Trasplante de lentes en el pez cebra y su aplicación en el análisis de mutantes de ojos

Resumen

Lente del desarrollo implica interacciones con otros tejidos. Varios mutantes ojo de pez cebra se caracteriza por un tamaño anormalmente pequeño lente. Aquí se demuestra un experimento de trasplante de lentes para determinar si este fenotipo se debe a causas intrínsecas o interacciones defectuosas con los tejidos que rodean a la lente.

Resumen

La lente tiene un papel importante en el desarrollo de la copa óptica ^[1,2]. Utilizando el pez cebra como modelo, cuestiones relacionadas con el desarrollo del objetivo se puede abordar. El pez cebra es útil para estudios genéticos, debido a varias características ventajosas, como el tamaño pequeño, alta fecundidad, el ciclo de vida corto, y la facilidad de cuidado. El desarrollo de la lente se produce con rapidez en el pez cebra. Por 72 HPF, la lente de pez cebra es funcionalmente maduro ^[3]. La abundancia de recursos genéticos y moleculares están disponibles para apoyar la investigación en el pez cebra. Además, la similitud de los ojos de pez cebra a los de otros vertebrados, proporciona la base para su uso como un excelente modelo animal de los defectos humanos ^[4-7]. Varios mutantes del pez cebra presentan anormalidades del objetivo, incluyendo altos niveles de muerte celular, que en algunos casos conduce a una completa degeneración de los tejidos del cristalino ^[8].

Para determinar si las anomalías de lentes se deben a causas intrínsecas o defectuosa la interacción con los tejidos circundantes, el trasplante de una lente en un ojo mutante de tipo salvaje se lleva a cabo. El uso del fuego pulido agujas de metal, lentes de mutantes o de tipo salvaje son cuidadosamente disecados de los animales donantes, y se introducen en la máquina. Para distinguir los tejidos de tipo salvaje y mutante, una línea transgénica es utilizada como donante. Esta línea expresa de membrana buenas prácticas agrarias en todos los tejidos, incluyendo la lente. Esta técnica de trasplante es una herramienta esencial en los estudios de los mutantes de la lente de pez cebra.

Protocolo

Parte 1: Preparación de los embriones

En este protocolo, vamos a utilizar el símbolo jj ^xy para referirse a un pez cebra mutante objetivo hipotético.

1. Cepas de pez cebra se mantienen en condiciones estándar de instalación de los peces a 28,5 C en un ciclo de 14h light/10h oscuro.
2. Por la noche, los hombres y las mujeres el lugar del pez cebra cepa ^xy jj: AB / TU, tg (mGFP) en un tanque con un divisor para separar el uno del otro. La descendencia de este cruce se expresa el transgén GFP en todos los tejidos, y se utilizarán como donantes. Al mismo tiempo, utilizar el mismo procedim....

Discusión

Varios pasos requieren una atención especial durante el trasplante de la lente.

1. Afiladas agujas: Es mejor preparar varias agujas antes de la realización del objetivo del trasplante, y la punta de la aguja debe ser lo más fina posible. Una aguja más gruesa lágrima más tejido debido a su mayor diámetro, provocando una falla en el ojo para curar.
2. La organización de los embriones: Justo antes de que el trasplante debe colocar los embriones manera que se acueste de costado. Cuando el posicionamiento, e.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Alambre de tungsteno de 0,1 mm de diámetro	A Johnson Matthey	45086
Agarosa (punto de fusión bajo)	Sigma-Aldrich	39346
Capilares de vidrio borosilicatado	World Precision Instruments, Inc.	TW 100-4
Pinzas	Dumont	11252-30
Pipeta de Pasteur	Fisher Scientific	13-678-20C
Bomba para pipeta	Fisher Scientific	13-683C
Placa de Petri	Cardinal Health	D1906
Penicilina-estreptomicina	GIBCO, by Life Technologies	15140-122