células de la STG se registrará a partir de la célula y los nervios periféricos se utilizan para las grabaciones extracelular. La técnica adecuada para encontrar los nervios deseada se muestra, así como nuestra técnica de desheathing el ganglio para revelar la somata y neuropilo.
Protocolo
1. La disección bruto
- Coloque un cangrejo en hielo durante 30 minutos para calmar los sistemas sensoriales y motoras del animal. Lo rodean por todas partes con hielo. Se deben usar guantes al manipular el cangrejo.
- Prepararse para la disección bruto por colocar la bandeja de disección y las herramientas que va a utilizar. Gubias, tijeras de corte de hueso, pequeñas tijeras, pinzas dentadas, una espátula con un borde afilado, un plato negro Sylgard recubiertos, y los pernos de insectos son necesarios.
- Quitar el cangrejo del cubo de hielo por sus patas traseras para evitar pellizcos y colocarlo en la bandeja de disección.
- Quitar....
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Discusión
La disección STNS es el primer paso en la realización de un experimento de electrofisiología o inmunohistoquímica, o para la obtención de células para el cultivo celular. Independientemente del experimento previsto, la disección bruto se mantendrá sin cambios. Sin embargo, la disección fina puede variar. Es importante planificar de antemano que las células y los nervios que va a grabar desde. La mayoría de las neuronas en el STG tienen procesos que inervan al menos un músculo en el estómago (ver figura 2) y se clasifica.......
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Agradecimientos
Queremos agradecer a los miembros del Laboratorio de Marder. Agradecemos a nuestro asesor, el Dr. Marder Eva, por su apoyo y aliento. Esta investigación fue financiada por el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Apoplejía Becas NS y NS-17813-058110.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard negro 170 | Otro | Dow Corning | 170 | Diseción gruesa |
| Tijeras finas | Cirugía | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Alfileres para insectos tamaño 6 | Cirugía | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Tijeras Mayo | Cirugía | Fine Science Tools | 14110-17 | |
| Microespátula | Cirugía | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | |
| Rongeur | Cirugía | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Pinzas para tejidos | Cirugía | Fine Science Tools | 11021-12 | |
| Alambre fino de tungsteno (diámetro de 0,001 in) | Cirugía | California Fine Wire Company | Diseción fina | |
| Pinzas n.º 5 | Cirugía | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Minutien Nadel | Cirugía | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Tijeras de resorte Moria (cuchillas de 7 mm) | Cirugía | Fine Science Tools | 15370-52 | |
| Placa de Petri (100x15 mm) | Otro | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Soporte para alfileres | Cirugía | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| Pinzas súper finas n.º 5SF | Cirugía | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | Otro | Dow Corning | 182 | |
| Agujas de tungsteno | Cirugía | Fine Science Tools | 10130-05 | |
| Microscopio de disección | Microscopio | Wild | MC3 | Varios |
| Cangrejo Jonah (C. borealis) | Animal | Commercial Lobster |
Referencias
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , MIT Press. Boston. (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.<....
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Reimpresiones y permisos
